一、~(32)磷-玻璃微球区域给药治疗肝癌的实验及临床研究通过鉴定达到国际领先水平（论文文献综述）
中国临床肿瘤学会核医学专家委员会,北京市核医学质量控制和改进中心[1]（2021）在《钇-90(90Y)微球选择性内放射治疗原发性和转移性肝癌的中国专家共识》文中研究表明肝脏恶性肿瘤是中国最常见的癌症死亡病因之一。钇-90微球选择性内放射治疗（90Y-SIRT）作为一种具有应用前景的局部微创治疗手段,其疗效及安全性已被近20年来的临床应用所证实,并被美国国立综合癌症网络等国际指南推荐用于肝脏恶性肿瘤患者的局部治疗。鉴于90Y-SIRT操作的复杂性,需要多学科协作提升治疗的安全性和成功率,中国临床肿瘤学会核医学专家委员会联合北京市核医学质量控制与改进中心组织了来自肿瘤外科、介入科、核医学科等相关领域专家共同商讨形成90Y-SIRT的临床诊治、管理共识,具体涉及定义、适应证和禁忌证、治疗流程、术后随访、不良反应及并发症、辐射安全管理等内容。特此供相关从业人员参考,以助各单位建立90Y-SIRT的规范化管理与治疗制度。
李宁[2]（2021）在《CTAB抑制乳腺癌转移及其机制研究》文中进行了进一步梳理2021年世界卫生组织报道乳腺癌已成为全球最常见癌症。放化疗作为主要治疗方法会导致耐药和复发转移,转移已是导致乳腺癌患者生存率较低的重要原因,故需探究治疗乳腺癌转移的新型药物。十六烷基三甲基溴化铵（Cetyltrimethylammonium Bromide,CTAB）对肝癌的发生发展具有明显的调控作用,但对乳腺癌转移的作用仍未知。本文旨在探究CTAB对乳腺癌转移的抑制作用并初步探讨作用机制。使用MTT法检测不同浓度的CTAB作用24 h和48 h后细胞的OD值,探究CTAB对乳腺癌细胞活力的影响并筛选CTAB的最大无毒性浓度。然后使用伤口愈合和Transwell迁移实验研究CTAB在体外对乳腺癌细胞迁移的影响。接着建立BALB/c小鼠乳腺癌原位肺转移模型,每隔3天尾静脉注射生理盐水和CTAB并称量小鼠体重探究CTAB在体内对乳腺癌肺转移的影响。接种4T1细胞30天后处死小鼠,肺切片进行H&E染色。进一步探究CTAB作用机制:通过肿瘤微球体形成实验、免疫荧光和流式细胞术并通过q RT-PCR和WB检测CD44和CD133含量探究CTAB对乳腺癌肿瘤干细胞的影响。使用q RT-PCR和Western blot（WB）检测对照组（CON组）和CTAB组（CTAB组）中上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）标记物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin以及Snail和Twist的表达水平,探究CTAB对乳腺癌细胞和小鼠EMT进展的抑制作用。使用WB检测CTAB对细胞中AMPK的激活情况,接着利用AMPK的抑制剂Compound C（Com C）进行伤口愈合和Transwell迁移实验并检测EMT相关蛋白表达,进一步探究CTAB是否调控AMPK进而影响细胞迁移和EMT。最后检测ALT、AST和BUN,初步验证CTAB是否具有一定的系统安全性。本研究发现CTAB抑制乳腺癌细胞迁移并且可以减少小鼠肺转移结节数和减小病灶的尺寸。验证CTAB作用机制发现,CTAB降低肿瘤干细胞干性及干细胞比例,下调干细胞标记物CD44和CD133的表达。CTAB增强乳腺癌细胞和小鼠中E-cadherin的表达,下调N-cadherin、Vimentin以及Snail和Twist的表达。此外CTAB激活AMPK抑制EMT进展和细胞迁移。最后证明CON组和CTAB组两组小鼠体重、ALT、AST和BUN无明显差异。CTAB通过调控乳腺癌干细胞并激活AMPK抑制EMT进展从而抑制乳腺癌肺转移。CTAB具有一定的系统安全性,CTAB具有临床治疗乳腺癌转移的潜力。
骆强[3]（2021）在《荧光磁靶向载药纳米粒的组装及体外抗肿瘤活性研究》文中指出目前,癌症己经成为威胁人类生命健康最严重的疾病之一,造成较高的发病率和死亡率,严重威胁着人民的生命健康。然而,传统的癌症治疗方法,如手术放疗、化疗等手段存在着毒副作用大、部分机体功能丧失等缺陷。本文利用功能纳米材料具有的诸多优势,分别构建了以盐酸阿霉素（DOX·HCl）和去氢骆驼蓬碱（HM）为抗癌缓释药物的两种磁性荧光载药纳米粒子,探索了Fe3O4最佳制备条件,并考察了磁性荧光纳米药物载体Fe3O4/CTS@CQDs载药前后的各项性能,以期为癌症治疗中高靶向性给药和体内成像提供有效方案。（1）经影响因素分析,Fe3O4最佳制备条件是反应温度为80℃、体系p H控制在10、Fe3+与Fe2+的摩尔比2:1.5为最佳,平均粒径为19.27 nm;饱和磁化强度52.5 emu·g-1;（2）MTT法检测,以Fe3O4为基体的Fe3O4/CTS@CQDs几乎不会对人体正常肝细胞（HL-7702）造成伤害,基本符合医用材料生物安全性的要求;（3）磁性能测试结果表明,Fe3O4/CTS@CQDs的饱和磁化强度为24.70emu·g-1,Fe3O4/CTS@CQDs-HM和载Fe3O4/CTS@CQDs-DOX的饱和磁化强度分别为21.17 emu·g-1和19.96 emu·g-1,且上述材料的剩余磁化强度和矫顽力都为零;（4）粒径测试结果表明,纳米药物载体Fe3O4/CTS@CQDs平均粒径为58.78nm,Fe3O4/CTS@CQDs-HM和Fe3O4/CTS@CQDs-DOX的平均粒径分别为91.74nm和97.90 nm;（5）载药能力实验结果表明,Fe3O4/CTS@CQDs对HM的载药率为18.07%,包封率为20.07%;对DOX·HCl的载药率为24.95%,包封率为27.73%;（6）体外缓释行为研究表明,两种磁性荧光载药纳米粒的体外缓释行为均遵循p H依赖性,即释放环境p H越小,药物释放率越高;（7）血液安全性研究结果表明,两种磁性荧光载药纳米粒在一定浓度范围内,溶血率都基本符合医用材料血液相容性的要求;（8）细胞毒性试验结果表明,两种磁性荧光载药纳米粒均对人体正常肝细胞（HL-7702）具有较小毒性;对肝癌细胞（HepG2）呈现出明显的剂量性依赖,流式细胞检测表明两种载药纳米粒子可以诱导肝癌细胞（HepG2）凋亡从而发挥抗肿瘤作用;（9）荧光成像结果表明,Fe3O4/CTS@CQDs荧光效果明显;两种载药纳米粒子与肝癌细胞（HepG2）混合培养后,药物均能从载体释放并进入细胞,使细胞带有明显的荧光,使其在细胞成像等生物学研究方向具有潜在的应用价值。
姜涛[4]（2021）在《丹参联合三氧化二砷瘀毒同治调控糖酵解逆转巨噬细胞极化的抗肝癌机制研究》文中研究指明目的 对肿瘤“瘀毒”病因病机理论的源流,以及基于“瘀毒”理论所衍生的治则治法和组方用药进行研究。论证“瘀毒”理论指导下丹参联合三氧化二砷治疗肝癌的有效性,并研究其作用机制。以方证因,以方证机,验证“瘀毒”病因病机理论的科学性,并为其提供一定的实验支撑。方法 通过理论研究与实验研究相结合的方式,以理论研究指导实验研究,以实验研究反证并支撑理论研究。1.理论研究:通过查阅古今文献,总结团队相关研究成果,分析“瘀”和“毒”作为肿瘤病因病机的优势和局限性,对“瘀毒”理论产生的原因进行剖析,阐述“瘀毒”理论的含义和价值。基于肿瘤“瘀毒”理论,研究“祛瘀”和“祛毒”的代表性治则治法,分析其适用情况,探讨不同阶段的瘀毒同治治疗原则和治疗方案。基于“瘀毒”理论,枚举代表性的瘀毒同治药物,论证丹参联合三氧化二砷的理论合理性和科学性。2.实验研究:基于“瘀毒”理论,筛选合适的丹参提取物,并与三氧化二砷联用,获得肝癌抑制效果较佳,正常细胞杀伤较小的联用组合,并分析其最佳药物配比关系。在此基础上,建立Hep1-6原位移植瘤和H22皮下移植瘤模型,验证联合用药的体内外抗肝癌效果。以巨噬细胞极化和糖酵解作为机制研究出发点,通过流式细胞术、免疫荧光染色、病理学染色、PCR技术、Western Blot等技术检测巨噬细胞分型情况,并通过原代巨噬细胞体外诱导模型验证对巨噬细胞极化的影响。通过转录组测序技术研究联合用药对巨噬细胞糖酵解网络的调控作用,选取与糖酵解密切相关的HIF-α/NF-κB、AMPK信号通路开展研究,阐明其起效的分子机制。结果1.“瘀毒”理论的产生是“瘀”“毒”病因病机理论的延伸和发展,其出现是中医内在发展规律所决定的。其中,中医对肿瘤疾病认识的深入,中医理论自身的发展,现代医学理论的充分融入均是其形成的重要促进因素。2.以活血化瘀、破血逐瘀、清热解毒、以毒攻毒为代表的治法及药物配伍是瘀毒同治的核心治疗方案。依据患者病情、病性、病位的不同,可以选择不同的同治方案,其中活血化瘀联合以毒攻毒是各阶段均合适的瘀毒同治方案。3.丹参联合三氧化二砷的药物组合是基于活血化瘀、以毒攻毒治法下,合理的瘀毒同治药物配伍形式,该配伍形式兼具了肿瘤杀伤力强、不易伤正的特点,并规避了促肿瘤转移的风险。4.丹参中的隐丹参酮是联合三氧化二砷治疗肝癌的较佳瘀毒同治组分,二者配伍可在体内外有效抑制肝癌进展,最佳配比为10:1左右。5.隐丹参酮联合三氧化二砷治疗肝癌的机制与促进巨噬细胞的激活,提升其吞噬能力,促使其向M1型巨噬细胞活化,抑制其向M2型巨噬细胞活化有关。6.隐丹参酮联合三氧化二砷通过激活AMPK信号通路、抑制HIF-α/NF-κB信号通路实现对巨噬细胞和肿瘤细胞的糖代谢调控。二者联合促进巨噬细胞的糖酵解并抑制肿瘤细胞的糖酵解,促进葡萄糖的重分配,以达到逆转巨噬细胞极化,抑制肝癌细胞增殖的目的。结论“瘀毒互结”是肿瘤的核心病因病机,活血化瘀、以毒攻毒是瘀毒同治的科学治法,丹参联合三氧化二砷是有效的配伍组合。中医“瘀毒”理论可以有效的应用于肝癌的治疗,值得临床进一步深入研究。
孙新锋[5]（2021）在《芪术抗癌方对肝细胞癌干性标志物影响的研究》文中研究指明背景:原发性肝癌是一个全球性的健康问题,其中90%为肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）,是第二位致死性肿瘤,5年生存率仅为18%,HCC早期可选择肝移植、手术切除或射频消融等根治性治疗,中晚期化疗栓塞/放射栓塞和全身系统治疗是仅存的治疗方法。和大多数肿瘤一样,HCC中存在干性癌细胞,即癌干细胞（cancer stem cell,CSC）,是具有无限增殖和分化潜能的一类特殊细胞群,特别是在HCC的复发转移过程中起着关键作用。癌干细胞标志物是一种特异性的信号分子或蛋白质受体,是利用其鉴定癌干细胞最简单的方法。很多研究表明癌干细胞表面标记物是影响HCC固有耐药性和侵袭转移能力以及调节其干性的关键因素。随着对癌干细胞的深入研究,越来越多的癌干细胞标记物被发现,在体内成瘤实验中确证过,常见的有EpCAM、CD133、CD44及SOX4等癌干细胞表面蛋白,这些标记物在上皮癌变过程中具有一定的促进作用,它的活化和显着表达与肿瘤的活性、侵袭能力和恶性程度呈正相关。最近研究表明,HCC癌干细胞的存在是影响临床疗效导致HCC患者死亡的主要原因之一。中医药是中华民族传统文化与智慧的结晶,具有毒副反应少、多组分、治疗靶点多、减毒增效等特点,能够优化HCC治疗早已形成共识,导师在传承的基础上,创新和发展传统中医宏观气血辨证论治思想,对芪术抗癌方治疗HCC宏观和微观物质基础进行了一系列研究,本方以由黄芪、莪术、炒白术、柴胡、白芍、鸡内金及炙甘草等药物组成。前期临床研观察发现,该方可显着提高HCC患者临床疗效,明显改善生存质量、减少肿瘤的复发和转移并提高患者的生存率。进一步研究发现该方能阻止癌细胞转移、诱导HepG2细胞凋亡、p53蛋白表达及p21细胞周期调控等;并通过调节JNKs信号通路促进HepG2细胞凋亡、阻止裸鼠HCC转移,及逆转TGF-β诱导的肝癌细胞EMT和干性特征减少癌细胞迁移等。