一、镍对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响（论文文献综述）
李瑞哲[1]（2021）在《低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制》文中进行了进一步梳理牦牛（Bos grunniens）是青藏高原及其毗邻地区的特色畜种,对当地农牧民的生产生活具有重要的意义,被誉为“高原之舟”。牦牛繁殖的季节性明显,繁殖效率较低,严重制约了产业发展。利用胚胎体外生产等现代繁殖生物技术,能够提升牦牛的繁殖潜力,是提高牦牛产业效率的途径之一。卵母细胞是现代繁殖生物技术的基础材料,卵母细胞质量影响着后续胚胎质量。在人、牛、山羊和小鼠等物种上的研究表明,体外成熟过程中氧分压影响卵母细胞的质量和发育能力,而在牦牛上相关研究还较少。为此,本研究在分析不同氧分压和抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力影响的基础上,分别从卵母细胞和卵丘细胞转录组层面探讨了低氧影响牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的机制。主要研究结果如下:1.不同氧分压对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响研究了5%和20%O2对牦牛卵母细胞体外成熟率,卵母细胞ROS水平和GSH含量,孤雌胚胎和体外受精（IVF）胚胎发育的影响。结果表明:5%O2提高了卵母细胞体外成熟率（P<0.05）和GSH含量（P<0.05）,降低了卵母细胞ROS水平（P<0.01）,提高了孤雌囊胚和IVF囊胚质量。2.不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响研究了卵母细胞成熟液中添加半胱胺、褪黑素、白藜芦醇和维生素C对牦牛卵母细胞体外成熟率,卵母细胞ROS水平、GSH含量和线粒体分布,以及IVF胚胎发育的影响。结果表明:（1）半胱胺提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）;（2）褪黑素提高了卵母细胞的成熟率（P<0.05）、GSH含量（P<0.05）、线粒体均质分布比例（P<0.05）和IVF胚胎卵裂率（P<0.05）,降低了卵母细胞ROS水平（P<0.05）;（3）白藜芦醇和维生素C均提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）和降低了卵母细胞ROS水平（P<0.05）。3.不同氧分压对牦牛卵母细胞转录组的影响对5%和20%O2成熟培养的牦牛MⅡ期卵母细胞,分别进行单细胞转录组测序。鉴定出120个差异表达基因,其中37个基因在5%O2组上调,主要参与缺氧反应、细胞周期/细胞分裂、染色质构象与重塑和细胞骨架,83个基因在5%O2组下调,主要参与能量代谢、蛋白合成、氧化还原平衡和卵丘细胞调控。GO分析表明:上调基因（5%O2 vs 20%O2,下同）富集于核质、以DNA为模板的正向转录调控、ERK1和ERK2级联反应等7个条目;下调基因（5%O2 vs 20%O2,下同）富集于线粒体、线粒体呼吸链复合体Ⅰ、胞浆大核糖体亚单位和外泌体等7个条目等。KEGG分析表明:上调基因富集于缺氧诱导因子-1信号转导、神经营养因子信号转导、粘附斑、微丝细胞骨架调控和PI3K-Akt信号转导等11个通路;下调基因富集于氧化磷酸化等4个通路。4.不同氧分压对牦牛卵丘细胞转录组的影响对5%和20%O2成熟培养的牦牛COCs,分别收集卵丘细胞,进行转录组测序。鉴定出270个差异表达基因,其中229个基因在5%O2组上调,主要参与缺氧反应、糖酵解、免疫/炎性反应和细胞凋亡,41个基因在5%O2组下调,主要参与抗凋亡和抗炎。GO分析表明:上调基因富集于缺氧反应、糖酵解过程、ATP代谢过程、炎症反应等26个条目;下调基因富集于蛋白同二聚化活性和受体结合2个条目。KEGG分析表明:上调基因富集于神经活性配体-受体互作、c AMP信号通路、糖酵解/糖异生等9个通路;下调基因没有得到富集。本研究分析了不同氧分压和抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及不同氧分压对牦牛卵母细胞和卵丘细胞转录组的影响,得出以下结论:与20%O2培养相比,5%O2培养时牦牛卵母细胞受到的氧化应激减少,卵丘细胞向卵母细胞提供能量代谢底物的能力增强,有利于牦牛卵母细胞的体外成熟和早期胚胎发育。研究结果为继续深入研究氧分压对牦牛卵母细胞成熟、发育能力及卵丘细胞-卵母细胞互作的影响及其作用机制提供了参考数据。
季珂萌[2]（2021）在《冻融对小鼠卵母细胞膜上受精介导蛋白Juno的影响》文中认为随着胚胎生物技术的发展,冷冻卵母细胞已成为雌性生育力保存的一种新兴替代选择,并已产生许多健康的婴儿。临床资料也表明成熟期卵母细胞的超低温保存是一种安全有效的方法。但也有学者发现,卵母细胞玻璃化冷冻对受精过程和受精卵阶段的胚胎动力学有影响,受精率低于新鲜卵母细胞。而Izumo1精子膜蛋白和相应卵母细胞上的受体Juno被认为是精子与卵母细胞相互作用和融合的必要因素。因此,本研究利用免疫荧光标记等实验技术观察研究抗Juno蛋白对冷冻前后各时期小鼠卵母细胞受精、发育以及对透明带的影响,观察冷冻前后Juno蛋白的分布变化及损伤后的修复,探讨玻璃化冷冻对卵母细胞上受精介导蛋白Juno的影响。结果发现:（1）在玻璃化冷冻和抗Juno蛋白对卵母细胞发育的影响中,冷冻组的各时期卵母细胞体外受精后的卵裂率与对照组相比显着降低（P<0.05）。经抗Juno蛋白处理未冷冻以及冷冻前后抗Juno蛋白处理的不同时期卵母细胞体外受精后卵裂率均显着低于对照组和冷冻组（P<0.05）。结果表明,玻璃化冷冻使卵母细胞IVF的卵裂率降低;抗Juno蛋白也可使受精过程受到影响,在玻璃化冷冻前后添加抗Juno蛋白均能有效地阻止受精过程。（2）在玻璃化冷冻和抗Juno蛋白对卵母细胞透明带消化时间的影响中,冷冻组的各时期卵母细胞消化透明带所用时间与对照组相比显着降低（P<0.05）。经抗Juno蛋白处理未冷冻组消化透明带所用时间与对照组相比无显着差异。冷冻前后抗Juno蛋白处理的卵母细胞消化透明带所用时间与冷冻组无显着差异,但显着低于对照组与抗Juno蛋白处理未冷冻组（P<0.05）。结果表明,透明带损伤主要是由玻璃化冷冻过程造成的,抗Juno蛋白处理对透明带影响不明显。（3）在玻璃化冷冻和抗Juno蛋白对卵母细胞结合精子数影响中,冷冻后各组卵母细胞结合精子数显着低于对照组（P<0.05）。经抗Juno蛋白处理未冷冻组结合精子数与对照组相比显着降低（P<0.05）。冷冻前后抗Juno蛋白组与冷冻组和抗Juno组差异不显着,显着低于对照组（P<0.05）。结果表明,玻璃化冷冻可能导致透明带硬化,使卵母细胞结合精子数降低;添加Juno蛋白单克隆抗体也使卵母细胞结合精子数显着降低。（4）体外成熟0、12、24、36小时和体内成熟的小鼠卵母细胞表面Juno蛋白荧光强度,冷冻组与各个时期的对照组表面荧光强度相比均显着降低（P<0.05）;经p H为9的Tris-EDTA抗原修复液热修复后,卵母细胞表面Juno蛋白荧光强度与冷冻组相比显着升高（P<0.05）,与对照组相比差异不显着。综上所述,Juno蛋白在体外受精中起着重要作用,冷冻前后抗Juno蛋白处理可使卵母细胞与精子结合数以及受精后卵裂率显着降低;玻璃化冷冻使卵母细胞表面的Juno蛋白受损,表达量减少,经修复后,Juno蛋白表达有所恢复。
