一、水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响（论文文献综述）
潘杨[1]（2021）在《黄芪水蛭有效成分联合干预对巨噬细胞内脂质积聚的作用机制研究》文中研究指明目的:近年来,冠状动脉粥样硬化性心脏病已成为影响人类健康的主要慢性疾病之一,大量中药复方的临床应用在治疗冠心病方面取得了显着疗效·,在此基础上,探究复方中主要药物的有效成分对于研发治疗冠心病的新药具有重要意义。动脉粥样硬化是冠心病的主要病理基础,巨噬细胞泡沫化的形成和凋亡贯穿整个动脉粥样硬化的发展过程中。因此本研究用OX-LDL刺激小鼠Raw264.7细胞建立动脉粥样硬化泡沫细胞模型,选用益气代表药黄芪的有效成分黄芪多糖和逐瘀通络代表药水蛭的有效成分水蛭素进行联合干预,进而从细胞层面揭示黄芪多糖和水蛭素联合干预对OX-LDL诱导巨噬细胞泡沫化脂质积聚和凋亡的作用机制,为开发治疗动脉粥样硬化的临床新药提供科学的实验依据。方法:选择小鼠Raw264.7细胞株进行传代培养,100ug/ml OX-LDL刺激Raw264.7细胞24小时建立泡沫细胞模型。通过CCK-8筛选水蛭素和黄芪多糖安全药物浓度,设立水蛭素低中高剂量组分别为10ug/ml、20ug/ml和40ug/ml,黄芪多糖低中高剂量组分别为25ug/ml、50ug/ml和100ug/ml,实验设立空白组、模型组、药物低中高剂量组,分别通过油红O染色和氧化酶法检测OX-LDL诱导巨噬细胞内胆固醇含量,从而确定药物最佳有效浓度。将最佳有效浓度的水蛭素和黄芪多糖进行联合干预,将实验分为空白组、模型组和药物联合干预组,利用流式细胞仪检测OX-LDL诱导巨噬细胞早期、晚期和总凋亡率;用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位的变化;蛋白印迹法检测抗凋亡蛋白Bcl-2以及促凋亡蛋白Caspase3和Bax的表达水平,并进行分析。结果:1.CCK-8检测发现,随着水蛭素药物浓度的增加对巨噬细胞生长有显着抑制作用,与正常组细胞相比较,水蛭素药物浓度大于80μg/ml时细胞增长受到抑制,有统计学差异（P<0.05）,故选择10、20、40μg/ml浓度的水蛭素溶液为低、中、高不同的药物剂量组;黄芪多糖药物浓度的增加对巨噬细胞的生长具有增殖作用,结合相关文献我们选择25、50、100μg/ml浓度的黄芪多糖溶液为低、中、高不同的药物剂量组。2.将Raw264.7细胞与100ug/ml OX-LDL共培养24h之后,OX-LDL能够刺激Raw264.7细胞转化为泡沫细胞,与正常组相比较,模型组细胞内的胆固醇的含量明显增加,有统计学意义（P<0.05）;药物低中高剂量组分别同模型组相比较发现,水蛭素40ug/ml高剂量组和黄芪多糖100ug/ml高剂量组干预后,胆固醇的含量分别较低中剂量组降低更明显（P<0.05）,胞浆中红色脂滴减少,油红O染色效果更弱。3.水蛭素40ug/ml和黄芪多糖100ug/ml联合干预组较单独水蛭素40ug/ml剂量组、黄芪多糖100ug/ml剂量组降低胆固醇含量更明显,有统计学意义（P<0.05）,油红O染色效果较弱。4.与正常组相比较,模型组能够显着增加OX-LDL诱导的巨噬细胞早期、晚期以及总凋亡率,具有统计学意义（P<0.01）;水蛭素40μg/ml和黄芪多糖100μg/ml联合干预组与模型组相比较,可以显着降低OX-LDL诱导的巨噬细胞早期凋亡率和总凋亡率,具有统计学意义（P<0.01）。5.与正常组相比较,模型组巨噬细胞经OX-LDL刺激后线粒体膜电位下降,具有统计学意义（P<0.01）;与模型组相比较,水蛭素40μg/ml和黄芪多糖100μg/ml联合干预组上调巨噬细胞的线粒体膜电位,具有统计学意义（P<0.01）。6.与正常组相比较,模型组细胞内Caspase3蛋白表达量和Bax蛋白表达量显着上升,Bcl-2蛋白表达量显着下降,有统计学意义（P<0.01）;与模型组相比较,水蛭素40μg/ml和黄芪多糖100μg/ml药物联合干预后,细胞内Caspase3和Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高,具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.水蛭素40ug/ml、黄芪多糖100ug/ml和两者联合干预都降低巨噬细胞内的脂质积聚,但水蛭素40ug/ml和黄芪多糖100ug/ml联合干预后疗效优于单独药物作用。2.水蛭素40ug/ml和黄芪多糖100ug/ml联合干预可降低OX-LDL诱导巨噬细胞凋亡率,其治疗AS作用机制可能与调控线粒体膜电位和相关促凋亡蛋白Caspase3、Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。
李芬芬,尹忠诚,张颖[2]（2020）在《水蛭素对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响》文中研究说明目的探讨水蛭素对高磷诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）钙化的影响及机制。方法采用β-甘油磷酸诱导体外培养的大鼠VSMCs,建立钙化模型,加入不同浓度水蛭素进行干预,实验设置5个组:对照组、钙化组、低浓度水蛭素组、中浓度水蛭素组、高浓度水蛭素组。通过茜素红S染色及细胞内钙含量检测各组细胞钙化情况;用qRT-PCR及Western blotting检测各组细胞α-SMA、RUNX2、BMP2的mRNA和蛋白表达量及细胞内碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）活性以测定各组细胞转分化情况。结果与对照组比较,高磷诱导的钙化组中茜素红S染色可见明显橘红色钙化结节,钙含量检测显示细胞内钙含量明显增加（P<0.01）,细胞内ALP活性升高（P<0.01）,α-SMA的mRNA及蛋白表达量降低（P<0.01）,RUNX2、BMP2的mRNA及蛋白表达量升高（P<0.01）。与钙化组比较,水蛭素组茜素红S染色结果显示的橘红色钙化结节呈浓度依赖性减少,细胞内钙含量及ALP活性呈浓度依赖性降低（P<0.05或P<0.01）,α-SMA的mRNA及蛋白表达量呈浓度依赖性升高（P<0.05或P<0.01）,RUNX2、BMP2的mRNA及蛋白表达量呈浓度依赖性降低（P<0.05或P<0.01）。结论水蛭素通过抑制高磷诱导大鼠VSMCs转分化来减轻VSMCs的钙化,其机制可能与上调α-SMA的表达,下调ALP活性、RUNX2及BMP2的表达有关。
王渊[3]（2020）在《基于PI3K/AKT/mTOR自噬信号通路探讨络风宁0号对HCASMC增殖的影响》文中进行了进一步梳理背景支架内再狭窄（ISR）是冠心病介入领域的一个难题,药物涂层球囊（DCB）和新一代的药物洗脱支架（DES）仍然存在一定的局限和不足,生物可降解支架（BRS）作为经皮冠状动脉介入治疗（PCI）领域的第四次革命,为患者带来了福音。导师王显教授早期基于心脉病证络风内动病机理论,结合中药配伍减毒原理及现代药理研究进展,选择红豆杉的单体成分紫杉醇和水蛭的单体成分水蛭素组成络风宁0号方用于支架涂层的探索。并陆续成功研发了络风宁0号复方中药单体涂层支架和涂层球囊。现在我们将进一步优化后的络风宁0号支架涂层复合物（紫杉醇和比伐卢定）用于生物可降解支架的研发。目的建立人冠状动脉平滑肌细胞（HCASMC）增殖模型,从自噬角度切入,锁定PI3K/AKT/mTOR信号通路,探究络风宁0号支架涂层复合物抗支架内再狭窄的可能机制,为复方中药单体生物可降解支架的研发提供新思路。方法1.HCASMC的体外培养将购买的HCASMC用其配套培养基经规范复苏和传代,建立第4-6代稳定的HCASMC作为后续细胞研究的载体。2.络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导的HCASMC增殖的影响（1）建立凝血酶诱导HCASMC增殖模型选用第4-6代的HCASMC作为研究载体。用不同浓度的凝血酶（0.01 NIH units/mL、0.05 NIH units/mL、0.1 NIH units/mL、0.5 NIH units/mL、1 NIH units/mL、5 NIH units/mL、10NIH units/mL、20NIH units/mL）干预 HCASMC 不同时间（24h、48 h、72 h）,采用CCK-8法对干预后的细胞活力进行检测,摸索出最大程度促进HCASMC增殖的凝血酶浓度和干预时间。（2）摸索络风宁0号支架涂层复合物干预HCASMC的无毒性浓度范围选用第4-6代的HCASMC作为研究载体。用不同浓度配比的络风宁0号支架涂层复合物,即1μmol/L 的紫杉醇配比不同浓度的比伐卢定（1/256 mg/mL、1/128 mg/mL、1/64 mg/mL、1/32 mg/ml、1/16 mg/mL、1/8 mg/mL、1/4 mg/mL、1/2 mg/mL、1 mg/mL）干预HCASMC4h,采用CCK-8法对干预后的细胞活力进行检测,摸索出使细胞活力保持90%以上,且对细胞无明显抑制作用的络风宁0号的浓度配比。（3）筛选络风宁0号支架涂层复合物抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖的最有效浓度选用第4-6代的HCASMC作为研究载体。先按照前面实验摸索的造模条件建立凝血酶诱导HCASMC增殖模型,再用前面实验摸索出的无毒性浓度范围的络风宁0号对模型进行干预,采用CCK-8法对干预后的细胞活力进行检测,筛选出能够最大程度抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖的络风宁0号浓度配比。3.探究络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导的HCASMC增殖过程中自噬及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响用前面实验得到的络风宁0号支架涂层复合物的最有效浓度对凝血酶诱导的HCASMC 进行干预,采用 Western blot 法检测 LC3、Beclin1、p62、PI3K、AKT、mTOR的蛋白表达变化,RT-qPCR法检测PI3K、AKT、mTOR的mRNA表达变化。