故系统深入研究HCC癌干细胞的侵袭转移机制以及寻求新的治疗方法,是提高疗效、改善预后及延长生存率的关键环节。通过对癌干细胞的起源、生物学特征及作用和机制初步的阐述,进一步研究HCC转移和复发机制,探讨中药阻止HCC进展的疗效机制具有重要意义。目的:芪术抗癌方可能会影响癌细胞干性标志物表达从而影响HCC复发和转移;据此,本研究拟在导师前期工作基础上,（1）通过对HCC患者外周血淋巴细胞（PBMC）进行癌干性标志物高通量测序以验证主要干性相关标志物基因及SOX4的表达;（2）建立芪术抗癌方处理HepG2细胞损伤模型,验证芪术抗癌方对肝癌细胞株干性标志物表达的影响。（3）建立肝癌原位小鼠动物模型,验证芪术抗癌方对干性标志EpCAM、CD133、CD44表达和对SOX4基因表达的影响。本研究结果,有望在肿瘤干性标志物方面初步阐释芪术抗癌方阻止HCC进展的疗效作用机制,为中药抗癌制剂的研发和广泛的临床应用提供理论和实验依据。方法:第一部分:收集正常对照人群、HCC患者血液标本,通过PBMC高通量测序及蛋白芯片表达,研究不同分期分级HCC患者之间干性标志及SOX4表达差异,并与正常对照人群进行对比分析。1.经医院伦理委员会批准依据我国《原发性肝癌诊疗规范》（2017年版）选择确诊为肝细胞癌患者,共80例,其中年龄在30岁至70岁之间,平均年龄51.2岁。根据巴塞罗那肝癌临床分期标准（BCLC）进行分期,80例HCC患者,根据巴塞罗那肝癌临床分期标准（BCLC）进行分期:其中0期5例,A期21例,B期14例,C期25例,D期15例;为了进一步区分HCC组癌干性基因表达,我们选取了正常对照组,随机入组50例正常人群作为对照组,同时对入组进行统计学分析。2.对入组者进行外周血单个核细胞（PBMC）提取A.使用量约5ml的EDTA抗凝真空采血管进行血液采集,上下颠倒与抗凝剂混合均匀后放入4℃冰箱保存,并在2小时内完成PBMC提取。B.对入组标本进行RNA提取与检测,包括Trizol法提RNA,Thermo试剂盒法进行细胞裂解、RNA萃取、RNA清洗、Elute RNA、RNA检测,对文库构建与质控,库检合格后,把不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求pooling后进行Illumina 测序。C.数据对比分析:采用Subread软件中的FeatureCounts工具对基因进行表达水平的定量,FeatureCounts主要使用-Q 10-B-C参数,分别过滤掉比对质量值低于10的reads,非成对比对上的reads,比对到基因组多个区域的reads。3.随机抽取36例肝癌患者和对照组血浆标本进行蛋白数据进行分析,包括原始数据归一化,差异蛋白筛选,差异蛋白聚类等基础分析。第二部分:芪术抗癌方体外、体内实验研究1.芪术抗癌方对癌细胞干性标志表达影响的体外肝癌细胞研究通过体外实验,观察芪术抗癌方是否影响TGF-β1诱导的肝癌细胞干性标志物表达。利用TGF-β1诱导Huh7细胞干性表达,加入芪术抗癌方浸提液共培养,Western blot检测癌细胞干性相关蛋白表达水平,验证芪术抗癌方对癌细胞干性标志表达的影响。2.芪术抗癌方对癌细胞干性标志及SOX4基因表达影响的体内肝癌动物模型研究2.1肝癌原位模型造模小鼠肝包膜下种植SMMC7721-luc制备肝癌模型,4周后进行活体成像仪查看荧光情况来确认小鼠是否造模成功。2.2分组用耳标法将30只肝癌模型小鼠和5只空白小鼠进行编号,然后将肝癌模型小鼠随机等量分为5组（肝癌模型组、索拉非尼组、芪术抗癌低剂量、中剂量、高剂量组）。空白小鼠则做为对照组。2.3取材给药30天后用安乐处死小鼠,剪开小鼠腹部皮肤2cm,分离肌肉,取出小鼠肝脏、拍照。然后肝脏和肿瘤备用。2.4 HE染色及免疫组织化学染色2.5 PCR定量检测根据实验说明书从肝脏肿瘤组织中提取的总RNA,以RNA为模板,按照说明书配制逆转录反应体系,总体积为20μl,37℃,60min;98℃,10min,合成cDNA第一链,并收集备用;加入特定引物,在PCR反应条件下:94℃ 2min,94℃ 20s,58℃ 20s,72℃ 20s,40循环。PCR产物的特异性通过熔解曲线分析证实。基因表达相对定量与ΔΔCt方法实现（Ct值）。2.6肝癌组织标本进行Western Blot和免疫组化检测。结果:第一部分:收集健康对照组、肝细胞癌患者血液标本,通过PBMC基因测序及蛋白芯片表达,对比健康对照组与HCC、HCC不同分期组之间干性标志物基因、蛋白及SOX4基因表达。本研究中对纳入的80例HCC患者,根据巴塞罗那肝癌临床分期标准（BCLC）进行分期:其中0期5例,A期21例,B期14例,C期25例,D期15例;同时纳入50例健康人群作为对照组。通过采用RNA-Seq对HCC患者和正常健康对照组外周血淋巴细胞（PBMC）进行高通量测序,及生物信息学方法分析,发现在HCC患者和健康对照者验证队列中,使用qRT-PCR对9个干性基因表达进行验证对比发现,在两者组人群中都存在 CD13、CD24、CD44、CD47、EPCAM、CD133、SOX2、SOX4、CD90等基因表达,并且以CD13、CD24、CD44、CD47、CD133、SOX4表达更显着。对HCC巴塞罗那分期0-B期和C-D期,进一步进行RNA-Seq测序结果分层分析比较,发现在9个癌干性基因表达中,CD13、CD24、CD44、CD47、CD133、SOX4、EpCAM在两组中亦均明显表达,同时发现C-D级较0-B期HCC患者CD133基因表达更为显着,而EpCAM表达0-B期较C-D期患者基因表达有较为明显的表达,同时我们还发现在两组患者中具有同等水平的SOX4的表达。HCC患者和对照组的干性基因表达聚类图进一步分析发现,SOX4基因在HCC组呈现明显的高表达,同样HCC患者PBMC中CD24、CD47、CD13基因表达和健康对照组比较存在显着差异。通过HCC患者血浆蛋白芯片检测,发现HCC患者存在CD44、EpCAM基因高表达。本研究部分,通过RNA-seq技术及血浆芯片蛋白检测技术,确证人PBMC中存在部分干细胞标志物基因表达,通过进一步比较发现,CD133、CD44、EpCAM在肝癌患者中表达明显,且与分期呈现负相关,并发现癌细胞干性调节基因SOX4在HCC患者中高表达,提示,HCC患者PBMC中存在癌干细胞与疾病进展和不良预后相关。第二部分:通过体外、体内实验观察芪术抗癌方对癌干细胞中CD133、CD44、EpCAM及SOX4表达的影响,初步探讨在癌干细胞方面中医药治疗肝癌的作用。1.芪术抗癌方对Huh7肝癌细胞干性标志表达的影响我们体外研究发现,通过对TGF-β1诱导的癌细胞干性标志基因蛋白表达发现,芪术抗癌方干预Huh7肝癌细胞后,能抑制EpCAM和CD133表达,表明该中药复方可以在体外通过抑制癌细胞中EpCAM和CD133干性表达而阻止HCC进展。2.芪术抗癌方对肝癌动物模型癌细胞干性标志及SOX4基因表达的影响EpCAM、CD133、CD44、SOX4等细胞表面蛋白的活化和高表达与肿瘤的活性、侵袭能力和恶性程度呈正相关。我们已对HCC患者PBMC进行了高通量测序研究,发现EpCAM、CD133、CD44、SOX4等干性相关基因,在HCC患者PBMC中表达,及体外实验亦证实了芪术抗癌方可以抑制部分干性标志及SOX4基因表达。由此,我们进行了进一步体内实验研究,验证芪术抗癌方对HCC癌细胞干性标志及SOX4基因表达的影响,初步探索芪术抗癌方阻止HCC进展的疗效机制。我们对实验成功的肝癌原位小鼠动物模型进行分组和处理,并进行PCR、Western Blot及免疫组化染色研究分析,发现芪术抗癌方可以降低癌干细胞EpCAM、CD133和CD44,以及癌细胞干性调节基因SOX4在肝癌肿瘤组织中的表达,并且作用优于索拉菲尼,验证了我们的假设,芪术抗癌方可以通过影响癌细胞干性标志物表达从而阻止HCC进展,其疗效机制可能与调节SOX4基因表达相关。结论:在本研究中,首先通过对临床HCC患者PBMC进行RNA-seq及血浆芯片蛋白检测研究,发现了人PBMC中存在部分干细胞标志物基因表达,通过进一步比较发现,CD133、CD44、EpCAM在肝癌患者中表达明显,且与分期呈现负相关,并发现癌细胞干性调节基因SOX4在HCC患者中高表达,提示,HCC患者PBMC中存在癌干细胞与疾病进展和不良预后相关,而中医药可能通过调节SOX4基因影响干性标志表达。其次,通过体外实验研究发现芪术抗癌方可影响Huh7肝癌细胞中CD133、CD44、EpCAM干性标志表达。最后,我们通过对实验成功的肝癌原位小鼠动物模型进行分组和处理,并进行PCR、Western Blot及免疫组化染色分析研究,发现芪术抗癌方可以降低癌干细胞EpCAM、CD133和CD44,以及癌细胞干性调节基因SOX4在肝癌肿瘤组织中的表达,并且作用优于索拉非尼,验证了我们的假设,芪术抗癌方在体内外实验中能通过影响癌细胞干性标志物表达阻止HCC进展,其疗效机制可能与调节SOX4基因表达相关,为芪术抗癌方进一步深入的疗效机制研究提供了较好的临床及试验证据,为中医药在HCC治疗的临床广泛应用提供了研究依据。
张轩[6]（2021）在《产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用》文中进行了进一步梳理枯草芽孢杆菌广泛存在于传统发酵食品内,可产生多种对人体有益的生物活性物质。枯草芽孢杆菌发酵的纳豆因其富含具有抗血栓功能的纳豆激酶（Nattokinase）,作为一种风味食品受到部分消费者的青睐。枯草芽孢杆菌液体发酵生产的纳豆激酶也已被用于抗血栓功能食品或药品的制备。另外,也有报道,口服枯草芽孢杆菌可调节机体肠道菌群和免疫功能,发挥抗炎、抗肿瘤以及延缓衰老等作用。目前,纳豆激酶口服产品的剂型单一,且耐胃酸和肠道缓释能力较差;枯草芽孢杆菌益生菌制剂主要为冻干菌粉,食用人群局限。上述产品的局限性,限制了其应用范围。本研究针对上述产品的不足,利用筛选的同时产生纳豆激酶和凝乳酶的枯草芽孢杆菌菌株,研制了一种新型的枯草芽孢杆菌功能发酵乳和一种纳豆激酶口服缓释制剂,对其制备工艺和相关功能进行了系统研究。主要研究内容和结果如下:首先,用从自然界采集的稻草作为发酵菌种的来源制作纳豆,从自制纳豆浸出液中分离、筛选出产双酶（纤维蛋白溶解酶和凝乳酶）的菌株。通过对菌株形态观察和生化特性检测,结合16S rDNA基因序列测定结果,确定此菌株为枯草芽孢杆菌,命名为B.subtilis JNFE0126。在优化后的培养条件下,该菌株产纳豆激酶活性最高达14512.4IU/mL,产凝乳酶活性最高达875.5 SU/mL,可以满足中性条件下制备凝固型发酵乳的要求。酶抑制剂试验结果表明,发酵液纤溶活性来源于丝氨酸蛋白酶,凝乳活性来源于金属蛋白酶。提取该菌株的DNA,根据基因库中已经报道的纳豆激酶和凝乳酶（金属蛋白酶M4）的基因序列设计引物进行PCR基因调取扩增后测序,结果表明该菌株具有上述两种酶的基因,其序列分别与已经报道的纳豆激酶和金属蛋白酶M4具有高度相似性（同源性分别为99.1%和97.6%）。其次,分别收集B.subtilis JNFE0126纳豆激酶和凝乳酶最高产酶期的发酵液,采用硫酸铵沉淀、离子交换色谱及凝胶过滤色谱分别对纳豆激酶和凝乳酶进行分离纯化,然后用SDS-PAGE检验样品纯度及测定其相对分子质量。结果表明,纯化的纳豆激酶和凝乳酶的相对分子质量分别为27 KD和42 KD左右。纳豆激酶最适温度为40℃,最适pH为7.0,pH 6.0-9.0条件下具有较高的酶活和较好的稳定性。凝乳酶的最适作用温度为55℃,最适pH值为6.5,在pH 6.0-8.0条件下具有较高的酶活,在pH 5-10条件下有较好的的稳定性。在此基础上,研究并优化了B.subtilis JNFE0126发酵鲜牛乳制作凝固型发酵乳的配方和发酵条件,评价了所得产品的品质特性和抗血栓功能。