刘洋[3]（2021）在《甲氨蝶呤经颗粒细胞途径致女性生殖功能持续性损伤机制及解救方案研究》文中进行了进一步梳理甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）为叶酸还原酶竞争性抑制剂,目前在临床上广泛应用于宫外孕、自身免疫性疾病、白血病等治疗,但其对人体的毒副作用并未得到全面认识,尤其是对女性生殖功能的影响。目前临床上关于“MTX既往用药是否会对女性生殖功能产生长期性的损伤,该损伤会持续多久”仍处于争论之中。虽然临床上包括辅助生殖受精失败在内的许多病例提示了MTX治疗与女性生殖细胞持续性损伤之间的相关性,但对MTX诱导女性生殖能力下降的实验模型及机制研究仍属空白,所以一直缺乏说服力,当然也就没有关于避免或降低MTX损伤方法的相关报道。而虽然叶酸（folic acid,FA）以及其盐溶液一直用于妊娠期的胚胎抗畸形治疗以及MTX中毒的急救,但是目前仍没有实验可以证明FA的早期持续口服是否能在降低女性生殖功能损伤之中取得收益。本项目从临床实践中发现的现象出发,旨在建立能有效模拟“MTX对女性生殖功能造成持续性损伤”这一临床现象的小鼠与细胞模型。并在该模型的基础上,从动物整体水平、细胞水平、分子水平逐步深入,对MTX导致雌性小鼠的生殖功能持续性损伤的机制进行探讨,并探究证明MTX停药后早期服用叶酸是否可以部分逆转损伤,最终为临床上降低或避免由于MTX的使用导致女性生殖功能持续性损伤提出了合理的用药建议,并为MTX的临床用药方案的改善提供一定参考。首先,参考常见的临床MTX用药方式,建立MTX既往用药导致生殖功能持续性损伤小鼠模型,分别观察该模型小鼠在自然受孕和体外受精中的受精成功率及胚胎发育状况,证明该模型可模拟出MTX对雌性小鼠生殖功能的持续性损伤,损伤主要表现为受精成功率下降、胚胎发育阻滞、胚胎异常发育。同时小鼠在当前模型的建立方案处理之下,没有显着的体重下降和交配能力的丧失,这表明模型可用于后续的机制研究。随后,在动物体内研究中,我们发现MTX既往用药可以引起卵巢颗粒细胞的凋亡、颗粒细胞对卵细胞生长发育相关激素分泌功能下降以及卵泡发育的阻滞,提示卵巢颗粒细胞损伤引发的卵泡发育障碍可能是小鼠生殖功能持续性损伤的重要原因。随后体外培养人的颗粒细胞,在体外验证了颗粒细胞的MTX损伤,发现MTX引起人颗粒细胞的周期阻滞、ROS系统激活、p16、p21和p53基因的激活,进而引发颗粒细胞衰老与凋亡。与此同时,参考MTX的作用机制,我们尝试通过MTX停药后早期口服叶酸逆转MTX持续性生殖毒性,并在动物模型以及体外细胞实验中验证停药后叶酸添加是否可以拮抗MTX对颗粒细胞以及小鼠生殖功能的损伤。结果显示,在动物实验中,MTX停药早期的叶酸补救可以显着降低体外受精和自然受孕中小鼠胚胎的发育阻滞以及死亡、畸形。相对应的,停药早期叶酸口服,可以明显降低小鼠卵巢中的颗粒细胞的凋亡,从而恢复颗粒细胞的分泌功能,并伴随着卵泡发育过程的正常化。而体外实验也显示,叶酸的早期补充,可以明显缓解颗粒细胞的衰老、凋亡以及ROS系统的激活。综上,本实验证明了MTX既往用药会引起卵巢颗粒细胞衰老、凋亡,而颗粒细胞对抗缪勒管激素（anti-Müllerian hormone,AMH）、雌二醇等激素分泌功能的下降,是导致卵泡发育阻滞,进而引起卵细胞发育和功能异常的重要原因,而卵细胞的发育、功能异常,是引起自然受孕以及体外受精中胚胎发育异常,即女性生殖功能持久性损伤的原因。基于以上实验结论,我们提出以下临床用药建议:1.在MTX停药后尽早补充叶酸以尽可能逆转生殖功能损伤;2.MTX用药中,密切AMH、抑制素等反应颗粒细胞功能的激素;3.MTX既往用药女性患者受孕前应同时检测颗粒细胞状态,及早做出生殖功能损伤预警。
胡慧茹[4]（2021）在《褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响》文中认为雌性哺乳动物随着年龄的增长,繁殖能力显着降低,主要表现在:体内激素分泌相对减少,卵巢功能逐渐衰退,卵母细胞的质量和数量也会随之降低,进而影响体外胚胎生产的效率。褪黑素作为有效的抗氧化、抗衰老物质,由松果体分泌,且存在于卵泡液中,能够保护卵母细胞在排卵时免于氧化应激的损伤。而褪黑素在高龄小鼠卵母细胞体外成熟及胚胎发育的作用鲜有报道,因此研究褪黑素在高龄小鼠卵母细胞体外胚胎生产中的作用机制是非常有意义的。本研究以10～12月龄的ICR雌鼠注射PMSG44 h（超数排卵）后获得的卵母细胞为研究对象,在体外成熟培养基中添加褪黑素（使其终浓度达到0,10-4,10-6,10-8 mol/L）,采用体外成熟、体外受精、体外早期胚胎发育技术,探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,在体外成熟培养16～18 h后,与对照组相比,10-6 mol/L的褪黑素能够显着提高卵母细胞的第一极体排出率（P<0.05）;体外受精后发现10-4 mol/L、10-6mol/L和10-8 mol/L的褪黑素均能显着提高卵母细胞的卵裂率（P<0.01）;继续进行体外早期胚胎发育培养发现10-6 mol/L（P<0.01）和10-8mol/L（P<0.05）组能够有效改善高龄小鼠卵母细胞的囊胚率,通过综合比较得出10-6 mol/L是最佳的处理浓度。接下来以10-6 mol/L褪黑素处理组与对照组卵母细胞进行后续试验:通过活性氧水平、谷胱甘肽水平、线粒体分布、ATP含量、早期细胞凋亡、免疫荧光和实时荧光定量PCR试验发现,10-6mol/L的褪黑素能够有效清除卵母细胞内的活性氧,提高GSH水平,降低细胞的氧化应激和早期凋亡率,同时还可以通过改善线粒体分布,维持细胞正常的能量供应（ATP）,保证纺锤体的正常形态,使其减数分裂精准完成。本研究还证实了,褪黑素可以通过增加高龄小鼠卵母细胞内抗氧化、抗衰老基因（GPX4、SOD1、SOD2、SIRT1、SIRT3）的表达水平,改善卵母细胞质量,促进卵母细胞成熟。综上所述,在体外成熟培养基中添加10-6mol/L的褪黑素可以降低高龄小鼠卵母细胞的氧化应激水平,改善线粒体功能,保证卵母细胞减数分裂的正常进行,进而改善体外受精后的受精率以及囊胚率,为人工辅助生殖技术和人类医学中高龄产妇生育能力的相关研究提供借鉴和参考。
吴丹丹[5]（2021）在《小鼠不同阶段卵泡同步分离方法的初步建立及评估》文中提出目的:卵巢皮质冷冻保存是极具发展潜力的生育力保存策略,能为年轻恶性疾病患者保存生育机会。但卵巢皮质冷冻复苏后再植存在重新引进恶性细胞的可能,因此需要寻求更安全的生育力保存的策略。由于基底膜隔绝血管,可以分离卵巢内的卵泡,经卵泡体外培养、卵母细胞体外成熟、体外受精等技术,获得可利用的卵母细胞、胚胎等,为患者保存生育力。因此,卵泡分离是至关重要的一步。既往卵泡分离方法尚未完善,本研究的目的是初步建立酶消化后多重滤网过滤法同步分离小鼠卵泡,并评估-其分离效率和卵泡质量。方法:运用混合有胶原酶Ⅰ和脱氧核糖核酸酶Ⅰ的消化酶来消化小鼠卵巢预切组织,然后依次通过不同孔径（100μm、40μm、20μm）的滤网以实现不同发育阶段卵泡同步分离的目的,将翻转冲洗100μm滤网得到卵泡记为A组,将翻转冲洗40μm滤网得到的卵泡记为B组,将翻转冲洗20μm滤网得到的卵泡记为C组。通过测量卵泡直径评估滤网同步分离卵泡的效能;评估卵泡基底膜的完整性和跨透明带突起结构来评价卵泡的形态和结构;测定卵泡ATP值及卵泡体外培养,评估分离卵泡的线粒体功能及发育潜能;通过体外成熟、受精等技术,将卵泡转为可利用的卵母细胞和胚胎,保存生育力。结果:酶消化后多重滤网过滤法能够获得大量质量良好的卵泡。按筛孔大小获得的卵泡群依次分为A组（>100μm）、B组（40μm-100μm）、C组（20μm-40μm）。一轮过滤后获得的卵泡是滤网直径选择范围内的占比依次增加,分别为54.36%（A组）、65.95%（B组）和66.67%（C组）,其中A组与C组、B组与C组相比差异具有统计学意义（p=0.0147,p=0.0090）,二轮过滤后,A组卵泡是滤网选择范围内的比例为92.91%。数量上,C组数目最多,A组次之,B组最少;形态上,C组卵泡基底膜完整率（83.66%）高于A组（59.72%,p<0.001）和B组（64.38%,p<0.001）;结构上,A组和B组卵泡的跨透明带突起结构丰富;活力上,A组卵泡的存活率70.59%高于B组51.79%和C组35.90%（p=0.0016,p<0.001）;发育潜能上,经过96小时体外培养,A组卵泡直径由（113.64±2.04）μm增长至（150.95±9.79）μm（p<0.01）,B组卵泡直径由（88.12±1.94）μm增长至（120.61±3.84）μm（p<0.001）。卵母细胞体外成熟培养后,成熟率为56.79%,MⅡ卵母细胞体外受精后二细胞形成率为44.90%。结论:酶消化后多重滤网过滤法能快速、有效、同步分离不同发育阶段小鼠卵泡。一轮过滤后,C组卵泡滤网筛选效能最高,二轮过滤获得的A组卵泡滤网筛选效能最高,二轮过滤能显着改善A组卵泡分离效率;分离得到的A组卵泡的活力、线粒体功能、发育潜能最优;C组卵泡基底膜完整率最高、卵泡活力最低;阶段特异性卵泡培养条件、卵母细胞的体外成熟仍需未来更多的探索。。