结果1.经传代培养至4-6代的HCASMC生长状态良好,可用于后续实验。2.络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导的HCASMC增殖的影响（1）建立凝血酶诱导HCASMC增殖模型不同浓度的凝血酶干预HCASMC24 h后的CCK-8结果显示,随着凝血酶浓度的增加,细胞活力逐渐增强,两者成正相关,当凝血酶浓度达到0.05 NIH units/mL时,其对细胞开始显现出明显的促增殖作用,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）;不同浓度的凝血酶干预HCASMC48 h后的CCK-8结果显示,与对照组相比,细胞活力均增强。随着凝血酶浓度的增加,从浓度为0.01 NIH units/mL开始,其对细胞显现出明显的促增殖作用,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。当凝血酶浓度达到1 NIH units/mL时,细胞活力达到最强,随后细胞活力随着凝血酶浓度的增加而减弱;不同浓度的凝血酶干预HCASMC72 h后的CCK-8结果显示,不同浓度的凝血酶作用细胞72 h后,均对细胞显现出明显的促增殖作用,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。细胞活力随着凝血酶浓度的增加,先增强后减弱,在凝血酶浓度为1 NIH units/mL时,细胞活力达到最强。考虑到后续实验需在模型的基础上进一步实施,故1 NIH units/mL的凝血酶作用HCASMC48 h可作为凝血酶最大程度促进HCASMC增殖的建模条件。（2）络风宁0号支架涂层复合物干预HCASMC的无毒性浓度范围不同浓度配比的络风宁0号支架涂层复合物干预HCASMC4 h后对细胞活力产生不同程度的抑制作用,细胞活力随着比伐卢定浓度的增加而减弱,两者成负相关。当1μmol/L的紫杉醇配比1/64 mg/mL的比伐卢定时,络风宁0号支架涂层复合物对HCASMC的生长开始显现出明显的抑制作用,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。当络风宁0号中比伐卢定的浓度不大于1/128 mg/mL时,其对HCASMC的生长无明显抑制作用,并且可使细胞活力保持90%以上,此时紫杉醇（1μmol/L）和比伐卢定（0 mg/mL-1/128 mg/mL）的浓度配比可作为络风宁0号支架涂层复合物干预HCASMC的无毒性浓度范围。（3）络风宁0号支架涂层复合物抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖的最有效浓度不同浓度配比的络风宁0号支架涂层复合物不同程度抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖,与模型组相比,细胞活力随着比伐卢定浓度的增加而减弱,两者成负相关。当1μmol/L的紫杉醇配比1/256 mg/mL的比伐卢定时,络风宁0号支架涂层复合物开始明显抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖,与模型组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。与比伐卢定浓度为1/256 mg/mL的络风宁0号相比,比伐卢定浓度为1/128mg/mL的络风宁0号对凝血酶诱导的HCASMC增殖的抑制作用更显着,差异有统计学意义（P<0.05）,可作为络风宁0号支架涂层复合物抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖的最有效浓度,即1 μmol/L的紫杉醇配比1/128 mg/mL的比伐卢定。3.络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导的HCASMC增殖过程中自噬及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响Western blot结果显示,与对照组相比,凝血酶造模组中LC3Ⅱ/Ⅰ的比值和Beclin1的蛋白表达明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,p62、PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达显着升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比络风宁0号组中LC3Ⅱ/Ⅰ的比值和Beclin1的蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）,p62、PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达显着降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,凝血酶造模组中PI3K、AKT及mTOR的mRNA表达显着增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,络风宁0号组中PI3K、AKT及mTOR的mRNA表达显着降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1.凝血酶可能通过上调PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制自噬,进而促进HCASMC的增殖。2.络风宁0号支架涂层复合物可能通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路促进自噬,进而抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖,发挥抗支架内再狭窄的作用。
魏一鸣[4]（2020）在《基于AMPK/mTOR自噬信号通路对络风宁0号方抗HCASMC增殖作用机制的探索》文中指出背景近年来我国居民心血管疾病的患病率和死亡率居高不下,急性冠脉综合征因发病急、病情危重而严重影响患者的生存。早期积极的经皮冠状动脉介入治（percutaneous coronary intervention,PCI）已成为急性冠脉综合征的治疗标准和常规,而PCI术后难以忽视的再狭窄问题的发生仍给患者带来痛苦,针对再狭窄问题而几经迭代的支架也不能让人完全满意。进一步开发支架材料和技术革新,进一步探寻抗PCI术后再狭窄的解决方案,是临床与科研共同努力的方向。我团队一直致力于急性冠脉综合征的中西医结合治疗,导师王显结合理论与临床,创新性地提出急性冠脉综合征“络风内动”病机理论,并在“祛风通络”治法的指导下,研发出“络风宁0号方”,由紫杉醇和水蛭素构成,以制备中药单体复合物涂于支架,用于防治PCI术后再狭窄,共奏解毒活血、祛风通络之功效。络风宁0号方已经过实验证实能够抑制平滑肌细胞增殖,抗PCI术后管壁再狭窄的发生。但其细胞分子层面的作用机制仍不明朗,亟待进一步探寻。现代研究表明细胞自噬水平可影响平滑肌细胞的生长,本课题选择经典自噬信号通路AMPK/mTOR为切入点,探索络风宁0号方抗人冠状动脉平滑肌细胞（HCASMC）增殖可能的作用机制。目的为探索络风宁0号方抗HCASMC增殖可能的作用机制,聚焦于AMPK/mTOR自噬信号通路,观察对比络风宁0号方抗HCASMC增殖时AMPK/mTOR自噬信号通路关键位点蛋白发生了什么变化,分析该信号通路对络风宁0号方抗HCASMC增殖作用可能产生的影响,讨论络风宁0号方抗HCASMC细胞增殖作用可能的作用机制,为中医药新型载药途径的探索助力,也为中医药深入临床防治急危重症做出贡献。方法1.体外培养HCASMC:从原代HCASMC起进行细胞培养、换液、传代及冻存操作,培养出4-6代生长稳定的HCASMC为实验细胞。2.建立血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的HCASMC增殖模型:通过MTT实验分析细胞增殖效果,筛选出合适的PDGF诱导增殖方案。3.摸索络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物对HCASMC生长的无毒性配比浓度范围:取红豆杉的单体成分紫杉醇,和水蛭素的衍生物比伐卢定组成络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物,通过MTT实验筛选细胞活力达90%以上的药物浓度范围;4.确定络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物抗HCASMC增殖的有效性配比浓度:在PDGF促平滑肌细胞增殖的基础上,通过MTT实验,在“紫杉醇-比伐卢定”复合物无毒性配比浓度范围之内,确定其有效抗细胞增殖的浓度配比;5.探究络风宁0号“紫杉醇-比伐卢定”复合物对PDGF诱导HCASMC增殖过程中AMPK/mTOR自噬信号通路的影响:通过Western Blot实验对比自噬信号通路关键位点蛋白的变化,尝试分析络风宁0号“紫杉醇-比伐卢定”复合物抗细胞增殖可能的作用机制。结果1.PDGF诱导HCASMC增殖模型的造模方案:通过MTT实验分析不同浓度PDGF刺激下细胞的增殖率,发现在PDGF浓度达40ng/ml时平滑肌细胞增殖率则达到15%以上,与空白对照组相比差异显着,具有统计学意义（P<0.05）。选定PDGF浓度为40ng/ml、刺激时间为24h为HCASMC增殖模型的造模方案。2.