优化的配方和发酵条件为:鲜牛乳,大豆蛋白2%,蔗糖4%,羟丙基二淀粉磷酸酯1.5%,果胶0.1%,藻酸丙二醇酯（PGA）0.1%,发酵温度41℃,发酵时间8 h。得到发酵乳为软嫩的乳白色凝乳块,奶香浓郁,口感爽滑,无明显不良风味。扫描电镜观察表明,凝乳块内部呈现海绵状微观结构,酪蛋白胶束及亚胶束相互交联形成整体的三维结构,胶束间仍然存在大量微细孔隙,这些孔隙起着保持水分的作用。发酵乳的纤溶活性达215.1 U/mL,4℃储藏14天酶活性可保留66%,储藏60天活性仍保留43%;小鼠黑尾试验表明,口服该发酵乳具有显着的体内抗血栓效果。应用Dextran sulfate sodium salt（DSS）诱导性炎症性肠病动物模型评价了上述发酵乳对肠道菌群的调节作用和对炎症性肠病的防治效果,并探讨了其作用机制和实际应用前景。动物疾病症状观察和肠道组织病理分析结果表明,口服B.subtilis JNFE0126发酵乳可明显减轻DSS诱导性炎症性肠病动物的疾病严重程度,减轻动物的肠道粘膜的出血、炎症和溃疡等病理损伤;动物肠道菌群的检测分析和和肠粘膜内炎症相关因子和上皮再生相关蛋白表达水平的测定结果表明,口服B.subtilis JNFE0126菌株发酵乳可调节动物的肠道菌群,增加菌群的多样性,抑制有害菌生长;该发酵乳可抑制肠道粘膜内炎症因子表达水平,提高炎症抑制因子表达水平,因而减轻肠粘膜的炎症性损伤。与此同时,B.subtilis JNFE0126发酵乳可促进肠粘膜上皮干细胞的增殖分化,促进粘膜细胞的粘液蛋白和上皮连接蛋白的表达,加速肠粘膜屏障和上皮屏障的修复,从而抵御有害菌和炎症因子的侵入。最后,研制了一种具有双层壳-核结构（壳聚糖核-纳豆激酶-酪蛋白）的纳豆激酶口服缓释颗粒,并通过动物试验评价其在体内抗血栓作用。采用壳聚糖为核心,京尼平为壳聚糖核-纳豆激酶交联剂,牛乳酪蛋白为颗粒外层保护材料,TG酶为保护层的交联剂,按照分步交联的程序制备纳豆激酶缓释颗粒。用扫描电子显微镜对获得的缓释颗粒进行形态学分析,并使用纳米金交联的IgG作为模型药物验证了酪蛋白保护层的包埋效果,确定其形成了双层壳-核结构。通过体外模拟胃、肠液消化试验测定了该缓释颗粒的释放动力学特征,结果表明该颗粒在胃酸中能有效保护纳豆激酶活性,并在肠液中缓释达12小时。最终对该缓释颗粒进行动物口服试验,动态观察颗粒内纳豆激酶的体内缓释过程及其抗血栓效果。结果表明,上述纳豆激酶口服缓释颗粒具有很强的抗胃酸能力,并在肠道内可缓慢释放出纳豆激酶及其不同大小相对分子质量的具有纤维蛋白溶解活性的降解产物,缓释过程超过12小时。小鼠黑尾模型动物口服该颗粒,可明显抑制小鼠尾部血管内的血栓形成并促进血栓溶解,效果显着优于口服游离纳豆激酶。综上所述,本研究利用筛选的B.subtilis JNFE0126制备的发酵乳具有抗血栓和调节肠道功能的作用,有良好的应用前景。本研究开发的纳豆激酶口服缓释颗粒具有耐胃酸能力和肠道缓释功能,可提高纳豆激酶的口服利用度,有望作为功能食品添加剂用于研制抗血栓功能食品。
张雷[7]（2021）在《血脑屏障体外微球模型的构建及其在中药神经毒性筛选中的应用》文中研究表明目的:血脑屏障（Blood-Brain Barrier,BBB）是大脑和血液循环之间的一种高度选择性和动态的亲脂屏障,它能有效地避免外源性和内源性毒性进入大脑,维持中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）稳态。血脑屏障主要由脑微血管内皮细胞（BMVECs）、周细胞、星形胶质细胞和神经元组成。BMVECs是高度极化的细胞,其主要功能包括表达细胞转运蛋白、产生炎症介质、向脑组织运输营养物质以及阻止药物和毒素进入中枢神经系统。有毒物质想要到达中枢神经系统,其中一条途径则是造成BBB功能障碍。近年来,因服用中药而中毒的事件屡发,引起了人们对其肝、肾等毒性研究的重视,神经毒性却鲜有报道。本课题欲建立体外血脑屏障模型,并从具有明确其他器官毒性的中药单体库中初步筛选具有神经毒性的中药单体;利用已建立的BBB模型对中药神经毒性单体进行BBB障碍机制研究,以期为中药神经毒性评价提供新方法。方法:1、利用细胞在低吸附培养下会自发形成微球的特性,将HBMEC、HBVP、HA三种原代人源细胞进行三细胞共培养,以期形成与人体内结构类似的血脑屏障微球类器官:首先通过对培养3、7、14天的BBB微球进行活/死细胞染色,验证BBB微球是否可以长时间培养。其次,运用免疫荧光技术检测组成BBB微球的三种细胞成分的标志性蛋白及其分布的相对空间分布,并对BBB完整性的特征蛋白进行表征。另外,使用BBB微球进行右旋糖苷渗透性实验、Rh123外排实验,对BBB微球的生理功能进行验证。最后,我们使用BBB微球进行氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）造模,通过评估ZO-1的表达和低氧诱导因子HIF-1α转录水平,验证BBB微球是否可以模拟疾病模型。2、通过探究具其他器官毒性的中药单体对神经细胞和BBB微球的影响,结合Discovery Studio软件研究中药单体是否有神经毒性。首先,通过Discovery Studio软件的ADMET模块获取44种单体的BBB透过性性质。然后通过作用于PC12细胞、HT-22细胞,运用Hoechst染色法分析神经细胞的活力,对44种有毒中药单体进行神经毒性初筛,得到目标药物斑蝥素（CTD）;然后将筛选出的药物作用于BBB微球,运用高内涵成像及RT-PCR技术检查其对BBB微球的细胞活力、BBB特征蛋白及基因水平的影响;运用高内涵成像及RT-PCR技术检测CTD对BBB微球的氧化应激、炎症相关基因转录水平、凋亡相关蛋白表达的影响。使用H&E染色、尼式染色检测CTD致ICR小鼠神经损伤的影响。结果:1、通过将HBMEC、HBVP、HA三种原代人源细胞在低吸附条件下进行共培养,成功诱导形成微球,且可以实现长期培养（最长14天）,并保持较高细胞活力。通过对BBB微球的组成细胞成分的标志性蛋白表征,证明了BBB微球内三种细胞可以共存,并且从荧光分布可以得知三种细胞（HBMEC、HBVP、HA）按由外而内的顺序依次排列,具备了模拟体内血脑屏障的结构分布（这种球体的结构与人体内血脑屏障极为相似--内皮层包裹在球体最外层,球体的外部环境即为脑部微血管的管腔内部,球体的内部环境即为脑部微血管的管腔外部,由内皮细胞形成血液系统与中枢神经系统阻隔的界面）。随后在对BBB完整性的特征性蛋白进行表征的实验中,BBB微球高表达了紧密连接相关蛋白ZO-1、claudin-5、Occludin,以及细胞外基质蛋白Laminin、外排转运蛋白P-gp、LRP-1,证明了BBB微球具有屏障功能的关键蛋白结构。对BBB微球生理功能进行验证,发现在组胺破坏血脑屏障后,右旋糖苷内流显着内流;在使用P-gp活性抑制剂维拉帕米后,P-gp转运底物Rh123显着内流,证明BBB微球具有体内相似的生理功能。最后,通过对BBB微球进行OGD/R造模,运用免疫荧光及RT-PCR技术验证OGD/R造模后可以降低紧密连接相关蛋白ZO-1的表达,激活HIF-1α的转录,证明BBB微球具有模拟疾病模型的能力。2、通过Discovery Studio软件对44种化合物进行计算机模拟,预测出各化合物的BBB透过性质。随后使用Neuron Outgrowth Assay方法评价44种有毒中药单体的神经毒性,筛查出五个候选药物。随后结合文献及HT-22海马区神经元细胞对CTD进行神经毒性验证,结果证明CTD可以显着降低HT-22细胞的细胞活力,并且可以在显微镜下观察到对BBB微球的损伤作用。将CTD作用于BBB微球上,通过对细胞活力、紧密连接相关蛋白ZO-1的定量分析,证明CTD可以破坏血脑屏障结构,且不会影响BBB特征蛋白ZO-1、Caudin-5、Occludin、P-gp、BCRP1、GLUT1的基因转录水平。随后使用高内涵成像及RT-PCR检测CTD对BBB微球中活性氧蓄积、炎症因子转录水平、凋亡相关蛋白表达的影响,结果证明CTD可以显着增加BBB微球的细胞内ROS蓄积,显着升高了IL-6、IL-8、VEGF的基因转录水平,且显着增加促凋亡蛋白caspase-3、bax表达,同时降低抗凋亡蛋白bcl-2的表达。H&E染色、尼式染色显示CTD可以造成ICR小鼠大脑海马区神经元丢失、尼式小体溶解、颗粒层细胞基底部水肿。结论:我们将HBMEC、HBVP、HA三种原代人源细胞进行低吸附条件下共培养以自发形成微球,并通过对BBB特征性蛋白的表征、生理功能验证、疾病模型模拟,证明了微球自组装成为具有类似体内血脑屏障结构功能的模块化类器官。随后我们使用神经元细胞毒性测试结合BBB微球毒性测试的综合策略,从44种有毒中药单体中筛查出具有神经毒性的CTD,并认为CTD可能通过增加细胞内活性氧蓄积及激活炎症因子表达、调节凋亡相关蛋白破坏血脑屏障。最后,我们使用ICR小鼠染毒后,发现CTD可以造成小鼠神经损伤,从动物水平上验证了CTD的神经毒性作用。
汪凯[8]（2020）在《口服次血红素六肽改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的机制研究》文中研究说明2型糖尿病是一种由多因素引起的代谢性疾病,以高血糖、胰岛素抵抗为主要特征。2型糖尿病的发病率持续增加,已成为全球最大的公共健康问题之一。研究表明,过量活性氧（reactive oxygen species,ROS）会引起氧化应激,导致细胞功能障碍,包括能量代谢紊乱、细胞信号受损、细胞转运机制障碍、免疫激活和炎症。慢性氧化应激是导致胰岛素抵抗、代谢失调、糖尿病等疾病发展的潜在因素。因此,抗氧化应激药物的研发是治疗2型糖尿病的新思路。次血红素三肽（Deuterohemin-βAla-His-Lys,Dh HP-3）是本实验室基于天然过氧化物酶（microperoxidase-11,MP-11）设计合成的新型过氧化物酶模拟物。前期研究发现,Dh HP-3能够降低2型糖尿病大鼠血糖,激活PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡。Dh HP-3因其较短的半衰期及较快的血浆清除率而采用注射给药。注射导致依从性差,且有感染的风险,因此,口服途径仍是最理想的给药方式。基于此,我们设计合成了次血红素六肽（Deuterohemin-βAla-His-Thr-Val-Glu-Lys,Dh HP-6）。前期研究发现,Dh HP-6的相对酶活要高于Dh HP-3。Dh HP-6在人工胃肠液及血浆中具有较高稳定性,且降解产物的相对酶活与Dh HP-6一致。为了探讨口服Dh HP-6对于2型糖尿病的影响,本论文主要从三个方面进行了研究:1.本文通过高脂饮食联合腹腔注射链脲霉素构建了2型糖尿病小鼠模型,从动物水平探究了口服Dh HP-6对于2型糖尿病的影响。结果表明,口服Dh HP-6能够有效降低2型糖尿病小鼠的血糖,改善胰岛素抵抗。血清学研究发现,Dh HP-6能够增强SOD、GSH及CAT的活性,降低MDA的含量,从而降低氧化应激水平;此外,Dh HP-6还能降低T-CHO、TG及LDL-C含量,增加HDL-C的含量,改善2型糖尿病小鼠的血脂紊乱;通过对肝功指标（AST、ALT和ALP）的检测及肝脏形态结构的观察发现,Dh HP-6能够有效维持2型糖尿病小鼠肝脏的功能及结构完整性。同时,通过对胰岛和肾脏形态结构的观察发现,Dh HP-6能够有效改善2型糖尿病小鼠胰岛萎缩及空泡变性,维持肾小球结构完整性。值得一提的是,Dh HP-6能够显着降低2型糖尿病小鼠FBPase和G6Pase含量,升高HK含量;肝脏PAS染色发现,Dh HP-6能够有效促进2型糖尿病小鼠肝脏糖原的合成。