郑凌琦[6]（2021）在《卵巢储备功能下降中医证素分析及乌萸汤对小鼠线粒体能量代谢影响》文中指出近些年来,随着生殖医学的发展,对卵巢储备功能下降（Decreased ovarian reserve,DOR）的研究逐渐深入。DOR患者的卵母细胞数量减少、质量下降,明确影响了女性生殖功能。线粒体能量代谢决定卵细胞质量,AMPK是细胞内调节能量代谢的关键。本研究包括临床研究和实验研究两个部分。临床研究DOR患者的中医证候特点及证素辨证规律,为临床探讨该病的病因病机及治则治法提供依据。实验研究通过线粒体能量代谢、氧化应激和AMPK/PGC-1α通路,探讨补肾调肝法之乌萸汤改善DOR小鼠卵母细胞质量的作用机制。临床部分目的:初步研究DOR患者的中医证候特征及证素辨证规律,并为探讨该病的病因病机及治则治法提供依据。方法:本研究通过问卷调查及病例回顾,制定《DOR患者信息采集表》,对DOR患者患病情况、发病诱因、病程病史、症状体征、舌脉、实验室检查、辅助检查结果等信息进行采集,并据《DOR证候统计表》、《DOR证素统计表》和《DOR证素统计权值表》对患者进行证候、证素的统计判定及相关性分析。结果:1、有64.79%的患者存在情志因素,以压力大、工作紧张为主。不孕/不育、月经不调是患者就诊的主要诉求,分别占50.70%、35.21%。74.65%的患者病程大于1年以上,56.34%患者不孕,46.48%患者有流产/手术史。2、患者月经改变主要是月经夹块（43.66%）、月经量少（39.44%）、经色暗红（29.58%）、痛经（26.76%）、月经推迟（15.49%）、月经提前（11.27%）、月经量多（11.27%）、月经错乱（9.86%）、闭经（5.63%）。其他相关症状还包括睡眠不实（23.94%）、经常便溏（22.54%）、腰膝酸软（21.13%）、倦怠乏力（19.72%）、失眠（16.90%）、经前乳胀（16.90%）、经常便秘（14.08%）、小腹痛（14.08%）、腰痛（12.68%）、四末凉（11.27%）。舌象主要是舌暗红（74.65%）、舌淡（15.49%）、舌赤（15.49%）,苔薄白（70.42%）,脉象有脉细（98.59%）、脉滑（78.87%）、脉沉（12.68%）、脉弦（8.45%）等。3、DOR患者病位证素主要为胞宫（55.43%）、肝（17.39%）、肾（14.13%）,病性证素主要为血瘀（20.81%）、气滞（18.50%）、血虚（15.03%）、阴虚（15.03%）、阳虚（12.72%）、气虚（11.56%）。同类证素常常兼夹致病,病位证素兼夹占46.55%,主要有胞宫与肝同病（19.71%）、胞宫与肾同病（14.08%）;病性证素兼夹占66.18%,主要有血瘀兼气滞（35.21%）、血瘀兼阳虚（19.71%）、气滞兼阴虚（19.71%）、血虚兼气虚（18.31%）、气虚兼阳虚（18.31%）。4、患者证素与年龄、血清b-FSH、AMH、AFC之间无统计学相关性;病位在肾的证素分布积分有随年龄增加而增大的相关趋势,但无统计学差异。结论:1、情志因素是DOR的主要病因,不孕/不育、月经不调是患者就诊的主要诉求,该病主要影响了患者的生殖功能并引起月经改变;2、DOR病位主要在胞宫、肝、肾,出现了血瘀、气滞、血虚、阴虚、阳虚、气虚等病理变化,且同类证素常常兼夹致病;3、证素与年龄、血清b-FSH、AMH、AFC之间无统计学相关性。实验部分目的:对以补肾调肝法立法组方的乌萸汤含药血清进行活性成分分析;探讨线粒体能量代谢、氧化应激和AMPK/PGC-1α通路对DOR小鼠卵巢功能的影响,并据此分析乌萸汤的疗效机制;采用未成熟卵母细胞体外成熟培养（In vitro maturation,IVM）技术,探讨乌萸汤促进体外培养卵母细胞成熟的作用机制,进而证实乌萸汤改善小鼠卵巢储备功能、增加卵巢反应性,促进卵母细胞成熟、改善卵母细胞质量的作用。方法:1、采用飞行时间质谱对SD大鼠乌萸汤含药血清进行药物代谢后活性成分及药效物质分析;2、动物实验以DOR小鼠为研究对象,经乌萸汤干预后促排卵,检测小鼠动情周期、卵巢储备功能（血清AMH及卵巢组织形态）、卵巢反应性及生殖功能（卵母细胞形态、获卵率、卵母细胞成熟率及受精率）、能量代谢及细胞增殖能力（卵母细胞ATP、线粒体含量形态、ROS含量、α-tubulin及Ki67表达量）,通过RT-PCR及Western Blot法检测 AMPK/PGC-1α通路（AMPKα、PGC-1α、NRF1、NRF2）的 mRNA 和蛋白表达;3、细胞实验采用IVM技术,对DOR小鼠卵母细胞进行乌萸汤体外干预,检测卵母细胞第一极体排出率、线粒体能量代谢（ATP含量、线粒体含量、线粒体膜电位变化）、氧化应激水平（ROS含量、SOD酶活力）及AMPK/PGC-1α通路（AMPKα、p-AMPKα、PGC-1α、NRF1、NRF2）的蛋白表达。结果:1、乌萸汤含药血清飞行时间质谱分析显示,按质谱响应强度排序,前20种活性成分依次为:亚油酸、（2S）-2-氨基-3-苯基丙酸、亮氨酸、邻苯二甲酸双（6-甲基庚基）酯、柠檬酸、亚麻酸、十六酸乙酯、棕桐油酸、3,5-二叔丁基-4-羟基苯甲醛、L-蛋氨酸-35S、2-单棕榈酸甘油、苯甲酸、芥酸酰胺、香豆素、亚油酸乙酯、杜松醇、肉豆蔻酸、硬脂酰胺、十六碳酰胺、芳-姜黄烯。2、动物实验发现DOR小鼠较正常组小鼠动情周期延长、血清AMH降低（P<0.05）,促排后获卵数、卵母细胞成熟率和受精率均降低（P<0.05）,卵母细胞线粒体含量减少、ATP含量降低、ROS含量明显升高（P<0.05）,卵巢组织α-tubulin和Ki67阳性表达率降低（P<0.05）,且卵母细胞、线粒体形态欠佳,AMPK、PGC-1α、NRF1及NRF2的mRNA含量及蛋白含量均表达下降（P<0.05）。乌萸汤可以提高DOR小鼠卵母细胞成熟率,升高血清AMH、卵母细胞ATP、线粒体和ROS含量（P<0.05）,改善卵母细胞和线粒体形态,提高卵巢组织α-tubulin和Ki67阳性表达率（P<0.05）,提高AMPK、PGC-1α、NRF1 及 NRF2 的 mRNA 含量及蛋白含量（P<0.05）。3、细胞实验发现DOR小鼠卵母细胞第一极体排出率下降,线粒体数目减少、膜电位变化减弱（P<0.05）,产生的ATP减少、ROS增加、SOD酶活性降低（P<0.05）,AMPKα、p-AMPKα、PGC-1α、NRF1蛋白表达降低（P<0.05）;乌萸汤干预后的DOR小鼠卵母细胞第一极体排出率、线粒体数量、产生的ATP含量、SOD酶活性均有明显升高（P<0.05）,AMPKα、PGC-1α、NRF1蛋白表达量有所升高（P<0.05）,但卵母细胞线粒体膜电位、ROS含量没有得到改善（P>0.05）。结论:1、乌萸汤含药血清内有效活性成分中脂肪酸类物质质量占比最高,提示乌萸汤含药血清中活性成分主要用来提供能量来源,促进能量代谢。2、动物实验证实乌萸汤能改善DOR小鼠卵巢储备功能及卵巢反应性,提高卵母细胞质量、增强小鼠生殖能力。3、细胞实验证实乌萸汤能促进DOR小鼠卵母细胞的体外成熟、改善卵细胞质量。4、乌萸汤对DOR小鼠的治疗机制之一是通过改善线粒体能量代谢及氧化应激、调控AMPK/PGC-1 α通路实现的。
