一、Calorie Restriction CanIncrease Thymocyte Apoptosis through Bcl-2 and Fas Pathway（论文文献综述）
陈县祥,廖世杰,李波香,李崇,黄乾,林成森,刘云,陆荣斌,丁晓飞[1]（2022）在《Perthes病不同种属动物模型的特点及应用》文中指出背景:Perthes病发病较为隐蔽,早期易漏诊,至今其发病机制仍未完全阐明。动物模型是研究Perthes病发病机制、进行体内实验的重要工具。目的:总结国内外相关文献,按不同种属动物进行分类对Perthes病动物模型的特点及应用情况进行综述,为Perthes病体内实验研究提供参考。方法:以"Perthes、动物、动物模型、Perthes disease、Animal model、animal"为检索词,在PubMed、中国知网、万方及维普数据库中检索文献,根据纳入和排除标准最终纳入61篇文献。结果与结论:（1）建立Perthes病动物模型主要的种属动物有仔猪、大鼠、小鼠、幼兔、幼犬和幼羊,仔猪、大鼠、幼兔、幼犬和幼羊是在股骨近端造模的,而小鼠在股骨远端造模。（2）目前为止,仔猪是造Perthes病模型所用最多的动物,股骨颈环扎法对仔猪进行建模最为成熟;大鼠骨骺生长板终身存在,且自发性高血压大鼠具有原发性股骨头缺血坏死的特点;（3）小鼠有利于基因操作的优点,小鼠在基础研究中很有应用前景;幼兔体型适中、股骨头大小适中,易于观察和取材;（4）幼犬体积较大,方便做局部操作研究,但较难圈养且价格较贵;（5）幼羊造模的影像学改变与Perthes病并不相似。（6）目前综合而言,具体选哪种动物及方法构建Perthes病动物模型,需根据学者的实验条件及实验目的来选择,而股骨颈环扎法对仔猪进行建模的方法最为成熟,因此用仔猪建立Perthes病模型的建模效果最佳。
龚宝铭[2]（2021）在《小鼠骨骼肌OGT在高脂肥胖模型中作用及雷公藤红素调控机理研究》文中进行了进一步梳理
曾艳[3]（2021）在《靶向抑制GSK-3β促进衰老小鼠TECs增殖及T淋巴细胞再生的效应及机制研究》文中研究指明
王靖怡[4]（2021）在《血管抗衰方通过miR-146a/TRAF6/NF-κB改善血管衰老机制研究》文中指出血管衰老在机体衰老过程中发挥重要作用,现已成为心脑血管疾病的首要危险因素。目前,血管衰老相关研究多集中于机制层面,临床干预手段较为局限,多围绕防治危险因素或改善内皮功能等方面展开。中医对于衰老的认识历史久远,围绕“未老先养”理念构建了丰富的理论和诊疗体系。因此,深入挖掘中医衰老相关认知,结合现代研究方法,进一步探索延缓血管衰老的具体干预措施及其机制是有意义的。有鉴于此,在“七情”须使合和指导下,结合血管衰老病生理过程及中医对血脉理论相关认识,选用植物基源相近、成分相似、传统功效互有重叠和补充的人参和三七组成血管抗衰方,共同发挥益气活血,通补血脉之功。为明确该方能否针对血管衰老发挥效用,本研究利用生物信息学、网络药理学、临床研究及细胞实验多种方法,旨在探索血管抗衰方的临床有效性及其具体作用机制,以期为延缓血管衰老提供切实有效的干预手段。目的利用生物信息学对衰老内皮细胞差异表达miRNA分子进行筛选,并预测差异表达miRNA分子作用的靶基因及下游通路,初步构建调控关系,利用网络药理学预测血管抗衰方干预血管衰老可能的作用靶点及涉及的生物学功能,通过临床研究验证其有效性及安全性,并在细胞实验中探讨其发挥作用的分子机制,系统构建“中医理论-组方用药-生信预测-临床验证-机制研究”的研究模式,以揭示血管抗衰方可从miRNA水平改善血管衰老。方法第一部分利用生物信息学方法筛选衰老内皮细胞差异表达miRNA及血管抗衰方延缓血管衰老作用靶点预测研究首先,利用GEO数据库筛选衰老内皮细胞差异表达miRNA分子,对GSE92655和GSE37092两个数据集进行分析,利用R语言（3.6.3版本）处理数据矩阵,以|log2FC|≥ 1 且 adjusted P value<0.05 作为筛选 DEMs（Differentially Expressed miRNAs）的条件,对筛选出的DEMs进行VENN交集,寻找共同的DEMs信息,利用ggplot2包绘制火山图并对DEMs进行标注,利用GEO2R分析工具对表达矩阵进行归一化处理后绘制相关图形。其次,利用TargetScan、miRTarBase 8.0、miRDB三大数据库对DEMs下游靶基因进行预测,进行VENN交集以提高预测准确性,同时利用Metascape网站对差异表达miRNA下游靶基因进行富集分析,miRpathDB2.0数据库及KEGG筛选并明确后续研究的下游通路。最后,利用口服生物利用度（oral bioavailability,OB≥30%）和类药性（drug-likeness,DL≥0.18）作为筛选条件,在TCMSP平台筛选血管抗衰方组成药物人参、三七主要活性成分,并利用CNKI及PubMed对其结果进行补充,利用TCMSP、ETCM及PharmMapper（norm fit≥0.9）获取成分靶点信息,利用cytoHubba获取排名前十的活性成分;利用NCBI、GeneCards、HAGR、OMIM收集血管相关疾病与衰老相关基因,取交集获得血管衰老相关基因,构建疾病靶点数据集,通过对成分靶点与疾病靶点取交集筛选出血管抗衰方主要活性成分发挥延缓血管衰老功效的潜在靶点,进行蛋白-蛋白互作网络构建与富集分析,以明确血管抗衰方可能参与的生物学过程或所涉及的信号通路。第二部分血管抗衰方干预血管衰老临床试验及miR-146a/TRAF6/NF-KB调控关系初步探索采用自身前后配对设计,对血管抗衰方临床有效性及安全性进行探索性研究,纳入血管动脉硬化检测诊断为动脉硬化的受试者共40例,给予血管抗衰方进行为期4周的干预。临床研究分为3部分开展,分别为有效性、安全性及探索性指标。有效性研究中分为主要疗效指标和次要疗效指标,主要疗效指标包括受试者脉搏波传导速度数值变化,以及血管僵硬度评级变化;次要结局指标包括血压、踝臂指数、生化指标、细胞因子、血液流变学及颈动脉超声。安全性指标包括血尿常规、肝肾功能及凝血功能,用以评估该药物的临床安全性。探索性指标包括:受试者血浆样品NO及ET-1变化情况以反映内皮功能变化;利用实时荧光定量PCR技术检测血液样品中miR-146a、TRAF6、NF-κB及下游相关炎症因子表达水平变化,并采用2-△△Ct计算治疗前后差异表达倍数。第三部分血管抗衰方调控miR-146a/TRAF6/NF-KB干预衰老内皮细胞作用机制研究首先,筛选合适的药物诱导模型,分别采用不同浓度梯度Ang Ⅱ和TNF-α对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）诱导24h,光镜下观察细胞形态学变化,CCK8法检测细胞增殖情况,SA-β-gal染色检测细胞衰老情况,流式检测细胞周期,RT-qPCR检测不同模型诱导后对miR-146a表达影响情况,综合选取适宜的造模药物及浓度。其次,在药物诱导模型上,进行血管抗衰方、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和三七总皂苷PNS无毒浓度筛选,利用CCK8法检测上述药物对细胞增殖抑制率的影响,以确定适宜药物干预浓度。最后,进行药物干预衰老内皮细胞的机制研究,共分为:对照组、TNF-α模型组、TNF-α模型组+人参皂苷Rg1组、TNF-α模型组+三七皂苷R1组、TNF-α模型组+人参皂苷Rg1组+三七皂苷R1组、TNF-α模型组+血管抗衰方组、TNF-α模型组+三七总皂苷PNS组,对各组细胞分别进行CCK8检测、SA-β-gal染色、流式检测,从增殖、衰老、细胞周期等功能层面评估药物作用,利用RT-qPCR、Western Blot和ELISA检测,判断miR-146a/TRAF6/NF-κB及其下游炎症效应分子表达水平变化。结果第一部分1、GSE92655 和 GSE37092 中获得 3 个共同的 DEMs,分别为 hsa-miR-146a、hsa-miR-181a、hsa-miR-1275。共同上调 DEM 为 hsa-miR-181a,共同下调 DEM为hsa-miR-1275,has-miR-146a在两个数据集中呈现不同差异表达趋势,故选定为本研究主变量;2、miRTarBase 8.0、TargetScan、miRDB 中对 miR-146a 下游靶基因预测交集为14 个:ERBB4、IRAK1、TRAF6、CD80、CARD10、LRP2、RARB、NUMB、CCDC6、PPP1R11、ROBO1、KDM2B、LFNG、SLC10A3,涉及前额发育、激活NF-κB诱导的激酶活性、模式规范过程、前额神经元产生、细胞间受体信号通路等。miRpathDB2.0及KEGG筛选出miR-146a与NF-κB信号通路及炎症反应关系密切。构建miR-146a/TRAF6/NF-κB作为血管衰老的可能机制。3、筛选出人参活性成分27个,作用靶点201个,三七活性成分12个,作用靶点150个,二者共同作用靶点为139个,cytoHubba分析排名前10的活性成分包括:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等;四个数据库共获得246个血管衰老相关靶点;将成分靶点与疾病靶点取交集后有22个共同靶点,PPI网络及MCODE聚类显示以炎症和凋亡为主,GO和KEGG分析显示涉及调控NF-κB信号通路。预测血管抗衰方可能通过调控NF-κB信号通路改善血管衰老。