通过western blot分析发现,Dh HP-6能够促进IRS-1（Tyr632）、AKT（Ser473）及GSK-3β（Ser9）的磷酸化,抑制IRS-1（Ser307）的磷酸化,激活2型糖尿病小鼠肝脏PI3K/AKT信号通路;同时,Dh HP-6能够促进AMPK的Thr172磷酸化,抑制G6Pase及PEPCK的表达,激活2型糖尿病小鼠AMPK信号通路;此外,Dh HP-6促进了Nrf2的表达,抑制了Keap1的表达,改善2型糖尿病小鼠的抗氧化系统。因此,Dh HP-6能够激活2型糖尿病小鼠PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路,改善其肝脏胰岛素抵抗症状。2.通过葡萄糖胺诱导建立了Hep G2细胞胰岛素抵抗模型,进一步从细胞水平探究了Dh HP-6改善肝脏胰岛素抵抗的作用机制。研究结果表明,Dh HP-6能够有效抑制葡萄糖胺诱导引起的细胞损伤,促进Hep G2细胞的葡萄糖吸收及糖原合成,抑制ROS的生成,改善线粒体功能损伤。Western blot结果表明,Dh HP-6能够激活Hep G2细胞胰岛素抵抗模型的PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路。当加入PI3K的特异性抑制剂LY294002后,PI3K/AKT信号通路并不能完全被抑制,同时发现,LY294002也能部分抑制AMPK及Nrf2-Keap1信号通路;当加入AMPK的抑制剂复合物C后,AMPK信号通路不能被完全抑制,而PI3K/AKT及Nrf2-Keap1信号通路也被部分抑制。由此可知,PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路并非独立作用,而是相互影响相互促进的。因此,Dh HP-6能够激活PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路改善葡萄糖胺诱导的Hep G2细胞胰岛素抵抗。3.为了进一步探讨Dh HP-6的口服递送策略,我们合成了靶向叶酸受体的叶酸-羧甲基壳聚糖,制备了由Dh HP-6、细胞穿膜肽、叶酸-羧甲基壳聚糖组成的微球,并初步验证了其作为Dh HP-6口服递送系统的可行性。结果表明,相同浓度下,细胞穿膜肽RR-9相较于FI-6和LK-18能够显着降低Caco-2细胞模型的跨膜电阻,降低细胞膜连续性,因此,选用RR-9进行后续实验。叶酸-羧甲基壳聚糖对Caco-2细胞几乎没有毒性,且黏附能力比羧甲基壳聚糖更强。Dh HP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球在人工胃液中释放缓慢,在人工肠液中释放显着变快。在Caco-2细胞口服吸收模型中,Dh HP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球能够显着促进Dh HP-6的跨膜转运。因此,Dh HP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球能够增强壳聚糖对于Caco-2细胞的黏附能力,促进Dh HP-6的跨膜转运。综上,Dh HP-6通过激活PI3K/AKT、AMPK及Nrf2-Keap1信号通路改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗;此外,Dh HP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球作为Dh HP-6口服递送系统具有可行性。
李耘[9]（2020）在《低剂量、亚慢性下黄曲霉毒素B1和微囊藻毒素LR诱导联合肝毒性效应与免疫互作影响研究》文中研究表明全球每年约60万人死于肝癌（HCC）,在我国HCC死亡率仅次于肺癌,高达14.56%,并呈现上升趋势。诱导HCC前兆因素非常复杂,流行病学调查已初步证实膳食途径共暴露黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）污染的粮油和微囊藻毒素-LR（Microcystin LR,MC-LR）污染的水源及水产品等可能诱导联合肝毒性效应并促进随后HCC结局的发生。AFB1与MC-LR主要作用靶器官均为肝脏,但目前对AFB1+MC-LR联合肝毒性效应研究依然较为缺乏,主要体现在:一是膳食暴露场景下,AFB1+MC-LR共暴露诱导联合肝毒性/肝癌效应强度、性质（协同、拮抗等）及其迁移规律等依然不明;二是低剂量、亚慢性下,AFB1与MC-LR往往呈现与急性暴露下不同的毒性表征,包括肝损伤及炎症反应的可逆性以及基因突变与诱发肝癌之间随机性等。有研究表明免疫可影响肝毒性的表达,因此阐述机体免疫应答可能是阐述AFB1+MC-LR联合肝毒性效应强度及性质交互关键的机制之一。本论文基于上述需求,初步得出如下结论:1.基于CI模型预测小鼠低剂量、亚慢性下共暴露AFB1+MC-LR诱导肝癌联合效应,结果显示联合剂量和CI值出现概率分别主要集中于0～20mg/kg bw区间和0～1.5范围,联合效应总体表现为弱拮抗、弱协同或加和作用模式,出现强拮抗或强协同效应可能性极低,总体表现为加和作用概率相对较高;同时基于IORP模型预测人群膳食途径共暴露AFB1+MC-LR诱导肝癌联合效应,其中共暴露风险高于单一暴露风险,前者由高至低排序为:老年人（54.638%）>儿童（54.172%）>成人（51.865%）。联合毒性效应系数(c12=54.827)预测结果表明所有人群经膳食途径共暴露AFB1+MC-LR诱导肝癌联合效应呈现协同作用,风险可能被放大。2.低剂量、亚慢性下,雄性野生型C57BL/6小鼠共暴露AFB1+MC-LR诱导AKP、ALT、AFP、TBIL和AST等5项肝损伤生化指标表达显示:（1）剂量等效应比下,血清及肝脏共暴露组总体表达均略高于单一暴露组,血清中AFB1表达水平高于MC-LR（p<0.05）,而肝脏中MC-LR高于AFB1（p<0.05）;基于主成分分析发现共暴露组呈现弱协同或弱拮抗联合效应,但协同较拮抗出现概率更高;（2）剂量非等效应比下,血清共暴露组中任意毒素剂量变化及MC-LR剂量变化分别不会显着影响共暴露组中TBIL和AFP的表达（p﹥0.05）,而其余指标则因单一毒素剂量变化对共暴露组表达产生显着性影响（p<0.05）;肝脏共暴露组中任意单一毒素剂量变化会极显着影响共暴露组中5项生化指标表达（p<0.001）。该结果预示肝脏可能是AFB1+MC-LR内剂量协同表现联合肝毒性效应的关键靶器官。3.极低剂量、亚慢性下,雄性野生型C57BL/6小鼠共暴露AFB1+MC-LR诱导免疫应答及影响肝脏免疫微环境研究发现:（1）基于细胞因子调控联合毒性的“时-效”分析,免疫应答途径可能为:a.早初期（0～5Wks）:IFN-γ受体信号被活化,促进并增强Th1表型,诱导IFN-γ和IL-2等表达;IL-18作为上游事件促进Th1定向分化并诱导产生IFN-γ,呈现为弱拮抗或拮抗效应;b.前中期（5～7Wks）:随暴露时间、剂量和频次增加,AFB1+MC-LR抗原递呈,免疫应答进入平台竞争期,弱拮抗或拮抗逐步过度为加和效应;c.后中期（7～11Wks）:AFB1+MC-LR“时-量”累积,进一步增强IL-4在中后期显着上调和IFN-γ抑制,Th2启动抑制过度免疫炎症,联合效应表现为弱协同或协同效应;d.后期(（11～13Wks）:免疫应答应激增强,Th1/Th2平衡可能作为关键机制之一贯穿始终,免疫应答呈现更替交叠;（2）基于肝脏免疫细胞亚群的“时-效”分析,第9周、第13周肝脏中T细胞丰度水平占比最高,9周和13周中空白、AFB1、MC-LR及AFB1+MC-LR组中T细胞占总免疫细胞丰度分别为26.26%、36.70%、34.65%和30.58%;33.53%、20.37%、39.08%和27.11%,由此,不同实验组与空白组之间差异性并不显着;同时共暴露组T细胞丰度逐步呈下降趋势。另外,第9周单一组与共暴露组中性粒细胞丰度存在非常显着性差异（p<0.01）,巨噬细胞存在显着性差异（p<0.05）,树突状细胞无差异;第13周B细胞之间存在极显着性差异（p<0.001）,巨噬细胞存在非常显着性差异（p<0.01）。随暴露时间增加,单一组AFB1和MC-LR的CD4+/CD8+均降低（分别为0.947和0.466）,而共暴露组升高（1.081）。比值降低预示共暴露组刺激小鼠免疫系统紊乱趋势更显着,联合效应从加和、弱协同逐步转至弱拮抗,此结论与细胞因子演推趋势基本一致,并佐证CD4细胞可能经历T—Tfh,Th1—Th2和T—Treg途径主导联合效应表征及更迭交替。4.极低剂量、亚慢性下,雄性野生型C57BL/6小鼠共暴露AFB1+MC-LR诱导肝毒性与免疫应答分子机制研究发现:（1）第13周共暴露组较单一组而言,有意义指向免疫及肝损伤相关m RNA表达数量及水平均呈显着上调,并主要富集于Cyp4a14、Cyp4a10、Egr1、Gadd45g、Zfp809和Ctgf等。共暴露组在第13周或之前即呈现协同效应,而第9周MC-LR较AFB1组,Iigp1等差异性基因呈现上调,可能直接和/或间接参与了共暴露组后续表达为协同效应;（2）单一组与共暴露组差异基因共同富集于肿瘤坏死因子TNF、RNA转运和NOD样受体、磷脂酰肌醇信号通路等4个典型的信号通路,而空白组与单一组及共暴露组之间富集至胆固醇代谢通路、花生四烯酸信号通路、磷脂酰肌醇信号通路、血管平滑肌收缩信号通路等。验证提示花生四烯酸通路可能是影响AFB1+MC-LR联合肝毒性效应表征重要的分子机制之一。
邹明园[10]（2019）在《靶向肿瘤血管的磁纳米促凝血蛋白的构建及其活性鉴定》文中进行了进一步梳理肿瘤血管栓塞治疗是介入方法的重要手段之一。然而现有栓塞剂存在肿瘤血管栓塞不全、毒副作用大等缺点,发展新型栓塞剂是一个迫切问题。本研究的目的是发展一种用于肿瘤血管栓塞治疗的肿瘤血管靶向磁纳米促凝血蛋白tTF-EG3287/CMC/Fe304,并鉴定其选择性促发肿瘤血管血栓栓塞活性及其抗肿瘤活性。本研究首先通过基因工程方法构建融合蛋白tTF-EG3287,其中截断组织因子（truncated tissue factor,tTF）是外源性凝血途径的起动因子组织因子（tissue factor,TF）的重组形式,其仅保留TF的胞外区。游离的tTF不具备完整的促凝血活性,但是可通过靶向分子锚定在靶细胞膜表面而恢复完整TF的促凝血活性。EG3287是具有特异性靶向肿瘤血管新靶标Neuropilin-1（NRP-1）能力的靶向多肽。由tTF和EG3287组成的融合蛋白tTF-EG3287可通过NRP-1靶向多肽EG3287与肿瘤血管中高表达的NRP-1结合,从而使tTF锚定在内皮细胞细胞膜表面。膜结合型的tTF恢复完整TF的促凝血活性,继而在肿瘤血管内促发凝血反应形成血栓,进一步引起血栓栓塞,从而阻断肿瘤的血管供应。但EG3287亲和力低,tTF-EG3287靶向血栓效果尚不满意。为了使该融合蛋白tTF-EG3287可高效、快速地到达肿瘤区域。本研究利用化学共沉淀方法制备粒径10nm左右的Fe3O4。再利用化学交联法使其与羧甲基壳聚糖（carboxymethyl chitin,CMC）结合,形成CMC包裹的Fe3O4的磁性纳米载体（CMC/Fe3O4）。再将磁纳米载体与融合蛋白交联组成磁纳米促凝血蛋白tTF-EG3287/CMC/Fe3O4。体外实验,通过共聚焦显微镜观察和流式细胞术鉴定磁纳米促凝血蛋白的NRP-1靶向能力;接着通过FXa活化实验评估磁纳米促凝血蛋白促凝血活性,最后CCK-8检测磁纳米促凝血蛋白的体外细胞毒性。体外实验结果证实,磁纳米促凝血蛋白仍保留靶向多肽EG3287的NRP-1靶向能力和tTF的促凝血活性。此外,磁纳米促凝血蛋白的细胞毒性低,具有良好的生物相容性。体内实验,建立小鼠皮下移植瘤模型和原位肝癌模型,通过活体成像系统观察在肿瘤区域附加磁场而诱导磁纳米促凝血蛋白在肿瘤区域富集的能力,通过观测肿瘤大小和肿瘤组织病理学方法评估磁纳米促凝血蛋白的治疗效果及安全性。体内研究结果证实,磁纳米促凝血蛋白可选择性地在肿瘤相关血管内促发凝血反应,从而形成血栓和造成血栓栓塞。肿瘤血管栓塞后,可抑制肿瘤生长并使肿瘤组织发生缺血性坏死。总而言之,本研究成功构建了一种新型的磁纳米促凝血蛋白,其有望可成为一种安全、有效、给药方便的栓塞剂应用于肿瘤血管栓塞治疗。