络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物对HCASMC生长的无毒性配比浓度范围:通过MTT实验分析不同配比“紫杉醇-比伐卢定”复合物对细胞生长的影响,发现细胞在“紫杉醇1umol/L+比伐卢定1～5ug/L”浓度范围内的活力>90%,与空白对照组相比差异显着,具有统计学意义（P<0.05）,认定其为HCASMC生长的无毒性范围。3.络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物抗HCASMC增殖的有效性配比浓度:通过MTT实验,在PDGF刺激细胞增殖的条件下,在无毒性浓度范围内,发现当紫杉醇1umol/L+比伐卢定2ug/L时,中药复合物抑制PDGF的增殖的作用最强,与造模组相比差异显着,具有统计学意义（P<0.05）,选定其为抗HCASMC增殖的有效性配比浓度。4.络风宁0号“紫杉醇-比伐卢定”复合物对PDGF诱导HCASMC增殖过程中AMPK/mTOR自噬信号通路的影响:通过显微镜观察到加入“紫杉醇-比伐卢定”后,因PDGF刺激而出现的增殖现象受到了一定程度的抑制;Western Blot实验结果显示,对照组、造模组和造模加药组所表达的检测蛋白含量均不相同,组间差异显着,具有统计学意义（P<0.05）;从检测蛋白含量变化来看,AMPK、ULK1、LC3B、Beclin 1的变化趋势一致,与对照组相比,造模组蛋白含量下降,造模加药组较造模组蛋白含量升高,但低于对照组;mTOR与上述检测蛋白变化趋势相反,与对照组相比,造模组蛋白含量升高,造模加药组较造模组蛋白含量下降,但高于对照组。说明本实验中造模后AMPK与ULK1被抑制,mTOR功能被促进,自噬水平降低,细胞增殖,而加入络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”后AMPK与ULK1功能被促进,mTOR被抑制,自噬水平升高,抑制细胞增殖。结论1.络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物可有效抑制人冠状动脉平滑肌细胞增殖。2.络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物可能通过AMPK/mTOR自噬信号通路调节细胞自噬水平而起到抗细胞增殖作用。3.络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物作用于AMPK/mTOR自噬信号通路,上调AMPK与ULK1活性,下调mTOR活性,提高细胞自噬水平,抑制PDGF启动的细胞增殖反应。
杨若聪[5]（2020）在《水蛭素改善糖尿病型ED的网络药理学和在体药效评价研究》文中指出研究背景:糖尿病型勃起功能障碍（diabetic erectile dysfunction,DED）是一种基于糖尿病病理基础上的、病理过程复杂的生殖系统疾病。该疾病以男性的生殖器在性生活过程中无法勃起或无法充分勃起,从而未能完成性生活为主要特点,严重影响夫妻双方生活质量。目前,临床中面临缺乏系统的DED诊断策略、可用干预途径有限、可选择药物不足等现状,导致患者常常无法从治疗中得到充分的获益和令人满意的临床结果。因此,对DED诊断体系的研究及相关治疗策略的补充,成为干预DED患者的迫切需求。中医诊疗体系具有辩证性、整体性的特点,对于复杂性疾病具有一定的优势,其中的活血化瘀法,为中医临床中干预DED的有效诊疗思路之一。水蛭作为临床常用药物,已被用于DED患者的治疗。然而,对于水蛭中主要有效成分水蛭素在DED治疗中的功能和作用机制,尚缺乏系统的研究和报道。研究目的:基于中国中西医结合学会男科专业委员会于2016年颁布的《勃起功能障碍中西医结合诊疗指南（试行版）》（本章以下内容称《指南2016》）,建立DED的疾病网络,探索中医体系中有效的干预治则,并结合体内实验,评价水蛭素改善DED的药效作用和作用机制。研究方法:①基于《指南》,通过SymMap和比较毒物基因组学数据库（the comparative toxicogenomicsdatabase,CTD）,建立以中医诊断体系为基础的疾病网络,并且通过疾病网络中相关靶点内容,在SymMap中反向检索对于DED有效的干预药物;②基于糖尿病型小鼠模型,结合勃起功能评价方法、衰老相关行为学评价、脏器指数等方法指标,评价水蛭素对8周、12周DED小鼠模型的改善效果;③取材小鼠的阴茎组织,通过转录组学的技术手段,检测8周、12周正常两个时间点上正常对照组、模型组、水蛭素干预组阴茎组织转录组表达水平的异同,通过差异表达、GO和KEGG富集分析、疾病网络映射等过程,对水蛭素在相同时间点的干预效果进行评价。同时,将8周和12周两个时间点上以时间为维度,进行相同组别的纵向比较,动态分析DED疾病模型的病理变化及水蛭素在DED不同阶段的干预效果;④基于虚拟对接、免疫共沉淀、荧光定量PCR、髓过氧化氢酶（myeloperoxidase,MPO）活性检测体系等实验方法,对MPO作为水蛭素潜在靶点的可能性进行评价,并且通过检测MPO的底物低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）和其催化后的高级糖化终产物（advanced glycation end products,AGEs）氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）的含量,确证水蛭素基于MPO干预DED的效果。研究结果:①本实验建立起含有59个无重复靶点的DED疾病网络图,并且将靶点输入SymMap,得到有37个有对应药物的治疗靶点,进而通过对药物种类出现频数和绝对出现频数的计算,发现活血化瘀药物为干预DED主要的有效治疗药物类型之一,其所对应的活血化瘀法可能为DED的有效治则之一。②通过链脲佐菌素（streptozocin,STZ）的注射,并且经过8周、12周的饲养,经血糖监控和勃起功能测试确认,我们成功复制了小鼠DED模型,并且发现水蛭素对8周、12周两个时间点上DED模型小鼠的勃起功能均具有改善效果。进一步的脏器指标显示,水蛭素能明显改变胸腺的脏器指数和心脏胫骨比指数;同时,在行为学观测实验中,水蛭素能极显着地改变DED模型造成的损失,提升动物的平衡能力、抓握能力和耐力,推测水蛭素的作用,可能与减缓DED模型的衰老进程有关。③转录组分析结果显示,水蛭素对于8周DED的动物模型,其干预效果主要体现为改变能量代谢途径和氧化应激损伤环境;对于12周DED的动物模型,其干预效果主要体现为改变炎症应答和对离子通道的调节。同时,将转录组的结果映射至DED疾病背景网络中,并结合映射基因的生物学意义结果显示,推测MPO可能为水蛭素的主要作用靶点。④虚拟对接和水蛭素-MPO免疫共沉淀结果显示,水蛭素与MPO具有相互作用。进而考察水蛭素对MPO的影响实验结果显示,水蛭素不影响MPO的表达,但显着影响MPO的活性,并且显着影响MPO催化的AGEs中的ox-LDL的含量。实验结论:活血化瘀法为DED治疗的有效治则之一,该治则指导下的药物水蛭中的主要成分水蛭素能够通过抑制MPO活性改善DED造成的ED症状,调节DED造成的衰老进程。
王凯[6]（2020）在《从NLRP3炎性小体探讨络风宁0号对HCAEC的保护作用及机制》文中指出背景支架内再狭窄（ISR）和支架内血栓形成（ST）是经皮冠脉介入领域的两大难题,二者发生的机制复杂,目前认为二者的发生均与支架对血管的机械性损伤、血管内皮损伤、血管舒缩功能障碍、金属异物和表面涂层聚合物导致的局部炎症等有关,各种因素共同导致的以人冠脉平滑肌细胞（HCASMC）病理性增生为核心的新生内膜形成是ISR的关键机制,而抗增殖药物导致的再内皮化延迟则是ST发生的重要原因。因此,为减少金属支架植入对血管的影响,“介入无植入”理念的产物——药物涂层球囊（DCB）逐渐受到介入医师青睐;另一方面,目前临床应用的药物洗脱支架（DES）和DCB表面所载药物皆为单一的抗细胞增殖药物,对细胞增殖活性的抑制无特异选择性,为减少药物对人冠脉内皮细胞（HCAEC）的损伤,制备出“内皮友好型”支架和球囊,新型涂层药物的研发也成为热点。但目前由于缺乏大规模的随机对照试验,除ISR病变外,其他类型冠脉病变应用DCB治疗仍需要更多循证医学证据支持;同时单一组分药物的研发目前处于一个瓶颈期,中医方剂中多药物合理配伍具有“增效减毒”的优点,或可为新型涂药物的研发提供思路。导师王显教授基于心脉病症络风内动理论将红豆杉和水蛭的单体有效成分——紫杉醇、比伐卢定（重组水蛭素）组成络风宁0号方,用于支架和球囊所载药物的研发。前期研究中已经证实络风宁0号中药单体复合物可通过抑制炎症反应降低HCASMC的炎性增殖水平,但其对HCAEC的保护作用的机制尚未进一步研究,而HCAEC的损伤和死亡是局部炎症反应和血管再内皮化延迟的重要因素,因此我们以HCAEC为研究载体,探索络风宁0号对HCAEC的保护作用及对损伤过程中NLRP3炎性小体的影响,为进一步研究络风宁0号涂层球囊的研发提供细胞层面的理论依据。目的本课题一方面通过对现有文献进行荟萃分析,探讨DCB在小冠状动脉（SCV）原发病变中的有效性和安全性;另一方面筛选络风宁0号中两种单体成分——紫杉醇和比伐卢定的最佳浓度配比,并对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的HCAEC损伤模型进行干预,观察络风宁0号对HCAEC的保护作用及对损伤过程中NLRP3炎性小体的影响,从炎症和细胞焦亡的角度探讨络风宁0号对HCAEC的保护作用,为研发新一代内皮友好型球囊提供理论依据。方法第一部分DCB和DES治疗SCV原发病变的疗效和安全性比较通过对9个医学数据库进行检索,筛选出符合标准的随机对照试验进行meta分析。第二部分络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用及机制实验一筛选络风宁0号中紫杉醇和比伐卢定最佳浓度配比选用第4～6代HCASMC和HCAEC作为研究载体。通过设立一系列不同的紫杉醇和比伐卢定的浓度配比,对两种细胞进行干预,采用MTT法对干预后的细胞增殖活性进行检测,筛选出可明显抑制HCASMC活性但对HCAEC无影响（以细胞相对活性90%作为判断阈值）的配比浓度。