第二部分1、血管抗衰方能够降低患者脉搏波传导速度,改善血管僵硬度评级,改善受试者血压水平,降低总胆固醇水平,升高高密度脂蛋白胆固醇水平,改善血液流变学情况,降低血液粘稠度;2、血管抗衰方对受试者血常规、肝肾功能无明显影响,对患者凝血功能有一定的调节作用;3、血管抗衰方可以降低受试者血浆中ET-1水平;在miR-146a/TRAF6/NF-KB调控关系验证中发现,血管抗衰方能够下调受试者miR-146a和NF-κB以及NF-κB1的表达水平,上调TRAF6表达水平,对于NF-κB通路后续效应因子也具有下调作用,以VCAM下调最为明显。第三部分1、形态学方面,TNF-α与Ang Ⅱ诱导后,HUVEC细胞排列逐渐稀疏,体积增大,胞内逐渐浑浊,且与Ang Ⅱ相比,TNF-α诱导后的细胞排列更为稀疏松散;CCK8法检测结果显示,采用Ang Ⅱ诱导细胞与对照组相比无显着变化,200ng/ml、100ng/ml和50ng/ml TNF-α对细胞增殖存在抑制作用,且存在浓度依赖现象;SA-β-gal染色阳性率显示,与对照组相比,Ang Ⅱ在四个浓度下诱导HUVEC的染色阳性率无显着变化,而TNF-α四个浓度均可使HUVEC的SA-β-gal染色阳性率升高;流式检测发现两种药物均可使细胞在G0/G1期聚集,且随诱导浓度的增加,GO/G1期占比随之增加。综上,选择100ng/ml TNF-α为模型诱导药物;2、CCK8法筛选药物无毒浓度分别为:人参皂苷Rgl 50μg/ml;三七皂苷R112.5μg/ml;三七总皂苷50μg/ml;血管抗衰方200μg/ml;3、功能层面,五种干预方式均能显着降低细胞增殖抑制率,提高细胞增殖能力,其中,以三七总皂苷和血管抗衰方效果更为明显;五种干预方式均能显着减少衰老细胞的数量和程度,其中人参皂苷Rg1+三七皂苷R1、三七皂苷R1更为明显;五组干预方式均能显着降低细胞G0/G1期占比,改善细胞周期阻滞,其中三七总皂苷和人参皂苷Rg1效果更为明显;4、在miR-146a/TRAF6/NF-κB通路验证中,五组药物均能降低miR-146a、TRAF6表达水平,五组药物干预后与模型组相比能够降低磷酸化形式的IκBα和磷酸化的p65,对于NF-κB起到一定的抑制作用,对于NF-κB通路下游相关炎症效应分子表达水平的改变具体包括:人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg1+三七皂苷R1、三七总皂苷PNS可以降低TNF-α水平,人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、血管抗衰方可以降低IL-1β的表达水平,人参皂苷Rg1+三七皂苷R1、血管抗衰方、三七总皂苷PNS可以降低VCAM表达水平;5、对于衰老相关分子标志物p16和p21而言,五组药物均能有效降低p16的表达水平,但对于p21表达水平的降低,以三七皂苷R1、血管抗衰方、三七总皂苷PNS为主发挥效应。结论1、生物信息学方法筛选出衰老血管内皮细胞差异表达miRNA分子为miR-146a,预测并构建miR-146a/TRAF6/NF-κB作为血管衰老炎症相关调控环节;2、血管抗衰方改善血管衰老临床有效,能够改善血管壁僵硬程度、内皮舒缩功能及血液粘稠度,对miR-146a/TRAF6/NF-κB可发挥调控作用,其中以miR-146a和NF-κB改善更为明显;3、血管抗衰方及其重要单体成分或组合形式,可以改善TNF-α诱导的内皮细胞衰老模型,降低衰老相关标志物水平,同时通过改善细胞增殖能力、减少细胞周期阻滞发挥功效;能够显着降低miR-146a和TRAF6表达水平,抑制NF-κB通路激活,降低其下游炎症效应分子表达水平,抑制衰老相关炎症反应。
陈博[5]（2021）在《基于网络药理学研究当归补血汤延缓衰老的作用机制》文中研究表明衰老,是机体发育成熟后,各细胞、器官和组织在形态、结构以及生理功能等方面出现的退行性变化,且是由多种因素共同作用的结果。随着世界人口老龄化和衰老相关疾病发病率的不断增长,带来的社会和经济负担也在不断加重。因此,开展衰老机制研究,开发延缓衰老的药物,降低衰老相关疾病发病率,对改善人们生活水平,提高生活质量具有重要意义。中药已有几千年的历史,具有多成分、多靶点和多功能的作用特点,在预防和治疗复杂疾病等方面具有明显的优势。经典名方“当归补血汤”出自于金代名医李东垣所着《内外伤辨惑论》,其具有多种药理活性。在以往的研究中也报道过当归补血汤的抗衰老活性,但其延缓衰老的作用机制并未见国内外文献报道。因此,本文利用网络药理学方法,从整体和系统的角度出发,预测并验证当归补血汤延缓衰老的作用机制。本文首先利用网络药理学方法建立当归补血汤的抗衰老活性预测模型,以期能减少研究的盲目性、提高研究效率,然后采用分子生物学技术验证预测模型,同时,研究当归补血汤对衰老大鼠肝肾功能、造血功能以及免疫系统的影响,将网络药理学技术与传统的分子生物学技术相结合,系统阐明并揭示当归补血汤延缓机体衰老的作用机制。（1）采用网络药理学方法预测当归补血汤延缓衰老的分子机制,分析结果表明:当归补血汤主要有槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇、山奈酚等活性成分,主要作用于IL6、IL10、TNF、VEGFA、AKT1、TP53、SERPINE1、PPARG、HIF1A等靶点,通过对JAK-STAT信号通路、PI3K-AKT信号通路、TNF信号通路、TCR信号通路、VEGF信号通路和m TOR信号通路的调节,抑制衰老引发的炎症反应,并通过调节自身免疫,调控细胞周期达到延缓机体衰老的目的。（2）通过检测大鼠肝肾组织和血清中的抗氧化和脂质过氧化指标发现,当归补血汤可提高衰老大鼠肝肾组织和血清中SOD和GSH含量,降低MDA水平增强机体的抗氧化能力,减少机体的氧化损伤,从而发挥延缓衰老的作用。（3）当归补血汤对衰老大鼠肝肾功能的影响结果发现,当归补血汤可降低血清中ALT、AST以及BUN、CRE的含量,减轻肾脏炎症和纤维化,从而起到对肝肾组织的保护作用。（4）当归补血汤对衰老大鼠骨髓造血功能的影响结果发现,当归补血汤可提高衰老大鼠外周血中WBC、RBC、PLT和骨髓中BMNC细胞数目,降低大鼠骨髓Sca-1+BMNC的粘附分子CD44和CD49d的表达,促进G1期阻滞的BMNC细胞进入S期。提示当归补血汤可通过增强细胞的分裂增殖,提高机体的造血机能,起到延缓机体衰老的作用。（5）当归补血汤通过降低大鼠血清中IL-6和TNF-α的释放,提高IL-10的含量,从而减轻机体的炎症损伤;并通过降低T淋巴细胞凋亡因子Fas/Fas L的表达,抑制T淋巴细胞的凋亡从而调节机体免疫水平;还可通过对PI3K-AKT/CDKRb通路和PI3K-AKT/MDM2-p53通路中蛋白表达的调节从而调节细胞周期、细胞增殖与凋亡,进而发挥其延缓衰老的作用。
谭旺[6]（2021）在《Irisin缓解代谢相关性脂肪肝的作用与机制研究》文中指出研究背景:代谢相关性脂肪肝（Metabolic-associated fatty liver disease,MAFLD）是代谢综合征在肝脏的表现。随着经济发展,生活方式改变,MAFLD的患病人数越来越多。目前MAFLD仍然缺乏有效治疗药物,运动被认为是MAFLD低成本且疗效显着的干预措施,但是运动改善MAFLD机制尚不明确。Irisin是运动时骨骼肌大量生成与分泌的一种肌肉因子,参与运动对多种代谢性疾病保护性调整,但是irisin在运动改善MAFLD中作用尚不明确。因此irisin是否参与运动改善MAFLD的作用及其可能机制值得进一步研究阐明,这将有助于确立irisin在MAFLD治疗中的作用。研究目的:本研究进一步证实运动对MAFLD的缓解与改善效果,探讨运动对irisin的表达调控作用,并充分证明irisin是否介导了运动对MAFLD的改善作用,深入剖析irisin抑制肝脏脂肪变性的潜在调控信号通路。研究方法:首先采用db/db小鼠自发性脂肪肝模型,利用跑台干预,观察运动是否能调控肝脏irisin的分泌而改善MAFLD。选取8周龄10只m/m小鼠作为正常对照组（NC组）,20只db/db小鼠随机分为脂肪肝模型组（MC组,n=10）、脂肪肝运动组（ME组,n=10）,其中ME组小鼠进行为期8周跑台运动干预。运动干预8周后处死各组小鼠取材,收集血清采用ELISA检测血清中irisin表达水平,收集肝脏,检测肝脏TG、TC、ALT、AST含量,HE染色和油红O染色评估肝脏中脂肪沉积,Western Blot检测肝脏AMPK、p-AMPK、PGC-1α及irisin蛋白表达。为了进一步验证irisin对运动缓解MAFLD的作用与潜在的机制,本研究通过高脂饮食（High-fat diet,HFD）建立肥胖相关脂肪肝大鼠模型,利用外源性irisin腹腔注射干预,探讨irisin对MAFLD的作用及其调控机制。选取8周龄SD大鼠30只,随机分成2组,10只作为正常对照组（NC组）,给予正常饮食,余下20只大鼠给予高脂饲料（HFD）喂养9周以建立肥胖相关脂肪肝模型,随后将高脂饲养大鼠再随机分为2组:脂肪肝模型组（FL组）和脂肪肝irisin腹腔注射组（FI组）,每组各10只。FI组大鼠采用腹腔注射外源性irisin 5周。外源性irisin注射5周结束后,处死各组大鼠。