二、~(32)磷-玻璃微球区域给药治疗肝癌的实验及临床研究通过鉴定达到国际领先水平（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、~(32)磷-玻璃微球区域给药治疗肝癌的实验及临床研究通过鉴定达到国际领先水平（论文提纲范文）
（2）CTAB抑制乳腺癌转移及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 乳腺癌简介 |
| 1.1.1 乳腺癌亚型及现状 |
| 1.1.2 乳腺癌治疗 |
| 1.1.3 乳腺癌转移 |
| 1.2 乳腺癌机制研究 |
| 1.2.1 乳腺癌转移机制概要 |
| 1.2.2 EMT研究进展 |
| 1.3 乳腺癌干性研究现状 |
| 1.4 季铵盐及CTAB的应用 |
| 1.5 立题依据与研究思路 |
| 1.5.1 立题依据 |
| 1.5.2 研究思路 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验主要仪器和设备 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞复苏 |
| 2.2.2 细胞冻存 |
| 2.2.3 细胞培养 |
| 2.2.4 细胞活力测定 |
| 2.2.5 总RNA提取 |
| 2.2.6 总蛋白提取及蛋白浓度测定 |
| 2.2.7 逆转录和实时定量PCR |
| 2.2.8 Western blot |
| 2.2.9 细胞伤口愈合实验 |
| 2.2.10 Transwell迁移实验 |
| 2.2.11 H&E染色 |
| 2.2.12 肿瘤微球体形成实验 |
| 2.2.13 流式细胞术 |
| 2.2.14 免疫荧光 |
| 2.2.15 动物水平实验 |
| 2.2.16 ALT活力测试 |
| 2.2.17 AST活力测试 |
| 2.2.18 BUN含量测试 |
| 2.2.19 统计学分析 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 CTAB对乳腺癌细胞活力的作用 |
| 3.2 CTAB抑制乳腺癌细胞的迁移 |
| 3.3 CTAB在体内抑制乳腺癌的肺转移 |
| 3.4 CTAB对乳腺癌肿瘤干细胞的作用 |
| 3.4.1 CTAB对乳腺癌肿瘤微球体形成的作用 |
| 3.4.2 CTAB对肿瘤干细胞比例的影响 |
| 3.4.3 CTAB对乳腺癌细胞干性标记物表达的作用 |
| 3.5 CTAB调控EMT通路关键标志物的表达 |
| 3.6 CTAB激活乳腺癌细胞中AMPK抑制迁移和EMT进展 |
| 3.6.1 CTAB可以激活AMPK |
| 3.6.2 抑制AMPK促进乳腺癌细胞迁移 |
| 3.6.3 抑制AMPK促进乳腺癌细胞EMT进展 |
| 3.7 CTAB在体内系统安全性的初步评价 |
| 3.8 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 主要缩略词表 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（3）荧光磁靶向载药纳米粒的组装及体外抗肿瘤活性研究（论文提纲范文）
| 符号和缩略词说明 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 癌症的现状与治疗 |
| 1.1.1 癌症的现状 |
| 1.1.2 癌症的治疗 |
| 1.1.3 抗癌药物 |
| 1.1.4 靶向给药方式简介 |
| 1.2 磁性Fe_3O_4纳米粒子及其应用 |
| 1.2.1 磁性 Fe_3O_4纳米粒子主要特性 |
| 1.2.2 磁性Fe_3O_4纳米粒子的制备 |
| 1.2.3 磁性Fe_3O_4纳米粒子的应用 |
| 1.2.4 磁性Fe_3O_4纳米粒子表面的修饰 |
| 1.3 碳量子点简介 |
| 1.3.1 CQDs的合成 |
| 1.3.2 CQDs的应用 |
| 1.4 选题意义及研究内容 |
| 1.4.1 选题意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 技术路线图 |
| 第2章 磁性荧光纳米药物载体的组装及性能研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料试剂与仪器设备 |
| 2.2.1 材料试剂 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 磁性Fe_3O_4纳米粒子的制备 |
| 2.3.2 Fe_3O_4/CTS的制备 |
| 2.3.3 CQDs的制备 |
| 2.3.4 磁性荧光纳米药物载体的合成 |
| 2.3.5 生物相容性测试 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 Fe_3O_4制备影响因素分析 |
| 2.4.2 测试与表征 |
| 2.4.3 生物安全性分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 磁性荧光纳米药物载体对去氢骆驼蓬碱(HM)的负载研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料试剂与仪器设备 |
| 3.2.1 材料试剂 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 HM的提取 |
| 3.3.2 Fe_3O_4/CTS@CQDs-HM的偶联 |
| 3.3.3 HM标准曲线的测定 |
| 3.3.4 包封率与载药率的测定 |
| 3.3.5 体外缓释行为研究 |
| 3.3.6 溶血率的测定 |
| 3.3.7 细胞毒性的测定 |
| 3.3.8 细胞流式检测 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 测试与表征 |
| 3.4.2 HM最大吸收波长及标准曲线 |
| 3.4.3 包封率与载药率 |
| 3.4.4 体外缓释行为研究 |
| 3.4.5 溶血率的测定 |
| 3.4.6 细胞毒性的测定 |
| 3.4.7 细胞流式检测 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 磁性荧光纳米药物载体对盐酸阿霉素(DOX·HCl)的负载研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料试剂与仪器设备 |
| 4.2.1 材料试剂 |
| 4.2.2 仪器设备 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 测试与表征 |
| 4.4.2 DOX·HCl最大吸收波长及标准曲线 |
| 4.4.3 包封率与载药率 |
| 4.4.4 体外缓释行为研究 |
| 4.4.5 溶血率的测定 |
| 4.4.6 细胞毒性的测定 |
| 4.4.7 细胞流式检测 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）丹参联合三氧化二砷瘀毒同治调控糖酵解逆转巨噬细胞极化的抗肝癌机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 肿瘤瘀毒病因病机理论研究 |
| 一、肿瘤瘀毒病因病机理论的源流研究 |
| (一) 以瘀作为肿瘤发生发展的核心 |
| 1. 瘀的定义 |
| 2. 瘀成为肿瘤发生发展核心要素的原因 |
| 3. 以瘀作为肿瘤核心病机取得的临床效果和局限性 |
| (二) 以毒作为肿瘤发生发展的核心 |
| 1. 毒的定义 |
| 2. 毒成为肿瘤发生发展核心要素的原因 |
| 3. 以毒作为肿瘤核心病机取得的临床效果和局限性 |
| (三) 瘀毒理论的出现及其出现原因 |
| 1. 瘀毒出现的时间 |
| 2. 瘀毒出现的原因 |
| (四) 当代肿瘤瘀毒理论代表性学者和医家观点 |
| 1. 以周仲瑛、程海波为代表的瘀毒理论 |
| 2. 以张光霁为代表的瘀毒理论 |
| 3. 以郑伟达为代表的瘀毒理论 |
| 4. 以王行宽为代表的瘀毒理论 |
| (五) 总结 |
| 二、瘀毒理论衍生的的治则治法研究 |
| (一) 瘀的治疗原则 |
| (二) 瘀的代表性治疗方法 |
| 1. 活血化瘀 |
| 2. 破血逐瘀 |
| (三) 毒的治疗原则 |
| (四) 毒的代表性治疗方法 |
| 1. 清热解毒 |
| 2. 以毒攻毒 |
| (五) 瘀毒的治疗原则 |
| (六) 瘀毒的代表性治疗方法 |
| 1. 活血化瘀联合清热解毒 |
| 2. 活血化瘀联合以毒攻毒 |
| 3. 破血逐瘀联合清热解毒 |
| 4. 破血逐瘀联合以毒攻毒 |
| (七) 总结 |
| 三、活血化瘀和以毒攻毒治法下的用药研究 |
| (一) 活血化瘀治法下代表性的药物 |
| 1. 丹参 |
| 2. 当归 |
| 3. 赤芍 |
| (二) 以毒攻毒治法下的代表性药物 |
| 1. 以山慈菇为代表的草药类攻毒药 |
| 2. 以斑蝥为代表的动物昆虫类药物 |
| 3. 以雄黄为代表的金石类药物 |
| (三) 丹参联合三氧化二砷瘀毒同治科学性及合理性分析 |
| (四) 以隐丹参酮为代表的中药提取物是否能够代表传统中药的若干问题 |
| (五)总结 |
| 四、瘀毒理论与肝癌 |
| 1. 瘀的形成是肝癌发生的前提 |
| 2. 因瘀致毒,因毒致变是肝癌进展的关键因素 |
| 3. 瘀毒互结是肝癌的核心病因病机 |
| 4. 肝癌巨噬细胞是瘀毒互结的效应靶标 |
| 第二部分 基于瘀毒病因病机理论的实验研究 |
| 一、基于瘀毒理论的丹参联合三氧化二砷药效学研究 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验药品 |
| 2. 实验细胞系 |
| 3. 实验动物 |
| 4. 实验仪器 |
| 5. 实验试剂及耗材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 丹参有效成分的提取 |
| 2. 丹参有效成分的溶解 |
| 3. 细胞培养 |
| 4. 细胞增殖抑制实验 |
| 5. 小鼠Hep1-6原位癌模型的建立 |
| 6. 小鼠H22皮下移植瘤模型的建立 |
| 7. 动物分组及给药 |
| 8. 基础指标检测及分析 |
| 9. 病理组织化学染色 |
| 10. 统计学分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 隐丹参酮是丹参提取物中理想的候选有效成分 |
| 2. 隐丹参酮联合三氧化二砷对肝癌细胞的体外抑制作用 |
| 3. 隐丹参酮联合三氧化二砷对小鼠H22移植瘤的生长抑制作用 |
| 4. 隐丹参酮联合三氧化二砷对小鼠H22移植瘤的增殖抑制作用 |
| (四) 分析与讨论 |