实验二络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用及机制选用第4～6代HCAEC作为研究载体。通过设立一系列不同的AngⅡ浓度,对HCAEC进行干预,采用MTT法对干预后的细胞增殖活性进行检测,筛选出可明显抑制HCAEC活性（以细胞相对活性70%作为判断阈值）的AngⅡ浓度。实验三络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用采用确定的络风宁0号最佳药物配比浓度对AngⅡ诱导的HCAEC损伤模型进行干预,LDH释放法检测各组细胞活性,并采用HO-PI免疫荧光染色对细胞死亡情况进行检测。实验四基于NLRP3炎性小体探讨络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用的机制采用确定的络风宁0号最佳药物配比浓度对AngⅡ诱导的HCAEC损伤模型进行干预,LDH释放法检测各组细胞活性,ELISA、RT-qPCR、Western Blot检测NLRP3炎性小体通路中主要信息传递位点、下游炎症产物的基因和蛋白表达水平的影响,并采用HO-PI免疫荧光染色对细胞死亡情况进行检测。结果第一部分DCB和DES治疗小冠状动脉原发病变的疗效和安全性比较通过对所检索的文献进行meta分析,结果提示在治疗SCV原发病变方面,单独应用DCB和DES具有类似的疗效和安全性,二者之间心血管事件（MACEs、TLR、MI和死亡）发生率相当。此外,单独应用DCB,在随访中血管造影结果如晚期血管丢失（LLL）和最小血管直径（MLD）方面表现较好。因此,单独应用DCB可能是治疗SCV原发病变的新选择。第二部分络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用及机制实验一筛选络风宁0号中紫杉醇和比伐卢定最佳浓度配比络风宁0号中紫杉醇的浓度为固定的1μmol/L,随着比伐卢定浓度的增高,对HCASMC和HCAEC活性的抑制程度加重与对照组相比差异明显（p<0.05）,抑制呈浓度依赖性,但对HCAEC的抑制程度明显低于HCASMC,当两种药物以紫杉醇1μmol/L+比伐卢定0.625mg/ml进行配比时,HCAEC的相对活性约为92%,HCASMC相对活性约为63%。实验二络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用及机制随着AngⅡ浓度的增高,对HCAEC活性的抑制程度加重,与对照组相比差异明显（p<0.05）,抑制呈浓度依赖关系,当AngⅡ浓度为10-5mol/L时,HCAEC的相对活性约为71.9%。实验三络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用1)LDH释放试验结果显示与对照组相比,模型组中LDH释放水平明显升高（p<0.05）,紫杉醇组和络风宁0号组LDH释放水平较模型组明显降低,且络风宁0号组降低更为明显（p<0.05）。2)HO-PI免疫荧光染色结果提示与对照组相比,模型组呈现强红色荧光,紫杉醇组和络风宁0号组中红色荧光较模型组明显减弱,络风宁0号组细胞存活数量优于紫杉醇组。实验四基于NLRP3炎性小体探讨络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用的机制1)ELISA结果显示与对照组相比,模型组中IL-1β和IL-18水平明显升高（p<0.05）,紫杉醇组和络风宁0号组IL-1β和IL-18释放水平较模型组明显降低,且络风宁0号组降低更为明显（p<0.05）。2)RT-qPCR结果显示与对照组相比,模型组中NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18基因表达水平明显升高（p<0.05）,紫杉醇组和络风宁0号组基因表达的水平较模型组明显降低,且络风宁0号组降低更为明显（p<0.05）。3)Western Blot结果显示与对照组相比,模型组中NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平明显升高（p<0.05）,紫杉醇组和络风宁0号组蛋白水平较模型组明显降低,且络风宁0号组降低更为明显（p<0.05）。结论1.在治疗冠脉小血管原发病变方面,单独应用DCB和DES具有相似的疗效性和安全性,而且DCB血管造影随访结果表现较好。因此,单独应用DCB可能是治疗SCV原发病变的较好选择。2.当紫杉醇1μmol/L配伍比伐卢定0.0625mg/ml做为络风宁0号最终药物浓度配比时,可达到不影响HCAEC活性的同时又能明显抑制HCASMC增殖的目的。3.络风宁0号通过对NLRP3炎性小体途径的抑制作用,减轻Ang Ⅱ诱导HCAEC产生的炎症损伤和细胞焦亡,对HCAEC产生保护作用,并且结果优于单独应用紫杉醇,可为新型DCB所载药物的研发提供了理论依据。
解举民,段卓,周小曼,袁超,苏振宏[7]（2020）在《水蛭素功能研究进展》文中指出水蛭素是从水蛭中提取的一种生物活性物质,具有极强的抗凝血和抗血栓功能。水蛭素在临床上被广泛用于治疗和预防各种心脑血管疾病,研究发现水蛭素对肿瘤、痛风、肾脏疾病等也具有较好的治疗效果。通过文献归纳总结,综述了水蛭素在心脑血管疾病、肿瘤、痛风、炎症、肾脏疾病中的功能,为水蛭素的临床药理学功能研究以及疾病预防与治疗提供指导,为水蛭素类药物研发提供参考。
谢思跃[8]（2020）在《天然水蛭素的抗氧化性及其在化妆品中的应用》文中研究说明目的:以菲牛蛭活体中提取的天然水蛭素（100AT-U/g）为研究对象,检测其抗氧化活性,结合配方设计理论研制成天然水蛭素乳液和眼霜,并探讨其抗衰老、改善眼部微循环等功效及机理,为其在化妆品领域的应用提供思路和实验参考。方法:1.采用Vit C阳性对照法,分别测定天然水蛭素清除DPPH·、·OH、·O2-的能力,分析其抗氧化活性。2.采用感官评价,高低温循环试验、离心试验、p H值和粘度等理化性能测试以及微生物挑战试验等方法评估乳液和眼霜,分析得到各体系的复配关系及天然水蛭素的添加量。3.采用模糊综合评判法评价乳液多因素正交试验和单因素试验结果,分析工艺条件对乳化效果的影响。4.采用客观仪器评估法,试验组为含3%天然水蛭素乳液、空白组为配方基质乳液,测量受试者使用乳液4h前后和28d前后MMV值和TEWL值的变化情况,评价天然水蛭素保湿抗皱功效。5.采用受试者自我评估法,将受试者随机分为两组:试验组和对照组,各20人,试验期间分别使用含3%天然水蛭素眼霜和含3%Vit C眼霜。试验周期为60天,采用问卷调查方式,让受试者对眼部细纹、皮肤平滑感、黑眼圈、浮肿4个指标进行自我评估,计算有效率。对比分析天然水蛭素与Vit C的实际应用效果。6.采用人体试验评估法,选取1名受试者的右眼为试验组,左眼为对照组,试验期间分别使用含3%天然水蛭素眼霜和市售某知名品牌同类眼霜。分别于0、10、20、30、40、50、60天测量眼袋大小,对比黑眼圈的深浅程度和眼部细纹减少量,同时采集使用前后的眼周照片。对比评价天然水蛭素抗衰老和改善微循环功效,并分析其作用机理。结果:1.天然水蛭素清除DPPH·、·OH和·O2-的IC50值分别为14.1mg/m L;4.2mg/m L;21.1 mg/m L(对照Vit C的IC50值分别为2.6μg/m L;0.43mg/m L;0.032mg/m L)。其抗氧化活性总体低于对照Vit C,其清除DPPH·和·O2-的能力均较Vit C低,但其清除·OH能力强,仅是极强Vit C的1/10倍。2.乳液各体系的用量配比关系:乳化体系选用大豆卵磷脂（1.0%）与赛比克-Montanov L（1.5%）;增稠体系选用小核菌胶（0.1%）与卡波940-精氨酸（0.2%）;防腐体系选用山梨酸钾（0.2%）与1,2己二醇（0.5%）;天然水蛭素的添加量不宜超过4.0%。眼霜增稠体系选用卡波940（0.30%）与精氨酸（0.30%）;防腐体系为馨酰酮（0.50%）与己二醇（0.50%）;天然水蛭素添加量为3.0%。该眼霜通过了防腐挑战试验,稳定性佳,感官评价（双盲）的8项指标均好。3.正交试验结果表明,影响乳液配方体系的因素依次为:均质时间>均质速度>乳化温度。结合均质时间的单因素试验,确定乳液最优工艺条件:乳化温度80℃,均质速度4000r/min,均质时间5min。4.空白对照组结果:试验组与空白组在4h内的MMV增长率和TEWL流失率的变化趋势基本一致,两者保湿性能在短时间内无显着差异。试验组在28d前后的MMV增长率为36.59%,明显高于对照组;TEWL流失率为-21.69%,明显低于对照组,表明天然水蛭素有长效的保湿性能,有抗氧化效果。5.Vit C对照组结果:相同添加量下,试验组减少眼部细纹、皮肤平滑感、改善黑眼圈、改善浮肿效果4个指标的有效率分别为65.0%、80.0%、45.0%、40.0%;Vit C对照组分别为35.0%、60.0%、15.0%、5.0%,试验组的抗衰老和改善微循环效果显着好于对照组,也说明了天然水蛭素抗氧化功效的在体应用效果较Vit C突出。6.市售对照组结果:试验组改善眼袋浮肿和减少细纹的效果明显优于对照组;两者均有改善黑眼圈的效果且差异不大。验证了天然水蛭素具有改善眼部微循环和抗衰老的功效,且与同类产品比较有一定优势。结论:1.天然水蛭素在单一反应体系上的抗氧化活性较Vit C差。2.天然水蛭素在化妆品体系的配伍性好、稳定性佳,但添加量不宜超过4.0%。3.在相同添加量下,天然水蛭素抗氧化功效的在体应用效果优于Vit C,化学法检测结果与在体应用效果存在差异。4.客观仪器评估、受试者自我评估和人体试验评估3个在体法的功效评价结果一致,表明天然水蛭素具有保湿抗皱、抗氧化、抗衰老、改善眼部微循环的功效。