收集血清,ELISA检测血清irisin表达;收集肝脏,检测血清和肝脏TG、TC、ALT、AST、SOD、MDA含量;HE和油红O染色检测大鼠肝脏脂质蓄积;Western Blot检测肝组织脂肪合成相关蛋白（SREBP1、ACC1）、脂解相关蛋白（HSL、ATGL）、脂肪酸氧化相关蛋白（PGC-1α、PPARα、PPARγ）及SIRT1/AMPK信号通路相关蛋白表达,胰岛素信号通路相关蛋白（PI3K、Akt、p-Akt）、自噬相关蛋白（LC3、p62、Beclin1）、凋亡相关蛋白（Bax、Bcl2、Caspase-8、Cleaved-Caspase-3）、炎症相关蛋白（NF-κB、TNF-α、IL-6）的表达以探讨相关的分子机制。研究结果:1、运动诱导irisin缓解肝脏脂肪变性:与NC组小鼠相比,MC组小鼠血清和肝脏irisin表达明显低下（P<0.05,P<0.01）,然而跑台运动可以诱导db/db小鼠肝脏irisin的表达（P<0.001）,增加血清irisin水平（P<0.05）,从而逆转其肥胖所致的db/db小鼠irisin水平的低下;与NC组小鼠相比,MC组小鼠体重增长速度、空腹血糖明显增加（P<0.05,P<0.01）,跑台运动可以显着降低db/db小鼠体重增长速度、空腹血糖变化幅度（P<0.05,P<0.001）;与NC组小鼠相比,MC组小鼠肝脏TG、TC、ALT、AST的含量增加（P<0.0001,P<0.01,P<0.01,P<0.0001）,而跑台运动可以显着减少db/db小鼠肝脏TG、TC、ALT、AST的含量（P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05）,改善其血脂和减轻肝脏损伤;HE和油红O染色显示,与NC组小鼠相比,MC组小鼠肝脏脂滴显着增加（P<0.01）,形成大泡性脂肪变,变性程度达到了63%,伴有肝细胞肿胀和小叶炎症,肝脏NASH评分明显增加（P<0.0001）,而跑台运动可以显着减轻db/db小鼠肝脏脂肪变性、炎症浸润,NASH评分明显减少（P<0.0001）;蛋白检测结果显示,与NC组小鼠相比,MC组小鼠肝脏p-AMPK和PGC-1α表达水平显着下降（P<0.01,P<0.001）,而跑台运动能显着增加p-AMPK和PGC-1α表达水平（P<0.001,P<0.001）。2、外源性irisin改善肝脏脂肪变性:与NC组大鼠相比,HFD饲养9周可诱导大鼠体重显着增加（P<0.01）,在高脂饲养9周的条件下可成功构建肥胖相关脂肪肝模型。与NC组大鼠相比,FL组大鼠体重增长速度（P<0.01）、空腹血糖明显增加（P<0.01）,糖耐量异常,血清和肝脏组织TG（P<0.01）、TC（P<0.01）、ALT（P<0.01）、AST（P<0.01）显着增加,肉眼观察、HE和油红O染色显示肝脏表面粗糙,呈淡黄色,脂质空泡弥漫性堆积,NASH评分明显增加（P<0.0001）,而经过irisin干预可以显着降低脂肪肝大鼠体重增长速度和空腹血糖（P<0.01）,改善糖耐量,降低血清和肝脏组织TG（P<0.01）、TC（P<0.01）、ALT（P<0.01）、AST（P<0.05）,改善血脂和肝脏功能,大体观和染色结果提示irisin可以减轻肝脏脂肪变性、炎症浸润,NASH评分显着降低（P<0.0001）。3、外源性irisin改善肝脏脂肪变性的相关机制:与NC组大鼠相比,FL组大鼠血清和肝脏SOD下降、MDA升高,而经irisin治疗显着提高了其SOD和降低了其MDA,缓解脂肪肝大鼠肝脏氧化应激;与NC组大鼠相比,FL组大鼠肝脏SREBP1和ACC1表达显着上升（P<0.05,P<0.001）,HSL和ATGL表达显着下降（P<0.01,P<0.01）,PGC-1α、PPARα、PPARγ表达显着减少（P<0.001,P<0.001,P<0.001）,然而irisin治疗后可以显着抑制SREBP1和ACC1的表达（P<0.05,P<0.001）,增加HSL和ATGL表达（P<0.01,P<0.01）,增加PGC-1α、PPARα、PPARγ的表达（P<0.01,P<0.0001,P<0.001）,表明irisin能减少肝脏脂质合成、增加肝脏脂质分解和氧化而减轻肝脏脂肪变性;与NC组大鼠相比,FL组大鼠肝脏SIRT1和p-AMPK水平低下（P<0.01,P<0.001）,p-mTOR显着增加（P<0.001）,与之相反,irisin显着上调SIRT1和p-AMPK（P<0.0001,P<0.01）,下调p-mTOR（P<0.0001）,表明irisin的降脂作用可能与激活SIRT1/AMPK有关,也可以通过抑制mTOR从而抑制脂肪合成;与NC组大鼠相比,FL组大鼠肝脏LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1表达明显减少（P<0.01,P<0.01）,p62表达明显增加（P<0.01）,但是irisin可显着增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1的表达（P<0.01,P<0.01）,降低p62的表达（P<0.0001）,表明irisin可以改善肝脏脂肪变性引起的自噬活性减弱;与NC组相比,FL组大鼠肝脏Bax、Cleaved-Caspase-3、Caspase-8表达和Bax/Bcl2比值显着增加（P<0.001,P<0.0001,P<0.0001,P<0.01）,Bcl2表达显着减少（P<0.001）,irisin显着减少Bax、cleaved-Caspase-3和Caspase-8表达和Bax/Bcl2比值（P<0.01,P<0.01,P<0.001,P<0.01）,Bcl2蛋白表达增加（P<0.001）,表明irisin可以抑制HFD所致的肝细胞凋亡;与NC组相比,FL组大鼠肝脏PI3K和p-Akt蛋白减少（P<0.001,P<0.0001）,而irisin显着增加PI3K和p-Akt（P<0.01,P<0.001）,表明irisin可以激活PI3K/Akt途径提高HFD所致的肝脏胰岛素敏感性降低;与NC组大鼠相比,FL组大鼠肝内TNF-α、IL-6和NF-κB表达显着增加（P<0.001,P<0.0001,P<0.001）,而irisin显着下调TNF-α、IL-6和NF-κB的表达（P<0.01,P<0.001,P<0.01）,表明irisin可以通过抑制NF-κB炎症信号改善HFD所致的肝脏炎症状态。研究结论:1、跑台运动可以诱导db/db小鼠肝脏irisin表达,从而一定程度上改善db/db小鼠代谢相关性脂肪肝,可能主要是运动干预通过激活肝脏组织AMPK及其下游PGC-1α上调irisin表达,促进机体能量代谢而缓解或改善肝脏脂肪变性。2、外源性irisin腹腔注射5周能有效改善HFD诱导的代谢相关性脂肪肝。3、Irisin部分介导了运动对MAFLD的改善调整,初步的机制研究表明,irisin可以通过激活SIRT1/AMPK信号通路和抑制mTOR来抑制脂肪的初始合成,并促进脂肪酸的氧化和分解。同时,irisin可以通过激活PI3K/Akt信号通路以及抑制NF-κB炎症信号通路来改善胰岛素抵抗和炎症状态,且能够促进肝脏细胞自噬和抑制肝脏细胞凋亡,从而减少肝脏脂质沉积和保护肝脏。
曹立东[7]（2021）在《早期妊娠对绵羊淋巴结补体信号通路和NF-κB信号通路的影响》文中指出反刍家畜经济效益低的一个主要原因是产羔或者产犊率低。据报道,70%–80%的胚胎丢失发生在妊娠早期。因反刍动物胚胎早期死亡,每年造成的经济损失达数亿元。胚胎丢失的高峰期恰好是母体妊娠识别和胚胎附植的关键时期,胚胎与母体子宫无法建立联系,受到母体的免疫排斥,是导致胚胎死亡或丢失的主要原因。早期妊娠会引发母体发生一系列免疫应答反应,而淋巴结是一种重要的免疫器官,同时淋巴结具有适应性免疫应答功能。补体（Complement）系统在先天性免疫防御中起着重要的作用,与适应性免疫反应的形成有关。NF-κB（nucler factor kappa B,NF-κB）信号通路在调节先天性和适应性免疫方面也发挥重要作用。本研究选用健康的18月龄小尾寒羊母羊作为试验材料,将24只母羊随机分为4组（每组6只）,发情后配种或不配种,屠宰后采集配种后妊娠第13、16和25天和未妊娠第16天的淋巴结。采用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学等试验方法,分析了两个信号通路。1.绵羊早期妊娠母体淋巴结补体信号通路中C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4a、C5b和C9的表达。结果表明:与未妊娠第16天相比C1q、C1s、C3和C5b在早期妊娠绵羊淋巴结中m RNA和蛋白表达在妊娠期间第13、16和25天表达均上调,C2、C9和C1r、C4a在妊娠第16天和妊娠第25天的表达与未妊娠第16天相比差异显着,表达均上调。此外,免疫组织化学结果显示C3蛋白在包膜下窦和淋巴窦中表达。说明早期妊娠导致母体淋巴结补体信号通路中各成分表达上调,这可能是绵羊成功妊娠的必要条件。2.绵羊早期妊娠母体淋巴结NF-κB信号通路中p65、p50、p52、Rel B和c-Rel的表达。结果表明:与未妊娠第16天相比早期妊娠引起绵羊淋巴结p65、Rel B和c-Rel的m RNA和蛋白表达在妊娠第13天表达上调,而p52则在妊娠第25天时与未妊娠第16天相比差异显着,且表达上调。但是早期妊娠抑制了p50的表达。此外,免疫组织化学结果显示p65蛋白在包膜下窦和淋巴窦中表达。因此,早期妊娠引起绵羊淋巴结免疫反应的改变,可能是通过上调p65、p52、Rel B和c-Rel的表现来实现的。综上所述,早期妊娠导致母体淋巴补体信号通路和NF-κB通路中各成分表达的上调,从而参与了绵羊早期妊娠母体淋巴结的免疫耐受调节。