| 二、隐丹参酮联合三氧化二砷逆转巨噬细胞表型转化研究 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验药品 |
| 2. 实验细胞 |
| 3. 实验仪器 |
| 4. 实验试剂及耗材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 小鼠血常规及血生化检测 |
| 2. 肿瘤组织中巨噬细胞的分型检测 |
| 3. 原代巨噬细胞的提取 |
| 4. 原代巨噬细胞的鉴定和分型检测 |
| 5. 原代巨噬细胞刺激实验 |
| 6. 原代巨噬细胞的吞噬能力检测 |
| 7. 原代巨噬细胞特征性分泌因子的检测 |
| 8. 统计学分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 隐丹参酮联合三氧化二砷改善荷瘤小鼠血象并影响单核巨噬细胞 |
| 2. 隐丹参酮联合三氧化二砷改变小鼠肿瘤组织中巨噬细胞的分型 |
| 3. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外促进巨噬细胞伪足形成 |
| 4. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外增强巨噬细胞的吞噬能力 |
| 5. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外促进原代巨噬细胞的激活和M1型活化 |
| (四) 分析与讨论 |
| 三、隐丹参酮联合三氧化二砷通过糖酵解途径调控巨噬细胞的抗肝癌机制研究 |
| (一) 实验材料 |
| 1. 实验药物 |
| 2. 实验仪器 |
| 3. 试剂及耗材 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 细胞糖酵解代谢产物及关键代谢酶的检测 |
| 2. 细胞转录组测序及分析 |
| 3. 糖酵解关键信号通路蛋白和基因检测 |
| 4. 肿瘤细胞和巨噬细胞的葡萄糖竞争实验 |
| 5. 统计学分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 隐丹参酮联合三氧化二砷体内调节荷瘤鼠糖酵解水平 |
| 2. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外促进原代巨噬细胞的糖酵解水平 |
| 3. 隐丹参酮联合三氧化二砷体外抑制H22肝癌细胞的糖酵解水平 |
| 4. 隐丹参酮联合三氧化二砷通过AMPK信号通路促进巨噬细胞糖酵解 |
| 5. 隐丹参酮联合三氧化二砷通过抑制HIF-1α通路抑制H22肝癌细胞糖酵解 |
| 6. 隐丹参酮联合三氧化二砷通过HIF-1α和AMPK信号通路综合调节糖酵解发挥抗肿瘤作用 |
| (四) 分析与讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 文献综述 肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤中的作用及中医药调控研究发展 |
| 1. TAMs的起源和分化 |
| 2. TAMs的类型 |
| 3. TAMs的极化 |
| 4. TAMs调控肿瘤进展 |
| 5. TAMs作为肿瘤治疗的靶点 |
| 6. 中医药对巨噬细胞的影响 |
| 7. 总结 |
| 参考文献 |
（5）芪术抗癌方对肝细胞癌干性标志物影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 肝癌研究概况 |
| 一、肝癌流行病学现况 |
| 二、肝癌病因研究 |
| 三、肝癌发病机制 |
| 四、肝癌的治疗现状 |
| 五、肝癌发生发展与肝癌干细胞的关系 |
| 六、肝癌干细胞与上皮间质转化(EMT) |
| 第二节 肝癌中医药基础理论的形成和发展及芪术抗癌方研究概况 |
| 一、肝癌的渊源及病因病机 |
| 二、肝癌辨证治疗 |
| 三、芪术抗癌方中医气血辨证治疗肝癌的理论依据 |
| 四、芪术抗癌方临床疗效、机制及微观物质基础研究 |
| 第二章 芪术抗癌方对肝癌干细胞的影响 |
| 第一节 临床研究 |
| 一、资料与方法 |
| 二. 数据分析结果 |
| 三、结论 |
| 第二节 体外、体内实验研究 |
| 一、芪术抗癌方对癌细胞的干性表达体外研究 |
| 二、芪术抗癌方对癌细胞干性表达体内研究 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文和参与课题情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（6）产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 简写对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌简介 |
| 1.2 纳豆激酶的研究进展 |
| 1.2.1 纳豆激酶的酶学性质 |
| 1.2.2 纳豆激酶的功能及其应用前景 |
| 1.2.3 纳豆激酶与其它溶栓药物的比较及其溶栓优势 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌凝乳酶的研究进展 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌在发酵食品及益生菌制剂中的应用 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌对肠道菌群的调节作用和在医药保健领域的应用 |
| 1.5.1 肠道菌群及肠道菌群失调相关疾病 |
| 1.5.2 炎症性肠病的发病机制及治疗方法的研究进展 |
| 1.6 立题背景和研究意义 |
| 1.7 主要研究内容 |
| 第二章 产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌菌株的分离、筛选及鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 主要试剂与材料 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 培养基配方 |
| 2.3.2 纤维蛋白溶解酶纤溶活力测定方法 |
| 2.3.3 凝乳酶活力测定方法 |
| 2.3.4 产纳豆激酶和凝乳酶双酶菌株的筛选及鉴定 |
| 2.3.5 产双酶菌株菌株的鉴定 |
| 2.3.6 B.subtilis JNFE0126 菌株的生长特征检测 |
| 2.3.7 B.subtilis JNFE0126 株菌发酵液凝乳酶和纤溶酶活性的动态检测 |
| 2.3.8 B.subtilis JNFE0126 菌株产双酶能力的遗传稳定性测定 |
| 2.3.9 B.subtilis JNFE0126 菌株保藏 |
| 2.3.10 酶抑制剂抑制试验分析纤溶酶和凝乳酶的类型 |
| 2.3.11 B.subtilis JNFE0126 菌株的两种酶基因的PCR扩增和测序 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 产双酶(纳豆激酶和凝乳酶)菌株的筛选 |
| 2.4.2 B.subtilis nk1 菌株的鉴定 |
| 2.4.3 B.subtilis JNFE0126 菌株的生长和产酶特性 |
| 2.4.4 蛋白酶抑制剂实验分析纤溶酶和凝乳酶类型 |
| 2.4.5 B.subtilisJNFE0126 的纳豆激酶和M4 金属蛋白酶基因PCR扩增和测序结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌产发酵液中纳豆激酶和凝乳酶的分离纯化及酶学性质研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与设备 |
| 3.2.1 主要试剂与材料 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 培养基 |
| 3.3.2 B.subtilis JNFE0126 菌株的活化 |
| 3.3.3 纳豆激酶、凝乳酶粗酶液的制备 |
| 3.3.4 蛋白质浓度的测定—Bradford检测法 |
| 3.3.5 纳豆激酶的分离纯化 |
| 3.3.6 凝乳酶的分离纯化 |
| 3.3.7 纳豆激酶的酶学性质研究 |
| 3.3.8 凝乳酶的酶学性质研究 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 纳豆激酶的分离纯化 |
| 3.4.2 凝乳酶的分离纯化 |
| 3.4.3 纯化酶的SDS-PAGE电泳检测结果 |
| 3.4.4 纳豆激酶的酶学性质 |
| 3.4.5 凝乳酶的酶学性质研究 |
| 3.4.6 纯化凝乳酶的凝乳效果及其潜在应用价值 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌发酵乳的研制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 主要试剂与材料 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 发酵乳制备方法 |
| 4.3.2 单因素实验和正交试验 |
| 4.3.3 发酵乳理化指标测定 |
| 4.3.4 发酵乳感官评定 |
| 4.3.5 发酵乳储藏过程中的品质变化观察 |
| 4.3.6 发酵乳的微观结构观察 |
| 4.3.7 发酵乳动物体内抗血栓作用 |
| 4.3.8 试验数据统计分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 单因素试验优化发酵乳配方和发酵条件 |
| 4.4.2 采用正交试验确定发酵乳最适发酵条件 |
| 4.4.3 正交试验确定稳定剂配方 |
| 4.4.4 发酵过程中菌量、p H和酶活的变化 |
| 4.4.5 发酵乳总蛋白和总糖含量 |
| 4.4.6 发酵乳感官评定结果 |
| 4.4.7 发酵乳的流变学特性 |
| 4.4.8 发酵乳的持水力和质构测定结果 |
| 4.4.9 发酵乳的微观凝胶结构 |
| 4.4.10 发酵乳储藏过程中的品质变化: |
| 4.4.11 小鼠黑尾模型验证发酵乳体内抗血栓效果 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌发酵乳预防和治疗炎症性肠病 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与设备 |
| 5.2.1 主要试剂与材料 |
| 5.2.2 主要仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 枯草芽孢杆菌发酵乳的制备及其CFU计数和革兰氏染色 |
| 5.3.2 DSS诱导性炎症性肠病动物模型的建立和动物分组 |
| 5.3.3 模型小鼠疾病活动指数(DAI)的测定 |
| 5.3.4 小肠和结肠的组织学切片观察和组织学评分 |
| 5.3.5 免疫组织化学染色 |
| 5.3.6 Western blotting检测蛋白表达水平 |
| 5.3.7 肠道菌群分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 枯草芽孢杆菌发酵乳的外观、CFU计数及其Gram’s染色 |