李园媛[9]（2020）在《水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究》文中研究说明目的:通过水提法制备水蛭提取液,分别采用凝血酶间接检测提取液中水蛭素含量（根据2015版药典）和高分辨液质联用QE技术检测提取液成分,以确定水蛭提取液的主要成分。通过观察水蛭提取液对人视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma RB）WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响,验证水蛭提取液抑制WERI-RB-1细胞生长和侵袭的作用。通过水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor VEGF）、缺氧诱导因子-1a（hypoxia inducible factor-1a HIF-1a）、基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9 MMP-9）的影响及对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶（Phosphatidylinositol 3kinase/Protein Kinae B PI3K/AKT）通路的影响,阐明水蛭提取液抑制WERI-RB-1细胞可能的分子机制。通过观察水蛭提取液对人脐静脉内皮细胞（Human Vascular endothelial cells HUVEC）的活性影响及表达VEGF和血管内皮生长因子受体2（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 VEGFR2）的影响,以此来研究水蛭提取液抑制肿瘤血管生成的潜能。方法:1.水蛭提取液的制备和检测:水提法制备水蛭提取液,并利用凝血酶间接测定水蛭素的含量;高分辨液质联用-QE技术分析水蛭的主要成分。2.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响: 将WERI-RB-1细胞与不同浓度的水蛭提取液（0.02U/ml、0.04U/ml、0.08U/ml、0.16U/ml）共培养0、24、48、72h,经CCK-8筛选最佳药物干预浓度和时间点; 以0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度、48h为药物干预条件,采用流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响; 以2个实验浓度、48h为药物干预条件,采用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡的影响; transwell侵袭实验检测2个实验浓度对WERI-RB-1细胞侵袭作用的影响。对照组细胞仅在培养基中培养,无添加药物。3.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究: 0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,Elisa实验检测水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,RT-PCR检测水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达HIF-1a和MMP-9 m RNA水平的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,Western Blot检测蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达HIF-1a、MMP-9、PI3K、人磷酸化AKT蛋白（Human phosphorylated AKT protein p-AKT）蛋白含量的影响。对照组细胞仅在培养基中培养,无添加药物。4.水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响: 将HUVEC细胞与不同浓度的水蛭提取液（0.02U/ml、0.04U/ml、0.08U/ml、0.16U/ml）共培养0、24、48、72h,经CCK-8筛选最佳药物干预浓度和时间点; 0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度干预HUVEC细胞48h后,RT-PCR检测水蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和VEGFR2 m RNA水平的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预HUVEC细胞48h后,Western Blot检测蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和VEGFR2蛋白含量的影响。结果:1.水蛭提取液的制备和检测:根据2015版《中华药典》中使用凝血酶测定水蛭提取液中水蛭素的浓度,经过多次反复提取及测定,水蛭提取液中水蛭素浓度保持相对稳定。高分辨液质联用分析仪-QE分析结果表明:水蛭提取液中包含有核苷类、氨基酸类、肌苷类、嘌呤类、维生素类等多种成分。2.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响: 0.04U/ml、0.08U/ml的水蛭提取液组在48h对RB细胞的抑制率分别是9.70%、9.92%,与对照组比较,差异具有统计学意义（OD值P<0.05）。 实验组药物浓度干预的RB细胞主要阻滞在G2/M期。对照组、0.04U/ml水蛭提取液组、0.08U/ml水蛭提取液组处于G2/M期的阳性细胞率（%）分别为3.00±2.32、12.59±5.36、14.79±4.12（对照组与水蛭提取液组比较,P<0.01）。 实验组水蛭提取液浓度均可诱导RB细胞凋亡率上调,以上3组细胞凋亡率依次分别为4.64±2.56、37.91±3.44、33.05±2.25（与对照组比较,P<0.01）。 实验组Transwell下室中移行的、每高倍视野细胞数目均较对照组显着减少,3组检测结果（OD值）依次分别为1.21±4.36、0.44±2.08、0.53±3.42（与对照组比较,P<0.01）。3.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究: Elisa实验结果显示:与对照组比较,0.04U/ml和0.08U/ml2个水蛭提取液浓度培养基上清中VEGF的表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。 RT-PCR结果显示:与对照组比较,HIF-1a和MMP-9 m RNA水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）; Western Blot结果显示:与对照组比较,HIF-1a、MMP-9、PI3K、p-AKT的蛋白含量降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响: 0.04U/ml和0.08U/ml水蛭提取液干预WERI-RB-1细胞48h后,细胞的抑制率分别为12.96±1.59、14.81±2.17,与对照组比较差异具有统计学意义（OD值P<0.05）。 RT-PCR结果显示:与对照组比较,VEGF、VEGFR2的m RNA水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）; Western Blot结果显示:与对照组比较,VEGF、VEGFR2的蛋白含量降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.水提法提取的水蛭提取液中水蛭素含量相对稳定。水蛭提取液中包含有核苷类、氨基酸类、肌苷类、嘌呤类、维生素类等多种成分。2.水蛭提取液通过抑制WERI-RB-1活性、引起周期阻滞、诱导细胞凋亡、抑制细胞侵袭等作用对视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞发挥抑制作用。3.水蛭提取液通过VEGF/PI3K/AKT通路抑制WERI-RB-1细胞,同时抑制WERI-RB-1细胞中HIF-1a、MMP-9活性。4.水蛭提取液可抑制HUVEC细胞活性,抑制HUVEC细胞表达VEGF、VEGFR2蛋白活性。综上所述,在体外实验中,水蛭提取液在一定程度上可能通过VEGF/PI3K/AKT通路和HIF-1a、MMP-9因子影响WERI-RB-1细胞周期分布、凋亡、侵袭作用,从而发挥抑制RB的作用。同时发现水蛭提取液可能通过抑制VEGF、VEGFR2表达抑制脐静脉内皮细胞。我们的研究结果表明:水蛭提取液对RB细胞具有抑制作用,同时可能对RB血管也有抑制作用。从中医理论上进一步验证了其活血化瘀、其破血消瘕的作用。以上研究结果为开发新型抗肿瘤制剂水蛭提供了一定的临床前研究资料。