张丽[8]（2021）在《小鼠胸腺和脾脏增龄性变化的转录组和蛋白组学研究》文中进行了进一步梳理研究背景免疫衰老指随着年龄的增长,因免疫器官结构破坏和免疫反应功能障碍,造成先天性和适应性免疫受损,导致老年人免疫功能的改变,伴随以慢性炎症为特征的全身炎症状态,与感染、自身免疫性疾病以及肿瘤等的发生发展密切相关。目前免疫衰老的确切机制尚未完全明确。初级和次级淋巴器官结构和功能的破坏可导致免疫功能减退,因此免疫器官增龄性变化可能与免疫衰老的发生有关。胸腺和脾脏作为机体最大的中枢和外周免疫器官,随着年龄增加,结构和功能发生改变,正常微环境的破坏以及T淋巴细胞数目的减少引起机体免疫功能的减退,影响外周免疫的稳态,可能促进与年龄有关的机体炎症状态以及免疫衰老的发生。衰老引起的胸腺及脾脏结构和功能的变化可能与免疫衰老存在关联。目的胸腺和脾脏增龄性分子变化以及机制目前尚未明确。本实验通过基于整合转录组和蛋白质组学方法,揭示不同年龄组小鼠胸腺和脾脏组织在转录组和蛋白组水平上的增龄性分子变化,探讨胸腺、脾脏的增龄性变化在免疫衰老中潜在作用,为免疫衰老导致的相关疾病的诊治提供可能的候选靶标。方法本实验首先通过HE染色、免疫组化以及透射电镜超微观察等方法研究不同年龄组（6周龄,6月龄,20月龄）小鼠胸腺和脾脏免疫器官组织学变化。随后通过整合RNA-seq转录组学方法以及串联质谱标签（TMT）相对定量蛋白质组学技术,研究不同年龄组小鼠胸腺和脾脏组织在转录组和蛋白组水平上的表达差异变化,结合生物信息学方法分析其所富集的通路,筛选出增龄相关的差异基因和蛋白,并进一步验证筛选出的差异基因与蛋白。结果1.小鼠增龄性免疫器官重量及指数变化小鼠鼠体重随着年龄增长而增加。小鼠胸腺重量随年龄增加而减少,20月龄组和6月龄组小鼠胸腺重量均显着低于6周龄组,且具有统计学意义。小鼠脾脏重量随着年龄增加变化不显着,20月龄和6月龄组小鼠脾脏重量高于6周龄组,均无统计学差异。小鼠胸腺指数和脾脏指数均随年龄增加而显着减少。2.免疫器官组织学变化（1）胸腺HE染色:6周龄组小鼠胸腺皮髓质界限清晰,皮质着色深,淋巴细胞致密、染色较深;髓质着色较浅,结构稍疏松,淋巴细胞数目较皮质少,有大量TECs。6月龄组小鼠胸腺组织皮质成分变薄,皮髓质内胸腺细胞间隙增大,皮/髓比显着降低;髓质内TECs数目较少。20月龄组小鼠胸腺组织较6周龄、6月龄组明显萎缩、面积显着减少,周围可见结缔组织包绕、替代,皮髓质界限不清;胸腺细胞、TECs数量均较少,胸腺细胞深染、不规则,成纤维细胞数目增加。免疫组化:随着年龄增加,小鼠胸腺皮、髓质中CD3阳性T淋巴细胞、Ep CAM阳性TECs数目显着减少。20月龄组皮质TECs较6周龄与6月龄组显着减少,20月龄与6月龄组髓质TECs较6周龄组显着减少;20月龄与6月龄组皮质淋巴细胞较6周龄组显着减少,20月龄组髓质淋巴细胞较6周龄与6月龄组显着减少;20月龄与6月龄组巨噬细胞较6周龄组显着增加。超微结构:小鼠胸腺随年龄增长,细胞数目减少、结构疏松,淋巴细胞核趋于不规则,核质比小;可见坏死胸腺的上皮细胞。20月龄组可见凋亡现象增加,上皮细胞线粒体呈空泡变。（2）脾脏HE染色:6周龄组小鼠脾脏红、白髓、边缘区结构清晰,脾脏小体结构规则,淋巴滤泡深染,淋巴细胞致密。6月龄组小鼠脾脏红、白髓界限模糊,边缘区较6周龄组显着增宽,生发中心面积增大,淋巴细胞较6周龄组稍疏松。20月龄组小鼠皮髓质界限模糊,脾脏小体结构不规则,白髓萎缩、面积减少,红髓面积相应增大,红/白髓比显着升高;边缘区较6月龄组与6周龄组显着增宽,生发中心面积增大,实质内成纤维细胞、纤维结缔组织增生。免疫组化:随着年龄增加,小鼠脾脏白髓内淋巴细胞数目显着下降,白髓边缘区与生发中心内B淋巴细胞数目增加,边缘区巨噬细胞数目增龄性显着增加。超微结构:6周龄小鼠脾脏内淋巴细胞较致密,核规则呈圆形,核质比大,异染色质较多,胞浆线粒体、内质网、有力的核糖体较丰富;局部散在中性粒细胞、浆细胞、巨噬细胞等。6月龄小鼠脾脏内淋巴细胞部分核稍不规则,异染色质边聚,部分胞浆内可见线粒体空泡变;凋亡细胞增加。20月龄小鼠脾脏内淋巴细胞疏松,数目明显减少,核不规则,异染色质边聚,呈块状,凋亡细胞明显增加。3.ELISA检测细胞因子结果显示,小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TNF-α和IL-6等有增龄性升高趋势,20月龄组中IL-10、TNF-α和IL-6水平高于6周龄组、6月龄组,20月龄、6月龄组中IFN-γ水平高于6周龄组,均无显着性统计学差异。4.胸腺转录组和蛋白组学结果分析RNA-Seq方法筛选出524个胸腺增龄相关差异表达基因,主要参与信号转导过程（PI3K-Akt信号通路、Rap1信号通路、Ras信号通路）、信号分子和相互作用过程（ECM-受体相互作用）、免疫系统（B细胞受体信号通路、补体和凝血级联、趋化因子信号通路）等信号通路;TMT技术确定113个胸腺增龄相关差异表达蛋白,主要参与能量代谢过程如柠檬酸盐循环（TCA循环）、细胞生长与死亡过程（细胞周期、凋亡过程）、遗传信息处理过程（剪接体）、内分泌系统（脂肪细胞因子信号通路）、免疫系统等通路。通过蛋白网络互作分析,筛选出与胸腺增龄相关的Fgf2、Flt1、BMP4、v WF、Lamc1、CD19、Cxcr5等重要差异基因以及CKS1、SRSF2、CASP-3、FGF2、CPT1B、PTMA、NASP等重要差异蛋白。5.脾脏转录组和蛋白组学结果分析基于RNA-Seq方法筛选出28个脾脏增龄相关差异表达基因,主要参与炎症反应、免疫相关通路,包括趋化因子信号转导途径,MAPK信号通路、Rap1信号通路等信号通路。TMT技术确定133个组织脾脏增龄相关差异表达蛋白,参与细胞生长与死亡过程（细胞周期）、遗传信息处理过程（翻译、核糖体）、细胞运动性过程（肌动蛋白细胞骨架调节）、免疫系统等通路。通过蛋白网络互作分析,筛选出与脾脏增龄相关的、vsig4、cfh、c7、cx3cl1、penk、ccl8、prkcz等重要差异基因以及CCNA2、ATOX1、CCR6、CXCL5、EIF3L、GZMA、RABL3、SLAMF1、RSL24D1等重要差异蛋白。结论随着年龄增长,小鼠免疫器官胸腺和脾脏在组织结构和免疫细胞分布上发生了变化,主要表现为微环境破坏、T淋巴细胞减少。衰老个体中炎症因子水平高于幼年组。不同年龄段小鼠胸腺和脾脏组织在基因和蛋白水平上表达存在明显差异性。增龄过程中,胸腺在基因水平上的变化表现为胸腺微环境受影响,脂肪生成活动增强,胸腺上皮细胞分化、生成以及胸腺细胞迁移、增殖或分化受影响,促炎作用增强等;在蛋白水平上表现为能量代谢增加,细胞生长、遗传物质传递相关过程受损,细胞凋亡活动增强、凋亡抑制作用减弱,脂质代谢增强,胸腺微环境受影响、促炎细胞因子分泌增加等。增龄过程中,脾脏在基因水平上的变化表现为T细胞增殖的抑制活动增强,促进细胞死亡活动增加,细胞凋亡的信号转导途径激活,促炎活动增强等。在蛋白水平上表现为细胞周期、蛋白质合成受损,细胞增殖活性减退、迁移过程受影响,抗氧化作用增强,T、B细胞激活作用增强、促炎反应增强等。衰老对胸腺和脾脏的影响主要包括影响其组织正常结构及其正常的生长、发育过程,此外促炎反应的增强可能与免疫衰老的炎症状态相关。本研究结果为阐明胸腺、脾脏增龄性分子变化以及探讨其在免疫衰老中可能存在的作用提供理论依据。
杨蒙蒙[9]（2021）在《间充质干细胞条件培养基通过SIRT1改善非酒精性脂肪肝的作用研究》文中认为研究背景糖尿病是一种目前公认的慢性代谢紊乱综合征,并被归类为以慢性高血糖为特征的一种疾病。无论在发达国家还是发展中国家,糖尿病都是世界上最大的流行病之一。目前全世界患病人口约4.63亿,国际糖尿病联合会（IDF）的最新估算到2040年,这一数字将上升为6.42亿,不断增加的患病率使糖尿病成为二十一世纪最严峻的公共卫生挑战之一。90%以上的糖尿病患者分型属于2型糖尿病（T2DM）,T2DM是造成糖尿病全球大流行的主要原因。肝脏在葡萄糖代谢调控中具有重要功能,其主要作用是维持血糖的恒定。非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）被定义为由非酒精性原因导致肝脏脂肪过多的一种疾病,NAFLD由良性非酒精性脂肪肝（NAFL）和较严重的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）组成。肥胖,胰岛素抵抗和糖尿病均与肝实质中过多脂质的积累密切相关。在过去的几十年中NAFLD的患病率急剧上升。研究表明,NAFLD与糖尿病风险之间有很强的关联,高达70%的糖尿病人群患有NAFLD。NASH基本上与超重和代谢综合征有关,22个国家的最新发现表明,NASH患者中存在肥胖（>80%）,血脂异常（72%）和2型糖尿病（44%）,提示NASH与代谢综合征密切相关。最近的研究结果广泛描述了线粒体功能和NAFLD的关系。研究显示,线粒体功能障碍（尤其是氧化呼吸链缺陷）在NAFLD疾病发生和进展中发挥重要作用。氧化应激是NAFLD发病机制的关键,它的主要特征是活性氧（ROS）产生。在NAFLD中,线粒体功能障碍是ROS的主要来源。线粒体功能障碍所致的氧化呼吸链受损以及脂质过氧化会进一步增加ROS的生成,ROS的产生反过来加重脂质过氧化,释放出对肝细胞和其他细胞具有多重有害作用的高反应性醛类物质（例如:丙二醛）,进一步形成恶性循环,并可能会破坏线粒体蛋白和线粒体DNA。由此提示,线粒体功能障碍会加重NAFLD的严重程度。因此,改善线粒体功能成为减轻NAFLD的潜在治疗方法。