| 5.4.2 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对DSS诱导性炎症性肠病动物DAI的影响 |
| 5.4.3 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对小肠和结肠病理变化的影响 |
| 5.4.4 枯草芽孢杆菌发酵乳对白细胞浸润和炎症因子、抗炎因子表达的影响 |
| 5.4.5 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对Lgr-5,CDX-2,Mucin-2 表达水平的影响 |
| 5.4.6 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对ZO1和Villin表达水平的影响 |
| 5.4.7 口服发酵乳对DSS诱导的IBD模型小鼠肠道菌群的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 纳豆激酶缓释颗粒的研制 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料和设备 |
| 6.2.1 主要试剂与材料 |
| 6.2.2 主要仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 缓释颗粒原材料的各种反应体系内纳豆激酶纤溶活性测定 |
| 6.3.2 双层壳-核结构的纳豆激酶缓释颗粒的设计和构建 |
| 6.3.3 纳豆激酶缓释颗粒的粒径和zeta电位测定 |
| 6.3.4 装载纳豆激酶和模型药物的缓释颗粒微观结构的显微镜观察 |
| 6.3.5 纳豆激酶缓释颗粒在储藏过程中的纤溶活性的动态测定 |
| 6.3.6 模拟消化液对缓释颗粒纤溶活性的影响 |
| 6.3.7 模拟消化液对缓释颗粒粒径、ζ-电位和表面结构的影响 |
| 6.3.8 荧光标记模拟药物(Ig G)缓释颗粒口服后在小鼠消化道内分布情况分析 |
| 6.3.9 口服纳豆激酶缓释颗粒后小鼠肠道内的活性酶的释放和吸收试验 |
| 6.3.10 口服纳豆激酶缓释颗粒对模型小鼠血栓治疗效果的评价 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 纳豆激酶缓释颗粒的设计与构建 |
| 6.4.2 颗粒双层壳-核结构的鉴定与验证 |
| 6.4.3 纳豆激酶缓释颗粒保藏过程中酶活的变化 |
| 6.4.4 缓释颗粒中纳豆激酶的体外释放特性 |
| 6.4.5 双层壳-核结构缓释颗粒所装载模型药物口服后在体内的释放 |
| 6.4.6 口服纳豆激酶缓释颗粒对黑尾模型小鼠的血栓治疗效果 |
| 6.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文的主要创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（7）血脑屏障体外微球模型的构建及其在中药神经毒性筛选中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 研究内容一 体外血脑屏障微球模型的构建及功能验证 |
| 实验一 体外血脑屏障微球模型建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验二 体外血脑屏障微球模型的细胞组成鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验三 体外血脑屏障微球模型的屏障完整性的结构验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验四 体外血脑屏障微球模型的生理功能验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验五 体外血脑屏障微球疾病模型的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 小结 |
| 研究内容二 有毒中药单体的神经毒性筛选及机制研究 |
| 实验一 计算机模拟评估45 种有毒中药单体的BBB渗透性 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验二 使用神经元细胞对中药有毒单体进行神经毒性筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验三 候选毒性药物的神经毒性验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验四 CTD对 BBB微球细胞活力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验五 CTD对BBB完整性蛋白及基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验六 CTD对BBB微球活性氧蓄积的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验七 CTD对BBB微球炎症相关基因及凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验八 CTD神经毒性的动物水平验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 3D生物打印组织模型的研究进展及在中药研究中的可期应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）口服次血红素六肽改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 糖尿病 |
| 1.1.1 糖尿病简介及流行性 |
| 1.1.2 糖尿病的诊断标准 |
| 1.2 2型糖尿病简介 |
| 1.2.1 2型糖尿病的发生机制 |
| 1.2.2 2型糖尿病并发症 |
| 1.2.3 2型糖尿病的临床药物 |
| 1.3 胰岛素抵抗 |
| 1.3.1 胰岛素信号转导 |
| 1.3.2 胰岛素抵抗的病理机制 |
| 1.3.3 氧化应激与胰岛素抵抗 |
| 1.4 次血红素六肽 |
| 1.4.1 次血红素六肽设计及其优点 |
| 1.4.2 次血红素六肽的稳定性 |
| 1.5 蛋白多肽类药物的口服给药 |
| 1.5.1 蛋白多肽类药物在2型糖尿病治疗中的应用 |
| 1.5.2 影响蛋白多肽类药物口服吸收生物利用度的屏障 |
| 1.5.3 提高蛋白多肽类药物口服生物利用度的策略 |
| 1.5.4 羧甲基壳聚糖 |
| 1.6 立题依据及实验设计 |
| 1.6.1 立题依据 |
| 1.6.2 实验思路 |
| 1.6.3 实验路线 |
| 第2章 口服DHHP-6抗2型糖尿病的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验动物 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 DhHP-6的合成与纯化 |
| 2.3.2 2型糖尿病小鼠模型的建立及给药 |
| 2.3.3 小鼠体重和血糖测定 |
| 2.3.4 口服葡萄糖耐受实验(OGTT) |
| 2.3.5 胰岛素抵抗实验(ITT) |
| 2.3.6 血清指标测定 |
| 2.3.7 抗氧化酶酶活/含量测定 |
| 2.3.8 肝功能指标测定 |
| 2.3.9 胰岛、肝脏及肾脏组织化学染色 |
| 2.3.10 统计学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 DhHP-6的合成、纯化与鉴定 |
| 2.4.2 DhHP-6能够降低2型糖尿病小鼠血糖 |
| 2.4.3 DhHP-6能够增强2型糖尿病小鼠对胰岛素的敏感性 |
| 2.4.4 DhHP-6能够促进2型糖尿病小鼠胰岛素分泌 |
| 2.4.5 DhHP-6能够改善2型糖尿病小鼠的葡萄糖耐受 |
| 2.4.6 DhHP-6能够维持2型糖尿病小鼠氧化与抗氧化系统平衡 |
| 2.4.7 DhHP-6能够改善2型糖尿病小鼠的血脂紊乱 |
| 2.4.8 DhHP-6能够保护2型糖尿病小鼠的肝脏功能 |
| 2.4.9 DhHP-6能够维持2型糖尿病小鼠肝脏组织的结构完整 |
| 2.4.10 DhHP-6能够维持2型糖尿病小鼠肾小球的结构完整 |
| 2.4.11 DhHP-6能够保护2型糖尿病小鼠胰岛组织的结构完整 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 DHHP-6改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的作用机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 肝脏匀浆及相关因子检测 |
| 3.3.2 肝脏总蛋白提取及样品处理 |
| 3.3.3 细胞培养 |
| 3.3.4 DhHP-6对HepG2 细胞毒性实验 |
| 3.3.5 HepG2细胞胰岛素抵抗模型的构建 |
| 3.3.6 葡萄糖吸收检测 |
| 3.3.7 糖原合成检测 |
| 3.3.8 糖原PAS染色 |
| 3.3.9 ROS含量检测 |
| 3.3.10 线粒体膜电位检测 |
| 3.3.11 线粒体压力检测 |
| 3.3.12 糖酵解压力检测 |
| 3.3.13 细胞蛋白提取及样品处理 |
| 3.3.14 western blot检测 |
| 3.3.15 统计学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 DhHP-6能够促进2型糖尿病小鼠糖代谢相关酶的表达 |
| 3.4.2 DhHP-6有利于2型糖尿病小鼠肝脏糖原的合成 |
| 3.4.3 DhHP-6能够激活2型糖尿病小鼠的胰岛素信号通路 |
| 3.4.4 DhHP-6 能够激活2 型糖尿病小鼠的AMPK信号通路 |
| 3.4.5 DhHP-6 能够激活2 型糖尿病小鼠的Nrf2-Keap1 信号通路 |
| 3.4.6 HepG2细胞胰岛素抵抗模型的构建 |
| 3.4.7 DhHP-6 能够促进HepG2 细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖吸收及糖原合成 |
| 3.4.8 DhHP-6 能够抑制HepG2 细胞胰岛素抵抗模型ROS的生成 |
| 3.4.9 DhHP-6 能够降低HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的线粒体膜电位 |
| 3.4.10 DhHP-6 能够缓解HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的线粒体压力 |
| 3.4.11 DhHP-6 能够改善HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的糖酵解压力 |
| 3.4.12 DhHP-6 能够激活HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的PI3K/AKT信号通路 |
| 3.4.13 DhHP-6 能够激活HepG2 细胞胰岛素抵抗模型的AMPK信号通路 |
| 3.4.14 DhHP-6 通过PI3K/AKT/Nrf2-Keap1 信号通路改善HepG2细胞胰岛素抵抗 |