褚博[7]（2021）在《转口蹄疫VP1基因奶山羊体外胚胎生产及冷冻保存》文中提出胚胎体外生产和冷冻保存技术在家畜种质资源保存方面有重要应用价值。近年来,随着动物转基因技术研究的不断推进,各种转基因动物育种新材料不断出现,部分转基因动物已经进入安全性评价阶段,转基因动物新品种培育在家畜种业创新领域具有重要应用价值。目前,所有转基因动物育种材料均在封闭性条件下饲养管理,建立一套转基因动物种质材料保存和利用方法,对促进转基因育种研究有重要意义。口蹄疫病毒的抗原表位大部分集中在VP1上,作为主要的免疫原性蛋白激发Th、B细胞产生免疫应答。本实验室课题组前期制备了转口蹄疫VP1基因奶山羊,本研究通过对转基因奶山羊后代羊进行PCR鉴定,筛选出转基因阳性后代,并验证外源基因在转基因公羊精液中的整合情况。利用转基因公羊精液进行体外受精,获得转基因胚胎,同时采用Cryotop玻璃化冷冻技术,通过对早期囊胚冷冻、解冻复苏的效率和继续培养发育后囊胚扩张率来筛选出玻璃化冷冻保护剂组分并进行优化,并对冷冻复苏后的胚胎质量进行检测,对比其与正常胚胎的囊胚总细胞数、滋养层细胞数（TE）、内细胞团数（ICM）和细胞凋亡情况,确定了适合转基因山羊精液体外受精和胚胎冷冻保存条件,用于转基因山羊胚胎资源的保存和利用。获得如下结果:1.对14只转基因奶山羊后代进行颈静脉采血提取山羊血液基因组进行PCR鉴定,其中8只奶山羊确定为转口蹄疫VP1基因奶山羊（OFMDV-VP1）,4只母羊,4只公羊,同时提取4只公羊精液基因组进行鉴定,精液中也整合有外源基因。2.通过电刺激采精法采集转基因公羊精液,利用Percoll法处理精液进行体外受精,获得体外胚胎,并进行PCR鉴定,确定转基因胚胎,继续培养,用于后续试验进行冷冻保存和胚胎移植。3.确定了采用Cryotop法以40%EG+0.5mol/L L?proline作为冷冻保护剂,可用于转基因山羊胚胎的冷冻保存,冷冻解冻后复苏率89.9%,囊胚扩张率74.5%。对比正常胚胎与冷冻解冻复苏胚胎的囊胚细胞总数、TE、ICM和凋亡细胞数,均差异不显着（P>0.05）。用冷冻后复苏的胚胎进行胚胎移植,母羊妊娠率为50%,可用于临床应用,为转基因羊胚胎资源的冷冻保存及生产应用提供帮助。
曹兰蕊[8]（2021）在《MAPK信号通路及转录因子TCF12在小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的功能研究》文中认为哺乳动物卵泡生长过程中,卵母细胞转录翻译活跃,胞质中转录并积累大量的母源性m RNA和蛋白质,至卵母细胞生长完全,染色质凝集为染色体,卵母细胞转录沉默。卵母细胞减数分裂恢复、成熟及合子基因组激活前的胚胎发育都受胞质中的母源物质调控,但母源转录本的调节机制及功能研究一直存在很多空白。MPF和MAPK信号通路在调控减数分裂细胞周期进程中发挥重要作用,MPF由CDK1和cyclin B1两部分组成,MAPK信号通路由MOS、MEK1/2和ERK1/2三级激酶组成。MPF和MAPK信号通路的激活分别依赖母源Ccnb1（编码cyclin B1蛋白）和Mos转录本翻译激活。母源m RNA的胞质腺苷酸化通常由ERK1/2磷酸化降解CPEB1所介导,但MPF调控减数分裂恢复和MOS蛋白积累发生在MAPK信号通路激活前,且MPF和MAPK的活性互相影响,Ccnb1和Mos m RNA翻译激活的机制一直不清楚。另一方面,碱性螺旋环螺旋转录因子家族是真核生物中广泛分布的一类转录因子,参与生长发育等诸多生理过程。E protein是其中的一个重要分支,由其中TCF4、TCF3以及TCF12共同组成。纯合突变Tcf12会造成严重的产后致死。我们以小鼠为模式生物分别研究了MAPK信号通路对细胞周期相关转录本翻译激活的调控机制以及TCF12介导的母源转录本积累在雌性生殖中的功能。本研究发现Ccnb1含长3’-UTR转录本减数分裂恢复后的翻译激活依赖ERK1/2活性。在减数分裂恢复前已经有少量ERK1/2激活,提前激活GV期卵母细胞的MAPK信号通路能促进Ccnb1的翻译和减数分裂成熟。抑制或激活CDK1活性同样影响Ccnb1翻译,说明二者均参与调控Ccnb1long 3’-UTR转录本的翻译激活。CDK1促进CPEB1发生磷酸化,但CPEB1降解只受ERK1/2调控。另外,Mos翻译同样受ERK1/2和胞质腺苷酸化元件调控。即卵成熟过程中,激活的ERK1/2协同CDK1以正反馈的方式调控母源m RNA翻译激活,推动细胞周期进程。另外,我们利用在原始卵泡的卵母细胞中特异性表达的Gdf9-Cre,我们研究了转录因子Tcf12介导的母源转录积累对雌性生殖的作用。研究发现,TCF12是一种特异性在生长阶段卵母细胞细胞核中表达丰富的转录因子。TCF12通过功能结构域识别结合靶基因,调控靶基因转录活性。母源性敲除Tcf12的雌鼠几乎不育。Tcf12虽然不参与调控减数分裂细胞周期过程,对受精及植入前胚胎发育必需。一方面,Tcf12通过调控生长阶段Astl的表达影响皮质颗粒的定位,保障受精作用正常发生。另一方面,Tcf12可能通过调控Arpp19表达稳定蛋白磷酸酶活性。Tcf12敲除造成有丝分裂过程中对PP2A活性的抑制作用不足,受精卵的有丝分裂细胞周期延长。母源敲除Tcf12的二细胞存在过度的组蛋白H3K27三甲基化修饰,合子基因组不能正常激活,发育过程中敲除胚胎会逐渐失去发育潜能。这些结果阐明了Tcf12介导的母源效应对早期胚胎发育的影响。本研究不仅揭示了卵成熟过程中激酶对细胞周期相关母源转录本的翻译激活作用,还证明了转录因子介导的母源积累对生育力维持的重要作用,系统地研究了卵母细胞生长成熟及早期胚胎中的转录组调节以及这些调节方式对雌性生殖的重要作用,为临床上不孕不育问题及辅助生殖技术进步提供新的理论依据。
张景锋,郝京京,徐秋良,朱宽佑,牛晖,张长兴[9]（2021）在《多种因素对小鼠卵母细胞体外受精效果影响的分析》文中研究表明为了探讨不同精子获能时间,精卵孵育时间,精子密度以及颗粒细胞对小鼠卵母细胞体外受精的影响,从而达到对卵母细胞体外受精体系优化的目的。比较了精子获能时间分别为40 min、60 min、80 min试验组的受精卵卵裂率。结果表明,带颗粒细胞卵母细胞（COCs）在三个试验组中卵裂率无显着差异,不带颗粒细胞卵母细胞（NO）在精子获能时间为60 min时卵裂率最高;比较了精卵孵育时间分别为2 h、4 h、6 h、8 h试验组的受精卵卵裂率,结果显示COCs精卵孵育时间2 h试验组的效果最好,NO孵育时间为6 h试验组的效果最好;比较了精子密度分别为3×105/mL,3×106/mL,3×107/mL试验组受精卵卵裂率,结果显示COCs和NO均为3×106/mL试验组卵裂效果最好;比较COCs和NO的受精卵卵裂率,结果显示COCs与NO之间存在显着差异（P<0.05）,裸卵卵裂效果显着优于颗粒细胞卵裂效果。试验结果表明,在卵母细胞体外受精过程中,精子获能时间60 min,精子密度为3×106/mL,精卵孵育6 h,培养24 h后卵裂率最高。
曾毅仁[10]（2020）在《三（2-羧基乙基）膦盐酸盐处理对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育能力的影响研究》文中研究表明卵母细胞体外成熟（IVM）是决定体外胚胎发育的关键过程。体外高氧培养环境造成的氧化应激是影响卵母细胞体外成熟质量的重要因素。活性氧的增加会使脂质、蛋白质、DNA受到损伤,最终可能导致卵母细胞质量和后续胚胎发育能力降低。本实验探究了抗氧化剂三（2-羧基乙基）膦盐酸盐（TCEP-HCL）对猪卵母细胞体外成熟和受精胚胎体外发育能力的影响。我们在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加了三个浓度TCEP-HCL（50,100和200μM）进行处理。结果发现与未添加组相比,100μM TCEP-HCL处理显着增加了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）、受精卵分裂率（P<0.05）、囊胚形成率（P<0.05）、囊胚总细胞数（P<0.05）;200μM TCEP-HCL对卵母细胞的成熟以及后续胚胎的发育没有影响（P>0.05）。TCEP-HCL处理影响了卵母细胞的受精情况,和未处理组相比,100μM TCEP-HCL处理显着降低了猪卵母细胞的多精入卵率（P<0.05）,并显着提高了单精入卵率（P<0.05）。为了探究TCEP-HCL对猪卵母细胞体外受精和胚胎发育能力改善的潜在机制,我们检测了MⅡ期卵母细胞和体外受精囊胚中的抗氧化和细胞凋亡相关指标。结果发现,TCEP-HCL处理显着降低了卵母细胞内活性氧（ROS）水平（P<0.05）,100μM TCEP-HCL处理提高了卵母细胞内氧化应激相关基因SOD2的表达。同时,和其他实验组相比,100μM TCEP-HCL处理显着增加了卵母细胞内谷胱甘肽（GSH）的含量（P<0.05）;显着提高了卵母细胞中线粒体的含量（P<0.05）;显着降低了IVM后卵母细胞凋亡率（P<0.05）,显着增加细胞凋亡抑制基因BCL2的表达（P<0.05）。TCEP-HCL处理降低了囊胚细胞凋亡,特别是在100μM和200μM TCEP-HCL处理组中表现最为明显（P<0.05）。以上研究结果表明,适宜的TCEP-HCL处理降低了猪卵母细胞体外成熟过程中的氧化应激水平,提高了体外受精胚胎的质量和发育能力。