过去十年,间充质干细胞（MSCs）因为其免疫调控作用,旁分泌作用,去分化调节功能成为细胞移植最具有潜力的资源。广泛的研究表明,脐带间充质干细胞（Hu-MSCs）可以减轻大鼠肝脏纤维化程度,并改善肥胖2型糖尿病小鼠的NAFLD。突显了它们减轻肝脏细胞损伤的能力。然而,已知的MSCs有其自身的局限性,包括无法有效驻留在靶器官中、缺乏有效利用、体内存活率低以及输注的MSCs具有潜在的致瘤性,这可能会阻碍干细胞治疗的发展。但是,无细胞的间充质干细胞条件培养基（MSC-CM）中含有丰富的营养成分,例如:生长因子和其他细胞因子等,并且容易获得,使得MSC-CM应用成为了另外一种治疗选择。以MSC-CM为基础的相关研究显示,MSC-CM可改善糖尿病内皮功能障碍,减轻肾脏纤维化。然而,MSC-CM对糖尿病合并NAFLD的潜在保护作用和确切的作用机制仍不清楚。Sirtuin 1（SIRT1）是Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶家族的第一个成员,是一种NAD+依赖性酶,广泛参与基因调节,基因组稳定性维持,细胞凋亡,自噬,衰老,增殖,衰老和肿瘤发生等。SIRT1可以介导下游靶蛋白如过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂1α（PGC1α）的去乙酰化从而参与脂肪酸氧化、线粒体生物合成及功能。SIRT1的上调对啮齿动物的NAFLD、肥胖和胰岛素抵抗具有改善作用。相反,SIRT1下调或完全沉默会加剧脂肪肝和肝脏炎症。在肥胖和NAFLD患者的血浆和肝脏中发现SIRT1表达水平降低。研究目的本研究旨在探讨MSC-CM对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝产生的影响,以及相关机制的研究和探索,进一步阐明MSC-CM,NAFLD和SIRT1之间的关系。研究方法1.Hu-MSCs的分离与鉴定:从剖宫产术后的新鲜脐带提取Hu-MSCs,将第二代或第三代细胞密度达到70-80%的MSCs进行流式细胞术检测,观察CD105、CD73、CD34和HLA-DR表面标志物的表达情况;成脂诱导1-2周后,油红O染色镜下观察Hu-MSCs内脂滴形成;成骨诱导2-3周后,茜素红染色结果显示Hu-MSCs内有钙结节形成。2.从Hu-MSCs的上清液中制备MSC-CM。将Hu-MSCs接种到培养瓶中,当MSCs达到70-80%融合时,将培养基更换为无血清培养基并继续培养24小时。然后收集上清液,并使用离心超滤管对上清液进行超滤从而制备MSC-CM,用0.22μm的滤器过滤并储存在-80℃冰箱内以备使用。3.高脂饮食喂养联合STZ注射建立T2DM小鼠合并NAFLD模型。T2DM组小鼠随机分为2组,经尾静脉分别输注等量PBS或MSC-CM,正常饮食组小鼠输注PBS作为对照,每周检测小鼠体重和血糖变化。4.PBS和MSC-CM干预结束后进行IPGTT试验和IPITT试验,并检测小鼠的体脂成分含量变化。5.Western blot检测MSC-CM干预后2型糖尿病小鼠肝脏SIRT1和PGC1α表达水平,维持线粒体生物合成和功能相关因子（NRF1和TFAM）、炎症因子（TNF-α、IL-1β和 IL-6）和凋亡相关指标（BAX、Bcl-2、cleaved caspase3、caspase3、cleaved PARP、PARP）表达的情况。HE染色显示肝脏的脂肪变性和气球样变等组织结构变化,PAS染色检测糖原累积情况,油红O染色检测脂质沉积情况,TUNEL染色显示肝脏细胞的凋亡水平,试剂盒检测肝脏细胞的总抗氧化能力,ELISA方法检测血清中肝功能水平（ALT和AST）和血脂水平（TG 和 TC）。6.MSC-CM对PA诱导的L-O2细胞脂肪性肝炎的影响:利用0.4 mmol/LPA刺激L-O2细胞48 h,PA刺激的同时加入MSC-CM干预,Western blot检测细胞内SIRT1和PGC1α表达,维持线粒体生物合成和功能相关因子（NRF1和TFAM）、炎症因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）和凋亡相关指标（BAX、Bcl-2、cleaved caspase3、caspase3、cleaved PARP、PARP）的表达,试剂盒检测细胞内ROS含量,TUNEL染色检测L-O2细胞凋亡情况,试剂盒检测L-O2细胞的总抗氧化能力。7.MSC-CM作用机制探讨:验证SIRT1是否在MSC-CM对PA刺激后L-O2的保护效应中发挥关键作用。应用小干扰RNA（siRNA）对L-O2细胞的SIRT1进行敲低,然后给予0.4 mmol/L PA或PA与MSC-CM共同刺激48小时。Western blot检测细胞内SIRT1和PGC1α表达,维持线粒体生物合成和功能相关因子（NRF1和TFAM）、炎症因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）和凋亡相关指标（BAX、Bcl-2、cleaved caspase3、caspase3、cleaved PARP、PARP）的表达,试剂盒检测细胞内ROS含量,TUNEL染色检测L-O2细胞凋亡情况,试剂盒检测L-O2细胞的总抗氧化能力。研究结果1.分离得到的Hu-MSCs镜下观察形状呈长梭形旋涡状排列,Hu-MSCs表面标志物CD105和CD73表达量>95%,表面标志物CD34和HLA-DR表达量<1%,符合脐带间充质干细胞的表面标志物特点。经过定向分化诱导后,细胞可分化为成骨细胞和脂肪细胞。2.高脂饮食与STZ注射相结合构建T2DM合并NAFLD小鼠模型。研究结果表示与T2DM组相比,MSC-CM干预后小鼠体重相对减轻,体脂含量降低。IPGTT和IPITT实验提示MSC-CM干预后显着改善T2DM小鼠受损的葡萄糖耐量和胰岛素敏感性。3.Western blot结果显示MSC-CM治疗以后小鼠肝脏的SIRT1、PGC1α、NRF1、TFAM蛋白水平较T2DM组有所升高,炎症因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）蛋白水平也较降低,肝脏细胞凋亡指标（BAX/Bcl-2,c-cas3/cas3,c-PARP/PARP）有所下降。TUNEL染色还显示MSC-CM改善T2DM小鼠肝脏细胞凋亡,MSC-CM同时提高了肝脏的总抗氧化能力。HE染色显示MSC-CM治疗改善T2DM小鼠紊乱的肝脏结构,肝脏脂肪变性的区域减少。糖原染色显示MSC-CM增加了糖原的累积。油红O染色显示,MSC-CM能减少脂质的沉积。ELISA检测结果显示T2DM小鼠血清肝功能受损指标（ALT和AST）以及血脂水平（TC和TG）显着升高,而MSC-CM干预后小鼠肝功能和血脂水平得到改善。4.体外利用棕榈酸（PA）刺激L-O2细胞诱导脂肪性肝炎模型,实验结果显示PA能降低L-O2细胞内SIRT1、PGC1α、NRF1、TFAM蛋白水平,增加炎症指标（TNF-α、IL-1β和 IL-6）和凋亡指标（BAX/Bcl-2,c-cas3/cas3,c-PARP/PARP）,TUNEL染色显示L-O2细胞凋亡显着增加,细胞的ROS产生增加及总抗氧化能力降低。给予 MSC-CM 干预后,L-O2 细胞 SIRT1、PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白水平有所升高,炎症指标（TNF-α、IL-1β和IL-6）和凋亡指标（BAX/Bcl-2,c-cas3/cas3,c-PARP/PARP）下降,TUNEL染色显示凋亡L-O2细胞显着减少,细胞的ROS产生降低,总抗氧化能力增强。5.转染SIRT1 siRNA后,沉默了 L-O2细胞的SIRT1表达,MSC-CM的积极治疗作用被部分或全部抵消。SIRT1被敲低后,MSC-CM不能升高PGC-1α、N RF1和TFAM的蛋白水平,炎症指标（TNF-α、IL-1β和IL-6）和凋亡指标（B AX/Bcl-2,c-cas3/cas3,c-PARP/PARP）有所升高,TUNEL 染色显示不能减少L-O2细胞凋亡,细胞的ROS产生增加和总抗氧化能力得不到改善。研究结论MSC-CM能改善T2DM小鼠的葡萄糖耐量和胰岛素敏感性,改善受损的肝功能和降低血脂水平。在体内和体外实验中,MSC-CM均能够改善非酒精性脂肪肝炎受损的线粒体功能,降低炎症因子和减少细胞凋亡,增加肝脏细胞的总抗氧化能力。MSC-CM发挥积极的治疗作用依赖SIRT1的表达,沉默SIRT1后,MSC-CM的治疗作用被部分或全部抵消。