李显勇[10]（2020）在《丹红对大鼠股动脉吻合术后血管修复的影响及可能机制探讨》文中研究指明目的:本研究旨在通过动物模型复制显微血管吻合术后血管修复过程,探讨丹红注射液对促进吻合口血管修复、抗凝、抑制血栓形成方面的作用并分析可能参与此过程的机制。方法:选择健康6～8周龄的SD（Sprague-Dawley）雌性大鼠30只,体重为250～300g,随机分为对照组和实验组,每大组各15只。构建模型:在大鼠腹股沟处做切口,游离双侧股动脉,切断股动脉后于20倍显微镜下采用血管两定点缝合法行股动脉端-端吻合。通血成功后测量吻合口直径,从股静脉抽取血液行血常规及凝血功能指标测量,最后缝合伤口。实验组每天腹腔注射2.5 ml/kg丹红注射液,对照组每天注射等量生理盐水。分别于吻合术后第3d、7d、10d将大鼠麻醉后沿原切口打开,抽取股静脉血,检测血常规中血小板计数变化及凝血指标包括活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）和D-二聚体。20倍显微镜下观察吻合血管是否通畅、有无栓塞形成、血管与周围粘连情况、吻合口血管肿胀程度,测量吻合口直径及进行局部取材,评估吻合口创面愈合质量,制作大鼠股动脉吻合口处组织HE切片,显微镜下观察血管内皮细胞和成纤维细胞的数目。结果:（1）两组间的血小板数目比较:两组术后3d、7d和10d静脉血中血小板数目变化比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）两组间凝血指标相比:术后3d和7d两组中APTT、FIB和D-二聚体水平变化比较,差异无统计学意义（P>0.05）。术后10d,实验组中APTT与对照组比较,实验组中APTT较对照组时间明显延长,差异有统计学意义（P<0.05）。但两组FIB和D-二聚体水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（3）两组术后大体观察相比:术后实验组和对照分别发现5根和10根血管吻合口发生血栓栓塞形成,实验组术后血管通畅率与对照组比较,实验组血管通畅率明显高于对照组,差异有统计学意义（p<0.05）。采用半定量创面愈合评分比较,两组术后3d和7d评分比较,差异无统计学意义（P>0.05）,但术后10d实验组评分显着低于对照组,差异有统计学意义（p<0.05）。（4）两组HE染色发现相比:实验组与对照组术后3d吻合口血管内皮细胞及成纤维细胞数目比较,差异无统计学意义（P>0.05）,术后7d和10d吻合口血管组织内血管内皮细胞及成纤维细胞高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:丹红注射液能促进吻合口血管内皮细胞和成纤维细胞过度增殖,通过延长APTT产生抗凝作用减少血栓形成方面发挥重要作用,对改善血管修复质量、维持吻合口血流通畅表现较好的应用价值。而对FIB和D-二聚体水平及血小板计数变化不产生影响。
二、水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响（论文提纲范文）
（1）黄芪水蛭有效成分联合干预对巨噬细胞内脂质积聚的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 实验研究 |
| 第一章 水蛭素、黄芪多糖分别对OX-LDL诱导的巨噬细胞内脂质积聚的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 黄芪多糖和水蛭素联合干预对OX-LDL诱导的的巨噬细胞内脂质积聚的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 黄芪多糖和水蛭素联合干预对OX-LDL诱导的巨噬细胞相关凋亡指标的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（2）水蛭素对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养与传代 |
| 2.2 分组 |
| 2.3 细胞鉴定 |
| 2.3.1 倒置相差显微镜形态学鉴定 |
| 2.3.2 免疫荧光鉴定α-SMA |
| 2.4 CCK-8法检测细胞增殖 |
| 2.5 茜素红S染色 |
| 2.6 微板法测定细胞内钙离子浓度 |
| 2.7 细胞内ALP活性检测 |
| 2.8 q RT-PCR检测细胞α-SMA、RUNX2、BMP2的m RNA表达量 |
| 2.9 Western blotting检测细胞α-SMA、RUNX2、BMP2的蛋白表达量 |
| 2.1 0 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 VSMCs的鉴定 |
| 3.2 细胞增殖及毒性检测 |
| 3.3 各组细胞茜素红S染色结果 |
| 3.4 各组细胞中钙离子浓度及ALP活性 |
| 3.5 各组细胞中α-SMA、RUNX2、BMP2 m RNA表达量的比较 |
| 3.6 各组细胞中α-SMA、RUNX2、BMP2蛋白表达量的比较 |
| 4 讨论 |
（3）基于PI3K/AKT/mTOR自噬信号通路探讨络风宁0号对HCASMC增殖的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 络风内动理论指导下的心血管疾病研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 自噬及天然产物在心血管疾病中的研究现状及进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 人冠状动脉平滑肌细胞的体外培养 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 试剂耗材 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 试剂配制与分装 |
| 2.2 细胞培养 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 细胞培养 |
| 4.2 无菌操作 |
| 5 结论 |
| 第二部分 络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导的HCASMC增殖的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 试剂耗材 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物及试剂配制 |
| 2.2 建立凝血酶诱导HCASMC增殖模型 |
| 2.3 摸索络风宁0号支架涂层复合物干预HCASMC的无毒性浓度范围 |
| 2.4 筛选络风宁0号支架涂层复合物抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖的最有效浓度 |
| 2.5 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 建立凝血酶诱导HCASMC增殖模型 |
| 3.2 络风宁0号支架涂层复合物干预HCASMC的无毒性浓度范围 |
| 3.3 络风宁0号支架涂层复合物抑制凝血酶诱导的HCASMC增殖的最有效浓度 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导的HCASMC增殖过程中自噬及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 试剂耗材 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物及试剂配制 |
| 2.2 Western blot法检测络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导的HCASMC增殖过程中PI3K、AKT、mTOR及自噬相关因子蛋白表达的影响 |
| 2.3 RT-qPCR法检测络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导HCASMC增殖过程中PI3K、AKT及mTOR的mRNA表达的影响 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导HCASMC的增殖过程中PI3K、AKT、mTOR及自噬相关因子蛋白表达的影响 |
| 3.2 络风宁0号支架涂层复合物对凝血酶诱导的HCASMC增殖过程中PI3K、AKT及mTOR的mRNA表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）基于AMPK/mTOR自噬信号通路对络风宁0号方抗HCASMC增殖作用机制的探索（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 急性冠脉综合征的中医理解 |
| 1. 病因溯源 |
| 2. 病机理论 |
| 2.1 气虚血瘀理论 |
| 2.2 瘀热相搏理论 |
| 2.3 络风内动理论 |
| 2.4 易损斑块从内痈立论 |
| 2.5 PCI术后再发良心血管事件 |
| 3. 辨证分型统计 |
| 4. 治法讨论 |
| 4.1 益气活血 |
| 4.2 清热解毒 |
| 4.3 袪风通络 |
| 4.4 化痰袪瘀 |
| 4.5 消、托、补 |
| 4.6 温运阳气与凉血生肌 |
| 5. 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 血管平滑肌细胞增殖与自噬AMPK/MTOR信号通路的相关性研究进展 |
| 1. 血管平滑肌细胞的介绍 |
| 1.1 血管平滑肌细胞的结构和功能 |
| 1.2 血管平滑肌细胞病变致病 |
| 2. 血管平滑肌细胞的增殖因素 |
| 2.1 细胞外影响因素 |
| 2.2 细胞内影响因素 |
| 3. 细胞自噬的介绍 |
| 3.1 自噬的概念及分类 |
| 3.2 细胞自噬的基本过程 |
| 3.3 自噬水平的检测标志物 |
| 4. AMPK/MTOR自噬信号通路的介绍 |
| 4.1 AMPK的结构和功能 |
| 4.2 mTOR的结构和功能 |
| 4.3 AMPK/mTOR通路在自噬中的作用 |
| 5. AMPK/MTOR自噬信号通路对血管平滑肌细胞的影响研究 |
| 6. 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 人冠状动脉平滑肌细胞的体外培养 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验使用材料 |
| 2. 实验操作方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物抑制HCASMC增殖的配比摸索 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验使用材料 |
| 2. 实验前准备 |
| (一) 建立血小板衍生生长因子诱导的HCASMC增殖模型 |
| 实验操作方法 |
| 1. 实验设计 |
| 2. 实验分组 |
| 3. 实验步骤 |
| 4. 实验结果 |