二、镍对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、镍对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响（论文提纲范文）
（1）低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 哺乳动物卵母细胞成熟研究进展 |
| 1.1 卵母细胞的发育与成熟过程 |
| 1.2 卵母细胞与外界环境的物质、信息交流途径 |
| 1.3 卵母细胞成熟的分子调控机制 |
| 1.4 影响卵母细胞成熟和发育能力的因素 |
| 2 促进卵母细胞体外成熟和发育能力的措施 |
| 2.1 筛选发育能力较高的卵母细胞 |
| 2.2 增强卵丘细胞-卵母细胞互作 |
| 2.3 优化卵母细胞的培养环境与培养程序 |
| 3 氧分压和ROS对卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 4 牦牛卵母细胞体外成熟研究进展 |
| 5 本研究的目的与意义 |
| 第二章 不同氧分压对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试验试剂及其配制 |
| 1.3 试验耗材 |
| 1.4 试验仪器 |
| 1.5 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同氧分压对牦牛卵母细胞成熟率的影响 |
| 2.2 不同氧分压对牦牛卵母细胞ROS水平和GSH含量的影响 |
| 2.3 不同氧分压对牦牛孤雌胚胎发育的影响 |
| 2.4 不同氧分压对牦牛IVF胚胎发育的影响 |
| 2.5 不同氧分压对牦牛IVF囊胚基因表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞成熟率的影响 |
| 2.2 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞ROS水平的影响 |
| 2.3 不同抗氧化剂对卵母细胞GSH含量的影响 |
| 2.4 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞线粒体分布的影响 |
| 2.5 不同抗氧化剂对牦牛IVF胚胎发育的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 单细胞测序分析不同氧分压对牦牛卵母细胞转录组的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测序数据质量分析 |
| 2.2 比对分析 |
| 2.3 基因表达分析 |
| 2.4 差异表达基因GO分析 |
| 2.5 差异表达基因KEGG分析 |
| 2.6 差异表达基因验证 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 高通量测序分析不同氧分压对牦牛卵丘细胞转录组的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测序数据质量分析 |
| 2.2 比对分析 |
| 2.3 转录本组装与新转录本预测 |
| 2.4 基因表达分析 |
| 2.5 差异表达基因GO分析 |
| 2.6 差异表达基因KEGG分析 |
| 2.7 差异表达基因验证 |
| 2.8 不同氧分压对卵母细胞和卵丘细胞转录组影响的对比分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论、创新与不足 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足之处 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附表1 不同氧分压条件下牦牛卵母细胞DEGs(5% O_2 vs20% O_2) |
| 附表2 不同氧分压条件下牦牛卵丘细胞DEGs(5% O_2 vs20% O_2) |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（2）冻融对小鼠卵母细胞膜上受精介导蛋白Juno的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩写表 Abbreviations |
| 第一章 前言 |
| 1.1 体外受精的意义及研究进展 |
| 1.1.1 体外受精技术的发展 |
| 1.1.2 体外成熟技术的历史 |
| 1.1.3 体外受精液及胚胎培养液体 |
| 1.1.4 辅助生殖技术的安全性 |
| 1.2 Juno蛋白的研究进展 |
| 1.2.1 精卵结合过程中重要的受精介导蛋白 |
| 1.2.2 Juno蛋白介导受精的过程及机制 |
| 1.3 玻璃化冷冻对卵母细胞的影响 |
| 1.3.1 卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展 |
| 1.3.2 玻璃化冷冻造成卵母细胞损伤的原因 |
| 1.3.3 玻璃化冷冻与慢速冷冻的比较 |
| 1.3.4 玻璃化冷冻常用的载体 |
| 1.3.5 冷冻对不同发育阶段卵母细胞的影响 |
| 1.3.6 玻璃化冷冻在辅助生殖技术中的应用 |
| 1.4 本研究的意义 |
| 第二章 玻璃化冷冻对卵母细胞发育的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 实验设计 |
| 2.1.4 数据分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 玻璃化冷冻对体外成熟24 小时卵母细胞发育的影响 |
| 2.2.2 玻璃化冷冻对体外成熟36 小时卵母细胞发育的影响 |
| 2.2.3 玻璃化冷冻对体内成熟MⅡ卵母细胞发育的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 玻璃化冷冻对卵母细胞透明带的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.1.3 实验设计 |
| 3.1.4 数据分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 玻璃化冷冻对卵母细胞透明带消化时间的影响 |
| 3.2.2 玻璃化冷冻对卵母细胞结合精子个数的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 冻融对卵母细胞膜上Juno蛋白表达的影响及修复 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.1.3 实验设计 |