陈璐[10]（2021）在《肝脏HRD1通过FGF21调控能量代谢对雌性小鼠生殖功能的影响机制研究》文中提出研究目的:不孕不育已成为目前社会面临的严峻考验之一,对于不孕不育的分子机制探究迫在眉睫。能量代谢会影响女性生殖功能,肝脏在能量代谢中处于重要地位。羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白基因1（HMG-CoA reductase degradation 1,HRD1）作为主要在肝脏表达的泛素连接酶,在能量代谢中发挥重要的调控作用,目前尚未见在生殖功能方面的报道。本研究旨在通过肝脏HRD1-FGF21信号通路建立能量代谢和雌性小鼠生殖功能的分子连接。基于实验室所有的肝脏特异性HRD1基因敲除小鼠模型,对小鼠的代谢情况和生殖功能进行探究,明确肝脏能量代谢的改变对生殖功能的影响,并在分子水平进一步探索其作用机制。这在一方面丰富了泛素连接酶HRD1的生物学功能,另一方面也有助于揭示不孕不育的分子机制,为未来对不孕不育的预防和治疗提供可靠的理论依据。研究方法:首先,观察肝脏特异性HRD1基因敲除型小鼠的生殖功能及能量代谢情况,并检测小鼠FGF21的水平。明确HRD1对雌性小鼠生殖功能的影响及对FGF21的影响。其次,验证调控FGF21的PERK-ATF4-CHOP和PPARα/CREBH信号通路,进一步检测HRD1和CREBH间的蛋白质相互作用。阐明HRD1调控FGF21的分子机制。最后,对小鼠进行能量补充后观察生殖功能变化。探究能量代谢对雌性小鼠生殖功能的影响。研究结果:1.肝脏HRD1对雌性小鼠生殖功能及能量代谢的影响研究HRD1 KO小鼠在6周龄后平均体重和身长落后（19.5±0.3 g vs 16.5±0.3 g,10.15±1.62 cm vs 8.13±0.79 cm）,雌性不能生育,出现性成熟延迟和动情间期延长,同时能量消耗显着上升。为进一步研究HRD1对能量代谢的影响,从小鼠6周龄开始喂食高脂饮食14周。发现KO小鼠的体重依然落后,同时保护肝脏免于脂肪变性。KO小鼠的能量消耗依然增加,体脂率下降约三分之一,并出现白色脂肪组织棕色化现象。检测FGF21的mRNA和循环水平发现其在KO小鼠中显着上升。说明肝脏中HRD1与FGF21密切相关,HRD1基因敲除后会引起小鼠发生与FGF21过表达相似的现象。2.肝脏HRD1调控FGF21的分子机制研究FGF21在转录水平上受PERK-ATF4-CHOP和CREBH/PPARα调控,首先对PERK-ATF4-CHOP通路相关的转录因子进行检测发现PERK的表达水平与HRD1无关,说明HDR1并非通过PERK-ATF4-CHOP通路调控FGF21的水平。对CREBH和PPARα进行验证,发现HRD1是与CREBH而非PPARα结合发挥作用。接下来我们在体外和体内实验证明HRD1通过调控CREBH的泛素化参与CREBH的蛋白降解。说明肝脏中HRD1通过HRD1-CREBH-FGF21信号通路调控FGF21的表达。3.能量代谢对雌性小鼠生殖功能的影响研究进行高脂饮食补充能量后,KO小鼠恢复生殖功能,同时血清LH和FSH水平、卵巢功能、卵巢细胞凋亡因子都能恢复。这说明雌性小鼠的生殖功能与能量代谢直接相关。研究结论:1.肝脏特异性HRD1基因缺失会导致雌性小鼠生殖功能障碍,体脂下降和体重减轻,能量消耗增加。2.肝脏特异性HRD1基因缺失会引起FGF21在蛋白和转录水平显着增加,小鼠发生FGF21过表达现象。3.通过蛋白水平和mRNA水平的检测验证HRD1并非通过PERK-ATF4-CHOP 通路和 PPARα调节 FGF21。4.蛋白质组学和免疫共沉淀分析表明HRD1与CREBH存在直接的相互作用,HRD1能调控CREBH的泛素化使其发生降解。HRD1通过HRD1-CREBH-FGF21信号通路调控FGF21的表达。5.补充能量后能纠正肝脏特异性HRD1基因缺失引起的生殖障碍,说明能量代谢是HRD1调控生殖功能的主要因素。
二、Calorie Restriction CanIncrease Thymocyte Apoptosis through Bcl-2 and Fas Pathway（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Calorie Restriction CanIncrease Thymocyte Apoptosis through Bcl-2 and Fas Pathway（论文提纲范文）
（4）血管抗衰方通过miR-146a/TRAF6/NF-κB改善血管衰老机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 文献综述 |
| 综述一 血管衰老研究进展 |
| 综述二 人参三七应用沿革及血管抗衰方配伍理论基础 |
| 前言 |
| 第一部分 利用生物信息学方法筛选衰老内皮细胞差异表达miRNA及血管抗衰方延缓血管衰老作用靶点预测研究 |
| 第一章 基于GEO数据库筛选衰老内皮细胞差异表达miRNA |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第二章 差异表达miRNA下游靶基因及作用通路预测和筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第三章 基于网络药理学预测血管抗衰方改善血管衰老作用靶点 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第二部分 血管抗衰方干预血管衰老临床试验及miR-146a/TRAF6/NF-κB调控关系初步验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第三部分 血管抗衰方调控miR-146a/TRAF6/NF-κB干预衰老内皮细胞作用机制研究 |
| 第一章 药物诱导衰老细胞模型构建及鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第二章 药物干预内皮细胞衰老机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 中医药科技查新报告书 |
（5）基于网络药理学研究当归补血汤延缓衰老的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用英文缩写词(Abbreviations) |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 衰老的研究进展 |
| 1.1.1 衰老的相关学说 |
| 1.1.2 抗衰老的研究进展 |
| 1.2 当归补血汤的抗衰老作用 |
| 1.3 网络药理学的发展 |
| 1.4 本课题的研究内容、目的和意义 |
| 第2章 通过网络药理学预测当归补血汤延缓衰老的作用机制 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 当归补血汤有效成分和靶点的筛选 |
| 2.2.2 衰老靶点的获取 |
| 2.2.3 蛋白相互作用网络(PPI)的构建 |
| 2.2.4 核心靶点分析 |
| 2.2.5 基因和通路的富集分析 |
| 2.2.6 化合物-靶点-作用通路网络的构建 |
| 2.2.7 成分-靶点分子对接 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 活性化合物的筛选 |
| 2.3.2 药物与疾病的交集靶点 |
| 2.3.3 PPI网络的构建与核心靶点的获取 |
| 2.3.4 基因功能与通路分析 |
| 2.3.5 化合物-靶点-作用通路网络的构建 |
| 2.3.6 核心靶点的分子对接结果 |
| 2.4 讨论与结论 |
| 第3章 当归补血汤对衰老大鼠的肝肾功能及造血机能的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 药材和试剂 |
| 3.1.3 仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 当归补血汤的制备 |
| 3.2.2 大鼠衰老模型的建立及取材 |
| 3.2.3 当归补血汤对衰老大鼠外观、体重及脏器系数的影响 |
| 3.2.4 肝肾组织匀浆制备 |
| 3.2.5 BCA法检测匀浆中蛋白含量 |
| 3.2.6 当归补血汤对衰老大鼠抗氧化相关指标的影响 |
| 3.2.7 当归补血汤对肝肾功能的影响 |
| 3.2.8 当归补血汤对衰老大鼠造血机能的影响 |
| 3.2.9 统计学分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 大鼠一般状态及外观变化观察 |
| 3.3.2 当归补血汤对衰老大鼠体重的影响 |
| 3.3.3 当归补血汤对衰老大鼠脏器系数的影响 |
| 3.3.4 当归补血汤对衰老大鼠的抗氧化保护作用 |
| 3.3.5 当归补血汤对肝肾功能的影响 |
| 3.3.6 当归补血汤对衰老大鼠外周血和骨髓造血机能的影响 |
| 3.4 讨论与结论 |
| 第4章 当归补血汤延缓衰老的作用机制验证 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 试剂 |
| 4.1.2 仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 当归补血汤对衰老大鼠免疫功能的作用 |
| 4.2.2 Western blot方法检测通路中各蛋白的表达 |
| 4.2.3 统计学分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 当归补血汤对炎症相关蛋白表达的影响 |
| 4.3.2 归芪多糖对衰老大鼠T淋巴细胞相关凋亡蛋白因子的影响 |
| 4.3.3 当归补血汤对衰老大鼠各蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论与结论 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 |
| 附录B 溶液的配制 |
（6）Irisin缓解代谢相关性脂肪肝的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1.引言 |