| 3.4.15 DhHP-6 通过AMPK/Nrf2-Keap1 信号通路改善HepG2 细胞胰岛素抵抗 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 DHHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球制备 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞穿膜肽的合成及纯化 |
| 4.3.2 叶酸-羧甲基壳聚糖的合成及表征 |
| 4.3.3 Caco-2细胞培养 |
| 4.3.4 细胞毒性实验 |
| 4.3.5 Caco-2细胞吸收模型的建立 |
| 4.3.6 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球的制备 |
| 4.3.7 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球包封率、载药量的测定 |
| 4.3.8 单因素试验 |
| 4.3.9 正交试验 |
| 4.3.10 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球体外释放 |
| 4.3.11 统计学分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 细胞穿膜肽的合成、纯化及鉴定 |
| 4.4.2 叶酸-羧甲基壳聚糖表征 |
| 4.4.3 细胞穿膜肽、DhHP-6及羧甲基壳聚糖/叶酸-羧甲基壳聚糖毒性检测 |
| 4.4.4 细胞粘附能力检测 |
| 4.4.5 细胞穿膜肽的筛选 |
| 4.4.6 单因素试验结果 |
| 4.4.7 正交试验结果 |
| 4.4.8 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球粒径检测 |
| 4.4.9 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球形貌观察 |
| 4.4.10 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球体外释放 |
| 4.4.11 DhHP-6-细胞穿膜肽-叶酸-羧甲基壳聚糖微球Caco-2 细胞模型吸收能力测定 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 总结与创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（9）低剂量、亚慢性下黄曲霉毒素B1和微囊藻毒素LR诱导联合肝毒性效应与免疫互作影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语索引 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 膳食途径共暴露AFB_1+MC-LR现状 |
| 1.2 食品中多种化学物联合毒性效应评价方法与进展 |
| 1.2.1 基本概念 |
| 1.2.2 联合毒性效应评价方法分类 |
| 1.2.3 细胞和活体表达层面联合毒性效应主要评价方法 |
| 1.2.4 基因和蛋白表达层面联合毒性效应主要评价方法 |
| 1.3 共暴露AFB_1+MC-LR诱导联合肝毒性效应与免疫互作影响研究进展 |
| 1.3.1 共暴露AFB_1+MC-LR诱导联合肝毒性效应 |
| 1.3.2 共暴露AFB_1+MC-LR诱导免疫毒性 |
| 1.3.3 共暴露AFB_1+MC-LR影响肝脏免疫微环境 |
| 1.4 论文背景及内容 |
| 1.4.1 立题背景和意义 |
| 1.4.2 主要研究内容 |
| 第二章 不同人群膳食共暴露AFB_1+MC-LR诱发肝癌联合效应的模拟预测 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 基于CI模型预测小鼠低剂量、亚慢性下共暴露AFB_1+MC-LR诱导肝癌联合效应. |
| 2.3.2 基于IORP模型预测膳食途径人群共暴露AFB_1+MC-LR诱导肝癌联合效应 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 低剂量、亚慢性下小鼠共暴露AFB_1+MC-LR诱导肝癌联合效应 |
| 2.4.2 膳食途径人群共暴露AFB_1+MC-LR诱导肝癌联合效应 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 雄性野生型C57BL/6小鼠共暴露AFB_1+MC-LR诱导肝毒性生化指标表达差异性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 小鼠饲养、实验设计及灌胃实验 |
| 3.3.2 基于ELISA测定小鼠肝脏和血清中TBIL、ALT、AST、AKP和 AFP水平 |
| 3.3.3 统计方法 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 等效应比共暴露AFB_1+MC-LR诱导肝损伤生化指标表达差异性分析 |
| 3.4.2 非等效应比共暴露 AFB_1+MC-LR 诱导肝损伤生化指标表达差异性分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 雄性野生型C57BL/6小鼠共暴露AFB_1+MC-LR诱导肝毒性与免疫互作影响研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 小鼠饲养、灌胃及取样 |
| 4.3.2 基于Luminex技术测定TNFa、IGF-1、VEGF、IL-6、FGFb、TGFb、EGF和 Leptin等细胞因子11项免疫学蛋白靶标 |
| 4.3.3 基于CyTOF测定小鼠肝脏免疫细胞表达谱 |
| 4.3.4 统计分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 AFB_1+MC-LR诱导小鼠血清及肝脏中细胞因子表达差异性研究 |
| 4.4.2 AFB_1+MC-LR 诱导小鼠肝脏免疫细胞亚群丰度及谱图研究 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 雄性野生型C57BL/6小鼠共暴露AFB_1+MC-LR诱导肝毒性与免疫互作信号通路分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料仪器 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 基于RNA-Seq测序挖掘肝毒性及免疫互作基因通路 |
| 5.3.2 基于Q-PCR实验定量分析目标基因表达水平 |
| 5.3.3 基于Western bolt实验分析目标蛋白表达水平 |
| 5.3.4 统计分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 AFB_1+MC-LR诱导肝毒性性与免疫互做差异性基因表达分析 |
| 5.4.2 AFB_1+MC-LR诱导肝毒性及免疫互做关键信号通路挖掘 |
| 5.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 本论文创新点 |
| 附录 :作者在攻读博士学位期间发表的论文和成果 |
（10）靶向肿瘤血管的磁纳米促凝血蛋白的构建及其活性鉴定（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 一、肿瘤栓塞治疗概述 |
| 二、栓塞剂的分类及特点 |
| 三、常规栓塞剂的不足 |
| 四、本研究的设想及整体思路 |
| 五、本研究的技术路线 |
| 第二章 融合蛋白的制备与鉴定 |
| 一、材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 二、结果与分析 |
| 1 含tTF-EG3287 pET-22b(+)重组质粒的大肠杆菌的序列分析 |
| 2 融合蛋白tTF-EG3287的表达与鉴定 |
| 3 融合蛋白tTF-EG3287的纯化 |
| 4 融合蛋白tTF-EG3287的复性、浓缩与鉴定 |
| 三、讨论 |
| 第三章 磁纳米促凝血蛋白的制备与表征 |
| 一、材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2.磁纳米促凝血蛋白tTF-EG3287/CMC/Fe_3O_4的制备 |
| 3.制备产物的表征 |
| 二、结果与分析 |
| 1 透射电镜观察(TEM)及粒径分析 |
| 2 傅里叶红外光谱(FTIR)分析 |
| 3 超顺磁性检测 |
| 4 X射线衍射表征(XRD) |
| 5 悬浮稳定性观察 |
| 三、讨论 |
| 第四章 磁纳米促凝血蛋白的生物学活性鉴定 |
| 一、材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 二、结果与分析 |
| 1 磁纳米促凝血蛋白NRP-1靶向性的鉴定 |
| 2 磁纳米促凝血蛋白促凝血活性的评估 |
| 3 CCK-8试验检测促凝血蛋白的细胞毒性 |
| 三、讨论 |
| 第五章 磁纳米促凝血蛋白的体内研究 |
| 一、材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 二、结果与分析 |
| 1 磁纳米促凝血蛋白磁靶向性评估 |
| 2 磁纳米促凝血蛋白抑瘤活性的评估 |
| 3 原位肝癌模型的构建 |
| 4 磁纳米促凝血蛋白在原位肝癌模型中的治疗效果的评估 |
| 三、讨论 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、~(32)磷-玻璃微球区域给药治疗肝癌的实验及临床研究通过鉴定达到国际领先水平（论文参考文献）
- [1]钇-90(90Y)微球选择性内放射治疗原发性和转移性肝癌的中国专家共识[J]. 中国临床肿瘤学会核医学专家委员会,北京市核医学质量控制和改进中心. 中华肝脏病杂志, 2021(07)
- [2]CTAB抑制乳腺癌转移及其机制研究[D]. 李宁. 大连理工大学, 2021(01)
- [3]荧光磁靶向载药纳米粒的组装及体外抗肿瘤活性研究[D]. 骆强. 塔里木大学, 2021(08)
- [4]丹参联合三氧化二砷瘀毒同治调控糖酵解逆转巨噬细胞极化的抗肝癌机制研究[D]. 姜涛. 浙江中医药大学, 2021(02)
- [5]芪术抗癌方对肝细胞癌干性标志物影响的研究[D]. 孙新锋. 广州中医药大学, 2021(02)
- [6]产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用[D]. 张轩. 江南大学, 2021(01)
- [7]血脑屏障体外微球模型的构建及其在中药神经毒性筛选中的应用[D]. 张雷. 天津中医药大学, 2021(01)
- [8]口服次血红素六肽改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的机制研究[D]. 汪凯. 吉林大学, 2020(03)
- [9]低剂量、亚慢性下黄曲霉毒素B1和微囊藻毒素LR诱导联合肝毒性效应与免疫互作影响研究[D]. 李耘. 江南大学, 2020(04)
- [10]靶向肿瘤血管的磁纳米促凝血蛋白的构建及其活性鉴定[D]. 邹明园. 厦门大学, 2019(09)