| 4.1.4 数据分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 玻璃化冷冻对不同成熟时间卵母细胞膜上Juno蛋白的影响 |
| 4.2.2 抗原修复处理对不同成熟时间卵母细胞膜上Juno蛋白的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
（3）甲氨蝶呤经颗粒细胞途径致女性生殖功能持续性损伤机制及解救方案研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词对照表 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 一、主要仪器和设备 |
| 二、主要试剂 |
| 三、细胞系、实验动物 |
| 实验方法 |
| 一、甲氨蝶呤持续性损伤生殖功能与叶酸解救的小鼠模型建立 |
| 二、甲氨蝶呤对小鼠体外受精的影响及叶酸解救 |
| 三、甲氨蝶呤致颗粒细胞损伤与卵泡发育阻滞及叶酸的解救 |
| 四、体外甲氨蝶呤损伤颗粒细胞及叶酸的解救效果研究 |
| 五、统计方法 |
| 实验结果 |
| 一、甲氨蝶呤持续性损伤生殖功能与叶酸解救的小鼠模型建立 |
| 二、甲氨蝶呤对小鼠体外受精的影响及叶酸的解救 |
| 三、甲氨蝶呤致颗粒细胞损伤与卵泡发育阻滞及叶酸的解救 |
| 四、利用体外体系研究甲氨蝶呤损伤颗粒细胞及叶酸的解救 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 化疗药物引起卵巢损伤的相关机制及预防方法 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（4）褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 衰老与生殖功能 |
| 1.2 影响卵母细胞衰老的因素 |
| 1.2.1 氧化应激与卵母细胞衰老 |
| 1.2.2 线粒体功能障碍与卵母细胞衰老 |
| 1.2.3 Sirtuins家族与卵母细胞衰老 |
| 1.2.4 卵丘细胞与卵母细胞衰老 |
| 1.3 褪黑素的研究进展 |
| 1.3.1 褪黑素简介 |
| 1.3.2 褪黑素的合成与代谢 |
| 1.3.3 褪黑素受体 |
| 1.3.4 褪黑素的抗氧化作用 |
| 1.3.5 褪黑素在动物生殖过程中的作用 |
| 1.3.6 本研究的目的与意义 |
| 第2章 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试验材料 |
| 2.2.1 试验动物的饲养 |
| 2.2.2 试验仪器 |
| 2.2.3 试验耗材 |
| 2.2.4 试验试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 主要试验试剂的配制 |
| 2.3.2 高龄小鼠卵母细胞的收集和体外成熟 |
| 2.3.3 高龄小鼠卵母细胞的体外受精和胚胎发育 |
| 2.3.4 数据统计与分析 |
| 2.4 试验结果 |
| 2.4.1 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.4.2 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.4.3 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞早期胚胎体外发育的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 褪黑素改善高龄小鼠卵母细胞体外成熟的作用机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试验材料 |
| 3.2.1 试验动物的饲养 |
| 3.2.2 试验仪器 |
| 3.2.3 试验试剂及耗材 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 主要试验试剂的配制 |
| 3.3.2 高龄小鼠卵母细胞的收集和体外成熟培养 |
| 3.3.3 活性氧(ROS)含量检测 |
| 3.3.4 总谷胱甘肽含量的检测 |
| 3.3.5 线粒体活性检测 |
| 3.3.6 ATP含量的检测 |
| 3.3.7 Annexin V-FITC凋亡检测 |
| 3.3.8 免疫荧光染色 |
| 3.3.9 数据统计与分析 |
| 3.4 试验结果 |
| 3.4.1 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞内ROS水平的影响 |
| 3.4.2 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞内总谷胱甘肽含量的影响 |
| 3.4.3 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞线粒体分布的影响 |
| 3.4.4 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞内ATP含量的影响 |
| 3.4.5 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞的早期凋亡的影响 |
| 3.4.6 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞纺锤体形态的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 褪黑素对高龄小鼠卵母细胞抗氧化和抗衰老相关基因的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 试验材料 |
| 4.2.1 试验动物的饲养 |
| 4.2.2 试验仪器 |
| 4.2.3 试验试剂及耗材 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 高龄小鼠卵母细胞的收集和体外培养 |
| 4.3.2 定量引物的设计 |
| 4.3.3 小鼠组织DNA的提取 |
| 4.3.4 引物验证 |
| 4.3.5 微量反转录 |
| 4.3.6 RT-qPCR检测 |
| 4.3.7 数据分析 |
| 4.4 试验结果 |
| 4.4.1 抗氧化和抗衰老基因的PCR扩增与检测 |
| 4.4.2 褪黑素对卵母细胞抗氧化和抗衰老相关基因的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）小鼠不同阶段卵泡同步分离方法的初步建立及评估（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 一、实验动物 |
| 二、试剂和仪器设备 |
| 1.主要试剂及配制 |
| 2.主要仪器设备 |
| 三、实验方法 |
| 1.卵巢获得 |
| 2.卵巢HE染色 |
| 3.卵巢组织酶解 |
| 4.滤网卵泡分离与富集 |
| 5.卵泡二轮过滤 |
| 6.收获卵泡的计数和直径测量 |
| 7.不同分组卵泡的活力评估 |
| 8.卵母细胞体外成熟、受精 |
| 四、数据分析 |
| 结果 |
| 一、卵巢HE切片 |
| 二、不同滤网获得的卵泡数目及卵泡直径 |
| 三、不同滤网获得卵泡的质量分析 |
| 1.卵泡形态与Trypan Blue染色卵泡存活率 |
| 2.卵泡基底膜完整性与卵泡活力的关系 |
| 3.跨透明带突起结构 |
| 4.卵泡线粒体功能 |
| 5.卵泡培养结果 |
| 6.卵母细胞体外成熟、受精结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录 A 英文全称及缩略词 |