| 2.文献综述 |
| 2.1 代谢相关性脂肪肝病 |
| 2.1.1 代谢相关性脂肪肝现状 |
| 2.1.2 代谢相关性脂肪肝发病机制 |
| 2.1.3 代谢相关性脂肪肝治疗 |
| 2.2 Irisin |
| 2.2.1 Irisin合成、分泌及受体 |
| 2.2.2 Irisin生理作用 |
| 2.2.3 Irisin与运动 |
| 2.2.4 Irisin与炎症 |
| 2.2.5 Irisin与代谢 |
| 2.3 本课题研究目的、内容及意义 |
| 3.材料与方法 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要试剂及耗材 |
| 3.1.2 主要一抗 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 |
| 3.1.4 主要溶液配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 实验动物分组、干预及处理 |
| 3.2.2 口服葡萄糖耐量实验 |
| 3.2.3 血清和组织的生化分析 |
| 3.2.4 组织病理学检查 |
| 3.2.5 Western Blot实验 |
| 3.3 统计分析 |
| 4.运动诱导irisin缓解肝脏脂肪变性实验结果 |
| 4.1 运动上调db/db小鼠肝脏irisin的表达 |
| 4.2 运动降低db/db小鼠体重增长速度 |
| 4.3 运动降低db/db小鼠空腹血糖变化幅度 |
| 4.4 运动减轻db/db小鼠肝脏脂肪变性 |
| 4.5 运动抑制db/db小鼠肝脏脂滴的沉积 |
| 4.6 运动降低db/db小鼠肝脏TG、TC的含量 |
| 4.7 运动减轻db/db小鼠肝脏损伤 |
| 4.8 运动增强db/db小鼠肝脏AMPK/PGC-1α信号通路相关蛋白的表达 |
| 5.外源性irisin改善肝脏脂肪变性实验结果 |
| 5.1 外源性irisin在脂肪肝大鼠中的有效表达 |
| 5.2 Irisin降低脂肪肝大鼠体重增长速度 |
| 5.3 Irisin改善脂肪肝大鼠空腹血糖和糖耐量 |
| 5.4 Irisin改善脂肪肝大鼠肝脏大体形态 |
| 5.5 Irisin减轻脂肪肝大鼠肝脏脂肪变性 |
| 5.6 Irisin减少脂肪肝大鼠肝脏脂滴沉积 |
| 5.7 Irisin降低脂肪肝大鼠血清和肝脏TG、TC的含量 |
| 5.8 Irisin改善脂肪肝大鼠肝脏功能 |
| 6.外源性irisin改善肝脏脂肪变性机制相关结果 |
| 6.1 Irisin减轻脂肪肝大鼠肝脏氧化应激 |
| 6.2 Irisin减少脂肪肝大鼠肝脏脂质生成,增加脂质分解 |
| 6.3 Irisin增加脂肪肝大鼠肝脏脂质氧化 |
| 6.4 Irisin上调脂肪肝大鼠肝脏SIRT1/AMPK信号通路 |
| 6.5 Irisin增加脂肪肝大鼠肝脏细胞自噬 |
| 6.6 Irisin抑制脂肪肝大鼠肝细胞凋亡 |
| 6.7 Irisin上调脂肪肝大鼠肝组织PI3K/Akt信号通路 |
| 6.8 Irisin抑制NF-κB通路减轻脂肪肝大鼠肝内炎症反应 |
| 7.讨论 |
| 7.1 运动诱导irisin改善肝脏脂肪变性 |
| 7.2 外源性 irisin改善肝脏脂肪变性 |
| 7.3 Irisin缓解脂肪肝大鼠肝脏氧化应激 |
| 7.4 Irisin抑制脂肪肝大鼠肝脏脂质生成,促进脂质分解 |
| 7.5 Irisin促进脂肪肝大鼠肝脏脂质氧化 |
| 7.6 Irisin激活脂肪肝大鼠肝脏SIRT1/AMPK信号通路 |
| 7.7 Irisin激活脂肪肝大鼠肝脏细胞自噬 |
| 7.8 Irisin抑制脂肪肝大鼠肝细胞凋亡 |
| 7.9 Irisin激活脂肪肝大鼠肝脏PI3K/Akt信号通路 |
| 7.10 Irisin改善脂肪肝大鼠肝内炎症 |
| 7.11 小结 |
| 8.结论 |
| 8.1 主要结论 |
| 8.2 创新点 |
| 8.3 缺陷与不足 |
| 8.4 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）早期妊娠对绵羊淋巴结补体信号通路和NF-κB信号通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 绵羊早期妊娠 |
| 1.2 淋巴结及其功能 |
| 1.3 补体信号通路的研究进展 |
| 1.3.1 补体信号通路的调节作用 |
| 1.3.2 补体信号通路的激活剂 |
| 1.3.3 补体信号通路的生物学效应 |
| 1.3.4 补体与炎症性疾病的关系 |
| 1.3.5 补体系统在适应性免疫中的作用 |
| 1.3.6 补体与精子的相互作用 |
| 1.3.7 补体在胎儿及胎儿外组织中的表达 |
| 1.4 NF-κB(nucler factor kappa B, NF-κB)信号通路研究进展 |
| 1.4.1 NF-κB对内稳态和淋巴结构的影响 |
| 1.4.2 NF-κB在T细胞的活化和稳态中的调节作用 |
| 1.4.3 NF-κB与转录活性调控 |
| 1.4.4 NF-κB与先天性免疫 |
| 1.4.5 NF-κB与适应性免疫 |
| 1.4.6 NF-κB与胚胎植入 |
| 1.4.7 NF-κB与妊娠维持 |
| 1.4.8 NF-κB与胎儿分娩 |
| 1.5 研究目的及意义 |
| 1.6 技术路线图 |
| 第2章 早期妊娠对绵羊淋巴结补体信号通路的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 RNA提取及RT-q PCR检测 |
| 2.1.3 Western blot分析 |
| 2.1.4 免疫组织化学分析 |
| 2.2 数据分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 淋巴结中C1q, C1r, C1s, C2, C3, C4a, C5b和C9的mRNA的相对表达水平 |
| 2.3.2 C1q, C1r, C1s, C2, C3, C4a, C5b和C9蛋白在淋巴结中的表达 |
| 2.3.3 淋巴结内C3蛋白的免疫组织化学定位 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 早期妊娠对绵羊淋巴结NF-κB信号通路的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 RNA提取及RT-q PCR检测 |
| 3.1.3 Western blot分析 |
| 3.1.4 免疫组织化学分析 |
| 3.2 数据分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 淋巴结中p65, p50, p52, Rel B和c-Rel的m RNA的相对表达水平 |
| 3.3.2 p65, p50, p52, Rel B和c-Rel蛋白在淋巴结中的表达 |
| 3.3.3 淋巴结内p65蛋白的免疫组织化学定位 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 附录 |
（8）小鼠胸腺和脾脏增龄性变化的转录组和蛋白组学研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 不同年龄组小鼠免疫器官组织学变化研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器及器材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 样本采集 |
| 1.2.2 石蜡切片制备与HE染色 |
| 1.2.3 免疫组化 |
| 1.2.4 电镜检测 |
| 1.2.5 ELISA检测 |
| 1.2.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 免疫器官重量及指数变化 |
| 2.2 免疫器官组织学变化 |
| 2.2.1 胸腺 |
| 2.2.1.1 HE染色 |
| 2.2.1.2 免疫组化 |
| 2.2.1.3 超微结构观察 |
| 2.2.2 脾脏 |
| 2.2.2.1 HE染色 |
| 2.2.2.2 免疫组化 |
| 2.2.2.3 超微结构观察 |
| 2.3 细胞因子检测 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 基于RNA-seq转录组和 TMT 蛋白组技术研究不同年龄组小鼠胸腺组织差异表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验样本 |
| 1.1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器及器材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 转录组测序 |
| 1.2.2 TMT蛋白质组学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 胸腺转录组分析 |
| 2.1.1 转录测序数据分析 |
| 2.1.2 基因表达分析 |
| 2.1.3 生物信息学分析 |
| 2.1.4 差异表达基因验证 |