| (二) 络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物对HCASMC生长的无毒性配比浓度范围摸索 |
| 实验操作方法 |
| 1. 实验设计 |
| 2. 实验分组 |
| 3. 实验步骤 |
| 4. 实验结果 |
| (三) 络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物抗HCASMC增殖的有效性配比浓度摸索 |
| 实验操作方法 |
| 1. 实验设计 |
| 2. 实验分组 |
| 3. 实验步骤 |
| 4. 实验结果 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 络风宁0号方“紫杉醇-比伐卢定”复合物对PDGF诱导HCASMC增殖过程中AMPK/MTOR自噬信号通路的影响 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验使用材料 |
| 2. 实验操作方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 讨论与展望 |
| 1. 络风宁0号方抗冠脉血管平滑肌细胞增殖作用研究的临床意义 |
| 2. 中药单体复合物的研究价值 |
| 3. 中药应用剂量化的应用探索 |
| 参考文献 |
| 不足与局限 |
| 创新点 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（5）水蛭素改善糖尿病型ED的网络药理学和在体药效评价研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 综述一: 糖尿病型勃起功能障碍及其治疗的研究进展 |
| 1. 勃起功能障碍概述 |
| 2. 勃起功能的解剖基础及生理过程 |
| 3. DED的病理过程、诊断及临床表现 |
| 4. 治疗 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 综述二: DED的中医研究进展 |
| 1. 从糖尿病消渴到勃起功能障碍 |
| 2. 勃起功能障碍为临床研究的理论点 |
| 3. 作为新疾病的认识观 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第1章 DED靶点网络的建立及潜在治疗药物的探索 |
| 1. 概述 |
| 2. 研究资料及方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第2章 水蛭素干预DED的药效学研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第3章 水蛭素干预DED的转录组学研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验资料及方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第4章 水蛭素通过抑制MPO干预DED的机制研究 |
| 1. 概述 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（6）从NLRP3炎性小体探讨络风宁0号对HCAEC的保护作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 从“络风内动”学说到中药复合单体涂层支架/球囊研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 药物涂层球囊在经皮冠状动脉介入治疗中的应用研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 NLRP3炎性小体在冠心病发生发展中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 DCB治疗小冠状动脉原发病变疗效性研究: 一项随机对照试验的meta分析 |
| 第一节 资料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第四节 局限性 |
| 第五节 结论 |
| 第六节 参考文献 |
| 第二部分 络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用及机制 |
| 实验一 络风宁0号对体外培养HCASMC和HCAEC增殖的影响 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方案 |
| 第三节 实验结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 第六节 参考文献 |
| 实验二 建立血管紧张素Ⅱ诱导的人冠状动脉内皮细胞损伤模型 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方案 |
| 第三节 实验结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 第六节 参考文献 |
| 实验三 络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方案 |
| 第三节 实验结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 第六节 参考文献 |
| 实验四 基于NLRP3炎性小体探讨络风宁0号对AngⅡ诱导的HCAEC损伤的保护作用的机制 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方案 |
| 第三节 实验结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 结论 |
| 第六节 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）水蛭素功能研究进展（论文提纲范文）
| 1 水蛭素 |
| 2 水蛭素在心脑血管疾病中的功能 |
| 2.1 抗凝血 |
| 2.2 抗肺与肝肾的纤维化 |
| 2.3 抗血栓 |
| 2.4 降血脂 |
| 3 水蛭素在其他疾病中的功能 |
| 3.1 抗肿瘤 |
| 3.2 抗痛风 |
| 3.3 抗炎 |
| 3.4 提高淤血皮瓣的成活率 |
| 3.5 有效治疗肾脏疾病 |
| 4 讨论与展望 |
（8）天然水蛭素的抗氧化性及其在化妆品中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 天然水蛭素研究概况 |
| 1.2.1 水蛭素的发展史 |
| 1.2.2 天然水蛭素的结构和性质 |
| 1.2.3 水蛭素功效研究进展 |
| 1.3 活性多肽与化妆品功效评价方法 |
| 1.3.1 活性多肽的功能和作用机理 |
| 1.3.2 化妆品抗氧化功效评价 |
| 1.4 研究目的、内容及实验方案 |
| 1.4.1 创新点 |
| 1.4.2 研究目的 |
| 1.4.3 研究内容 |
| 1.4.4 实验路线 |
| 第二章 天然水蛭素的抗氧化活性研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 天然水蛭素样品 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 清除DPPH·自由基活性的测定 |
| 2.2.2 清除·OH自由基活性的测定 |
| 2.2.3 清除·O_2~-自由基活性的测定 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 天然水蛭素和Vit C的DPPH·清除活性 |
| 2.3.2 天然水蛭素和Vit C的·OH清除活性 |
| 2.3.3 天然水蛭素和VitC的·O_2~-清除活性 |
| 2.3.4 讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 天然水蛭素乳液及眼霜的配方设计与工艺 |
| 3.1 天然水蛭素在化妆品中的应用 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 天然水蛭素样品 |
| 3.2.2 实验原料 |
| 3.2.3 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 含天然水蛭素乳液的配方设计 |
| 3.3.2 乳液的工艺条件优化试验 |
| 3.3.3 含天然水蛭素眼霜的配方设计 |
| 3.3.4 乳液及眼霜的理化性能测试 |
| 3.3.5 乳液及眼霜的微生物挑战试验 |
| 3.3.6 乳液及眼霜的感官评价 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 乳液乳化体系的评价 |
| 3.4.2 乳液增稠体系的评价 |
| 3.4.3 乳液中天然水蛭素添加量的评价 |
| 3.4.4 乳液防腐体系的评价 |
| 3.4.5 乳液工艺条件优化试验 |
| 3.4.6 眼霜增稠体系的评价 |
| 3.4.7 眼霜中天然水蛭素添加量的评价 |
| 3.4.8 眼霜的感官评价 |
| 3.4.9 眼霜的防腐挑战性试验 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 天然水蛭素乳液及眼霜的人体功效评价 |
| 4.1 主要仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 乳液保湿抗皱功效评价 |
| 4.2.2 眼霜抗衰老、改善微循环功效评价 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 含3%天然水蛭素乳液的保湿抗皱功效测试结果 |
| 4.3.2 含3%天然水蛭素眼霜的抗衰老、改善微循环功效评价结果 |