| 附录 B 个人简历 |
| 附录 C 综述 卵泡分离与收集和体外培养的研究进展 |
| 参考文献 |
（6）卵巢储备功能下降中医证素分析及乌萸汤对小鼠线粒体能量代谢影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 研究进展 |
| 第一节 现代医学关于卵巢储备功能下降的研究进展 |
| 1 卵巢储备及卵巢储备功能 |
| 2 病因及致病机制 |
| 3 诊断标准 |
| 4 治疗方法 |
| 5 能量代谢与卵细胞质量 |
| 参考文献 |
| 第二节 中医学对卵巢储备功能下降的认识及研究进展 |
| 1 病因病机认识 |
| 2 证型分布 |
| 3 治法用方 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 卵巢储备功能下降中医证素研究 |
| 第一节 研究内容及方法 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究对象 |
| 3 研究方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 患者一般情况 |
| 2 就诊情况 |
| 3 辅助检查 |
| 4 证候分布情况 |
| 5 证素分布情况 |
| 6 证素及其相关影响因素 |
| 第三节 讨论 |
| 1 疾病特点 |
| 2 病因病机分析 |
| 3 中医治则治法 |
| 4 能量代谢与肝、肾、气血 |
| 第四节 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 实验研究 |
| 实验一 乌萸汤含药血清制备及活性成分分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 乌萸汤对DOR小鼠卵巢储备功能及能量代谢的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 乌萸汤对DOR小鼠卵母细胞体外培养的能量代谢相关影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 创新点与展望 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）转口蹄疫VP1基因奶山羊体外胚胎生产及冷冻保存（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 体外胚胎生产及胚胎玻璃化冷冻研究进展 |
| 1.1 体外胚胎生产研究进展 |
| 1.2 玻璃化冷冻研究进展 |
| 1.2.1 玻璃化冷冻的原理 |
| 1.2.2 胚胎冷冻的历史 |
| 1.2.3 玻璃化冷冻的方法 |
| 1.2.4 冷冻保护剂 |
| 1.2.5 胚胎冷冻的意义与展望 |
| 1.3 本论文研究的目的与意义 |
| 试验研究 |
| 第二章 转基因山羊的鉴定 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验试剂 |
| 2.1.3 试验仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 山羊血液基因组提取 |
| 2.2.2 山羊精液基因组提取 |
| 2.2.3 引物设计 |
| 2.2.4 PCR反应体系 |
| 2.2.5 PCR反应程序 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶回收测序鉴定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 转基因奶山羊血液基因组PCR鉴定 |
| 2.3.2 转基因奶山羊精液基因组PCR鉴定 |
| 2.3.3 测序结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 转基因羊体外胚胎生产及冷冻保存 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 试验动物、组织和细胞 |
| 3.1.2 试验试剂 |
| 3.1.3 试验仪器设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 山羊卵母细胞采集和体外成熟 |
| 3.2.2 山羊精液采集 |
| 3.2.3 山羊卵母细胞体外受精和体外培养 |
| 3.2.4 胚胎冷冻液筛选 |
| 3.2.5 胚胎冷冻液优化 |
| 3.2.6 囊胚质量评级 |
| 3.2.7 胚胎冷冻与解冻 |
| 3.2.8 冷冻解冻后囊胚免疫荧光染色 |
| 3.2.9 冷冻解冻后囊胚凋亡检测 |
| 3.2.10 体外胚胎鉴定 |
| 3.2.11 同期发情 |
| 3.2.12 胚胎移植 |
| 3.2.13 数据统计与分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 胚胎冷冻液筛选结果 |
| 3.3.2 胚胎冷冻液优化结果 |
| 3.3.3 冷冻对囊胚细胞数的影响 |
| 3.3.4 冷冻对囊胚细胞凋亡的影响 |
| 3.3.5 转基因胚胎体外生产效率 |
| 3.3.6 体外胚胎PCR鉴定 |
| 3.3.7 胚胎移植妊娠结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 全文结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）MAPK信号通路及转录因子TCF12在小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的功能研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 卵母细胞生长与成熟 |
| 1.2 卵母细胞成熟过程中的信号传导 |
| 1.2.1 卵母细胞成熟促进因子 |
| 1.2.2 丝裂原激活的蛋白激酶信号通路 |
| 1.3 受精及卵裂 |
| 1.4 受精后基因组和蛋白组的活动变化 |
| 1.4.1 胚胎的第一次有丝分裂 |
| 1.4.2 表观遗传重编程与合子基因组激活 |
| 1.5 碱性螺旋环螺旋转录因子家族 |
| 1.5.1 bHLH转录因子家族特征及功能 |
| 1.5.2 Eprotein转录因子家族结构及功能研究进展 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 实验设备及试剂 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 常用试剂 |
| 2.2 动物实验 |
| 2.2.1 工具小鼠的获得与饲养 |
| 2.2.2 生殖力检测 |
| 2.2.3 卵母细胞的获取和体外培养 |
| 2.2.4 显微注射 |
| 2.2.5 雌鼠的超数排卵 |
| 2.2.6 受精卵获取与体外培养 |
| 2.2.7 体外受精 |
| 2.2.8 精子结合 |
| 2.2.9 孤雌激活 |
| 2.2.10 活细胞 |
| 2.3 形态学实验 |
| 2.3.1 免疫荧光染色 |
| 2.3.2 EdU染色 |
| 2.3.3 EU染色 |
| 2.3.4 5mc和5hmc染色 |
| 2.3.5 组织石蜡包埋与切片 |
| 2.3.6 苏木精-伊红染色 |
| 2.3.7 免疫组织化学染色 |
| 2.4 分子与生化实验 |
| 2.4.1 基因组提取 |
| 2.4.2 基因型鉴定 |
| 2.4.3 载体构建 |
| 2.4.4 体外转录 |
| 2.4.5 组织RNA逆转录 |
| 2.4.6 微量样品RNA逆转录 |
| 2.4.7 实时定量PCR |
| 2.4.8 绝对实时定量PCR |
| 2.4.9 微量转录组测序 |
| 2.4.10 微量蛋白质谱 |