| 2.2 胸腺蛋白质组分析 |
| 2.2.1 差异表达蛋白筛选 |
| 2.2.2 生物信息学分析 |
| 2.3 差异表达蛋白验证 |
| 2.4 转录组学与蛋白质组学关联性分析 |
| 3.讨论 |
| 第三部分 基于RNA-seq转录组和 TMT 蛋白组技术研究不同年龄组小鼠脾脏组织差异表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验样本 |
| 1.1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器及器材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 转录组测序 |
| 1.2.2 TMT蛋白质组学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同年龄组脾脏转录组分析 |
| 2.1.1 转录测序数据及质量 |
| 2.1.2 基因表达分析 |
| 2.1.3 生物信息学分析 |
| 2.1.4 差异表达基因验证 |
| 2.2 脾脏蛋白质组分析 |
| 2.2.1 差异表达蛋白筛选 |
| 2.2.2 物信息学分析 |
| 2.3 验证差异表达蛋白 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 文献综述 胸腺增龄性变化以及与疾病相关性的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间学术成果 |
| 附录 |
（9）间充质干细胞条件培养基通过SIRT1改善非酒精性脂肪肝的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位论文期间的学术成果 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（10）肝脏HRD1通过FGF21调控能量代谢对雌性小鼠生殖功能的影响机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 一、国内外研究述评 |
| 1. 女性生殖功能障碍的影响因素 |
| 2. 能量代谢与女性生殖功能 |
| 3. 肝脏泛素连接酶HRD1能够参与能量代谢 |
| 4. FGF21在生殖中的作用 |
| 二、研究目的与意义 |
| 1. 理论意义 |
| 2. 实践意义 |
| 三、研究要解决的问题 |
| 1. 肝脏HRD1基因敲除雌性小鼠的能量代谢和生殖功能有何变化? |
| 2. HRD1基因是通过何种机制调控FGF21水平? |
| 3. 给予小鼠补充能量后,小鼠生殖功能是否能够得到恢复? |
| 四、研究内容 |
| 1. 揭示HRD1对雌性小鼠能量代谢、生殖功能及FGF21水平的影响 |
| 2. 探索HRD1-CREBH-FGF21通路,阐明肝脏HRD1调控FGF21的分子机制 |
| 3. 阐述能量代谢对雌性小鼠生殖功能的影响 |
| 五、研究方法 |
| 1. 肝脏HRD1对雌性小鼠能量代谢和生殖功能的影响研究 |
| 2. 肝脏HRD1调控FGF21的分子机制研究 |
| 3. 能量代谢对雌性小鼠生殖功能的影响研究 |
| 六、研究思路 |
| 七、技术路线 |
| 1. 肝脏HRD1对雌性小鼠生殖功能的影响研究 |
| 2. 肝脏HRD1调控FGF21的分子机制研究 |
| 3. 能量代谢对雌性小鼠生殖功能的影响研究 |
| 八、本研究的创新性 |
| 九、论文结构 |
| 第一部分 肝脏HRD1通过调控FGF21影响小鼠的能量代谢和生殖功能 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 小鼠 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实时荧光定量 PCR (quantitative real time polymerase chain reaction,RT-qPCR)引物序列 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 小鼠基因型鉴定 |
| 2.2 小鼠分组及记录 |
| 2.3 小鼠呼吸代谢监测 |
| 2.4 小鼠月经周期检测 |
| 2.5 解剖小鼠取材 |
| 2.6 组织学检测 |
| 2.7 小鼠血清酶联免疫吸附实验(ELISA) |
| 2.8 组织RNA提取 |
| 2.9 实时荧光定量PCR |
| 2.10 统计学分析 |
| 三、研究结果 |
| 1. 肝脏特异性HRD1基因敲除小鼠的一般情况 |
| 2. 肝脏特异性HRD1基因敲除抑制小鼠的生殖功能 |
| 3. 肝脏特异性HRD1基因敲除小鼠能量消耗增加 |
| 4. 肝脏特异性HRD1缺失对高脂饮食诱导的小鼠肥胖具有保护作用 |
| 5. 肝脏特异性HRD1基因敲除小鼠的能量代谢 |
| 6. 肝脏特异性HRD1基因缺失导致白色脂肪棕色化 |
| 7. 肝脏特异性HRD1基因敲除小鼠血清FGF21表达水平上调 |
| 四、讨论 |
| 第二部分 肝脏HRD1通过调控CREBH-FGF21信号通路影响小鼠的生殖功能 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 质粒和抗体 |
| 1.5 细胞系 |
| 1.6 菌株和载体 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 小鼠基因型鉴定 |
| 2.2 小鼠分组及取材 |
| 2.3 实时荧光定量PCR |
| 2.4 细胞的复苏、培养和传代及冻存 |
| 2.5 小鼠肝细胞原代培养 |
| 2.6 质粒构建、转化和提取 |
| 2.7 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.8 免疫共沉淀(CO-IP) |
| 2.9 染色质免疫共沉淀(ChIP) |
| 2.10 统计学分析 |
| 三、结果 |
| 1. HRD1并非通过PERK-ATF4-CHOP通路调控FGF21的水平 |
| 2. HRD1是通过CREBH调控FGF21的水平 |
| 3. HRD1通过与CREBH相互作用而降低其稳定性 |
| 4. 肝脏中的HRD1参与CREBH泛素化的调控 |
| 四、讨论 |
| 第三部分 肝脏HRD1通过调控能量平衡影响小鼠的生殖功能 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 小鼠 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实时荧光定量PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,RT-qPCR)引物序列 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 小鼠基因型鉴定 |
| 2.2 小鼠分组及解剖取材 |
| 2.3 小鼠月经周期检测 |
| 2.4 小鼠血清酶联免疫吸附实验(ELISA) |
| 2.5 组织RNA提取 |
| 2.6 实时荧光定量PCR |
| 2.7 统计学分析 |
| 三、研究结果 |
| 1. 能量补充能够恢复肝脏特异性HRD1基因敲除小鼠的生殖功能 |
| 2. 能量补充能够恢复肝脏特异性HRD1基因敲除小鼠的卵巢功能 |
| 四、讨论 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 成纤维细胞生长因子21在女性生殖功能中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
四、Calorie Restriction CanIncrease Thymocyte Apoptosis through Bcl-2 and Fas Pathway（论文参考文献）
- [1]Perthes病不同种属动物模型的特点及应用[J]. 陈县祥,廖世杰,李波香,李崇,黄乾,林成森,刘云,陆荣斌,丁晓飞. 中国组织工程研究, 2022
- [2]小鼠骨骼肌OGT在高脂肥胖模型中作用及雷公藤红素调控机理研究[D]. 龚宝铭. 南京师范大学, 2021
- [3]靶向抑制GSK-3β促进衰老小鼠TECs增殖及T淋巴细胞再生的效应及机制研究[D]. 曾艳. 三峡大学, 2021
- [4]血管抗衰方通过miR-146a/TRAF6/NF-κB改善血管衰老机制研究[D]. 王靖怡. 中国中医科学院, 2021
- [5]基于网络药理学研究当归补血汤延缓衰老的作用机制[D]. 陈博. 兰州理工大学, 2021(01)
- [6]Irisin缓解代谢相关性脂肪肝的作用与机制研究[D]. 谭旺. 武汉体育学院, 2021(12)
- [7]早期妊娠对绵羊淋巴结补体信号通路和NF-κB信号通路的影响[D]. 曹立东. 河北工程大学, 2021(08)
- [8]小鼠胸腺和脾脏增龄性变化的转录组和蛋白组学研究[D]. 张丽. 重庆医科大学, 2021(01)
- [9]间充质干细胞条件培养基通过SIRT1改善非酒精性脂肪肝的作用研究[D]. 杨蒙蒙. 山东大学, 2021(12)
- [10]肝脏HRD1通过FGF21调控能量代谢对雌性小鼠生殖功能的影响机制研究[D]. 陈璐. 北京协和医学院, 2021