| 4.3.3 讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 水蛭提取液的制备和主要成分分析的初步研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 主要试剂和耗材 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 试剂配制 |
| 1.2 实验方法与步骤 |
| 1.2.1 水蛭提取液的制备和含量检测 |
| 1.2.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液成分 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 水蛭提取液的制备和水蛭素含量测定 |
| 1.3.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液主要成 |
| 1.4 讨论 |
| 1.4.1 水蛭提取液的制备和检测的初步研究 |
| 1.4.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液成分 |
| 第二部分 水蛭提取液对WERI-Rb-1 细胞活性、周期、凋亡、侵袭的影响 |
| 2.1 实验细胞、试剂及配制、仪器设备和耗材 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 2.1.3 主要实验设备仪器 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.2 细胞培养、传代和冻存 |
| 2.2.1 细胞培养和传代 |
| 2.2.2 细胞冻存 |
| 2.3 实验方法与步骤 |
| 2.3.1 CCK-8法检测水蛭提取液对细胞的活性影响 |
| 2.3.2 水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞周期的影响 |
| 2.3.3 水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞凋亡的影响 |
| 2.3.4 水蛭提取液对 WERI-RB-1 侵袭能力的影响 |
| 2.4 统计分析 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 不同浓度药物对WER-Rb-1细胞活性的影响 |
| 2.5.2 流式细胞技术检测药物对细胞周期的影响 |
| 2.5.3 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞凋亡的影响 |
| 2.5.4 transwell 实验检测水蛭提取液对 WER-Rb-1 细胞侵袭能力的影响 |
| 2.6 讨论 |
| 2.6.1 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞活性的影响 |
| 2.6.2 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞周期的影响 |
| 2.6.3 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞凋亡影响 |
| 2.6.4 细胞凋亡与增殖 |
| 2.6.5 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞侵袭能力的影响 |
| 第三部分 水蛭提取液对WER-Rb-1 细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究 |
| 3.1 实验细胞、试剂、耗材和仪器设备 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 3.1.3 主要实验设备仪器 |
| 3.2 实验方法与步骤 |
| 3.2.1 Elisa 实验检测水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞表达 VEGF 的影响 |
| 3.2.2 HIF-1a、MMP-9、VEGFR2 的实时定量RT-PCR检测 |
| 3.2.3 Western Blot法检测HIF-1a、MMP-9、PI3K、p-AKT蛋白表达 |
| 3.3 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Elisa 检测培养基上清中 VEGF 蛋白的表达 |
| 3.4.2 HIF-1a基因表达 |
| 3.4.3 MMP-9基因表达 |
| 3.4.4 Western Blot 检测各组 PI3K 和 p-AKT 蛋白的表达 |
| 3.4.5 Western Blot 检测各组 HIF-1a 和 MMP-9 蛋白的表达 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 VEGF、HIF-1a和 MMP-9 在肿瘤生成中的作用 |
| 3.5.2 PI3K/AKT信号通路在肿瘤疾病中的作用 |
| 3.5.3 水蛭素通过VEGF/PI3K/AKT通路及HIF-1a、MMP-9 因子抑制RB细胞 |
| 第四部分 水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响 |
| 4.1 实验细胞、试剂和仪器设备 |
| 4.1.1 实验细胞 |
| 4.1.2 主要实验试剂 |
| 4.1.3 主要实验设备仪器 |
| 4.2 实验方法与步骤 |
| 4.2.1 CCK-8法检水蛭提取液对测细胞活性的影响 |
| 4.2.2 RT- PCR 检测 VEGF 和 VEGFR2 基因表达 |
| 4.2.3 Western Blot法检测VEGF、VEGFR2 的蛋白表达 |
| 4.3 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 CCK-8法检水蛭提取液对测细胞活性及抑制率的影响 |
| 4.4.2 VEGFR2基因表达 |
| 4.4.3 VEGF基因表达 |
| 4.4.4 水蛭提取液对 HUVEC 细胞表达 VEGF 和 VEGFR2 蛋白的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 VEGF和 VEGFR2对血管生成的调控 |
| 4.5.2 水蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和 VEGFR2的影响 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件 1 文献综述 水蛭的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件二 文献综述 视网膜母细胞瘤的生物标志物 |
| 参考文献 |
| 附件3 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 附件4 倒置显微镜下细胞形态 |
（10）丹红对大鼠股动脉吻合术后血管修复的影响及可能机制探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 研究报告 |
| 2.1 实验材料和建模 |
| 2.2 实验分组和观察指标 |
| 2.3 检测方法 |
| 2.4 统计学方法 |
| 2.5 结果 |
| 附图 |
| 第3章 讨论 |
| 3.1 微血管结构和功能 |
| 3.2 吻合血管修复和凝血机制 |
| 3.3 显微血管吻合的研究进展 |
| 3.4 临床抗凝的管理 |
| 3.5 本研究结果分析 |
| 3.6 丹红注射液的国内外研究进展 |
| 3.7 研究不足 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 丹红注射液对显微血管吻合术后血管修复的影响 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响（论文参考文献）
- [1]黄芪水蛭有效成分联合干预对巨噬细胞内脂质积聚的作用机制研究[D]. 潘杨. 长春中医药大学, 2021(01)
- [2]水蛭素对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响[J]. 李芬芬,尹忠诚,张颖. 中国现代应用药学, 2020(24)
- [3]基于PI3K/AKT/mTOR自噬信号通路探讨络风宁0号对HCASMC增殖的影响[D]. 王渊. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]基于AMPK/mTOR自噬信号通路对络风宁0号方抗HCASMC增殖作用机制的探索[D]. 魏一鸣. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]水蛭素改善糖尿病型ED的网络药理学和在体药效评价研究[D]. 杨若聪. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]从NLRP3炎性小体探讨络风宁0号对HCAEC的保护作用及机制[D]. 王凯. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]水蛭素功能研究进展[J]. 解举民,段卓,周小曼,袁超,苏振宏. 湖北理工学院学报, 2020(03)
- [8]天然水蛭素的抗氧化性及其在化妆品中的应用[D]. 谢思跃. 广东工业大学, 2020(02)
- [9]水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究[D]. 李园媛. 成都中医药大学, 2020(01)
- [10]丹红对大鼠股动脉吻合术后血管修复的影响及可能机制探讨[D]. 李显勇. 长江大学, 2020(04)