| 2.4.11 多聚腺苷酸尾部实验 |
| 2.4.12 免疫印迹实验 |
| 第三章 MAPK信号通路正反馈促进母源转录本翻译激活 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 母源Ccnb1转录本有3种不同长度的 3’-UTR |
| 3.3 MAPK信号通路促进卵成熟中Ccnb1long 3’-UTR转录本的翻译激活 |
| 3.4 激活的ERK1/2 促进卵成熟中mRNA翻译激活和减数分裂成熟 |
| 3.5 卵成熟中Ccnb1 mRNA的翻译激活需要CDK1的活性 |
| 3.6 ERK1/2 促进卵成熟中其上游激酶MOS的翻译激活 |
| 3.7 ERK1/2 促进卵成熟中Ccnb1long 3’-UTR及Mos转录本胞质腺苷酸化 |
| 3.8 总结和讨论 |
| 第四章 转录因子TCF12在受精及早期胚胎发育中的功能 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 TCF12在卵母细胞和植入前胚胎中的定位与表达模式 |
| 4.3 母源Tcf12维持雌性生殖力 |
| 4.4 母源Tcf12对卵母细胞减数分裂进程的影响 |
| 4.5 母源Tcf12保障受精及植入前胚胎发育有序进行 |
| 4.6 母源Tcf12影响卵母细胞生长阶段部分母源转录本的积累 |
| 4.7 Tcf12通过调控卵母细胞生长阶段的Astl表达影响皮质颗粒定位 |
| 4.8 敲除Tcf12的卵母细胞受精后的第一轮有丝分裂细胞周期延长 |
| 4.9 TCF12保障卵母细胞受精后合子基因组正常激活 |
| 4.10 敲除Tcf12的二细胞晚期胚胎存在过度的H3K27me3修饰 |
| 4.11 敲除Tcf12的植入前胚胎失去发育潜力 |
| 4.12 Tcf12对早期胚胎发育的维持是真正的母源效应 |
| 4.13 总结与讨论 |
| 第五章 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一:抗体信息 |
| 附录二:引物序列 |
| 作者简历 |
（9）多种因素对小鼠卵母细胞体外受精效果影响的分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.3 小鼠卵母细胞的体外成熟 |
| 1.4 小鼠卵母细胞的体外受精 |
| 1.4.1 小鼠精子的采集和体外获能 |
| 1.4.2 小鼠卵母细胞和精子的孵育 |
| 1.4.3 小鼠早期胚胎的培养 |
| 1.5 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 精子获能时间对小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.2 精卵孵育时间对小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.3 精子密度对小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.4 颗粒细胞对小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 3 讨 论 |
（10）三（2-羧基乙基）膦盐酸盐处理对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育能力的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪卵母细胞体外成熟的研究进展 |
| 2 猪卵母细胞体外成熟的影响因素 |
| 2.1 物理因素 |
| 2.1.1 猪卵巢的来源 |
| 2.1.2 卵巢离体后的时间 |
| 2.1.3 卵巢离体后的温度 |
| 2.1.4 卵巢的质量及卵泡的大小 |
| 2.1.5 猪卵母细胞体外培养体系 |
| 2.2 化学因素 |
| 2.2.1 激素 |
| 2.2.2 抑制或促进卵母细胞成熟的因子 |
| 2.2.3 血清 |
| 2.2.4 卵泡液(PFF) |
| 2.2.5 卵丘细胞 |
| 2.2.6 Ca~(2+)及钙调素 |
| 2.2.7 巯基物质 |
| 3 氧化应激与胚胎发育的关系 |
| 3.1 活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和氧化应激的产生 |
| 3.2 在卵子发生过程中的ROS和氧化还原反应 |
| 3.3 在胚胎发育过程中的ROS和氧化还原反应 |
| 3.4 卵母细胞体外成熟中的氧化应激 |
| 4 抗氧化系统 |
| 4.1 抗氧化剂的分类 |
| 4.2 抗氧化剂与体外成熟 |
| 5 巯基类还原剂 |
| 5.1 β-巯基乙醇(β-ME) |
| 5.2 二硫苏糖醇(DTT) |
| 5.3 三(2-羧基乙基)膦盐酸盐 |
| 6 研究目的与意义 |
| 第二章 TCEP-HCL对卵母细胞成熟、体外受精和胚胎发育能力的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 卵巢 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 仪器设备 |
| 1.1.4 实验耗材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 卵母细胞的收集和体外培养 |
| 1.2.2 体外受精和胚胎培养 |
| 1.2.3 核成熟和体外受精状态的评估 |
| 1.2.4 胚胎发育的评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 TCEP-HCL对猪卵母细胞核成熟及体外受精的影响 |
| 2.2 TCEP-HCL对猪卵母细胞体外受精胚胎发育能力的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 TCEP-HCL对卵母细胞质量的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 卵巢 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 仪器设备 |
| 1.1.4 实验耗材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 卵母细胞的收集和体外培养 |
| 1.2.2 卵母细胞成熟后细胞内GSH和 ROS含量的检测 |
| 1.2.3 RT-qPCR |
| 1.2.4 卵母细胞体外成熟后线粒体含量的测定 |
| 1.2.5 卵母细胞凋亡的测定 |
| 1.2.6 囊胚凋亡细胞的测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 TCEP-HCL对猪卵母细胞GSH和 ROS水平的影响 |
| 2.2 TCEP-HCL对猪卵母细胞线粒体含量的影响 |
| 2.3 TCEP-HCL对猪卵母细胞细胞凋亡的影响 |
| 2.4 TCEP-HCL对体外受精囊胚细胞凋亡的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
四、镍对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响（论文参考文献）
- [1]低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制[D]. 李瑞哲. 甘肃农业大学, 2021
- [2]冻融对小鼠卵母细胞膜上受精介导蛋白Juno的影响[D]. 季珂萌. 广西大学, 2021(12)
- [3]甲氨蝶呤经颗粒细胞途径致女性生殖功能持续性损伤机制及解救方案研究[D]. 刘洋. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(09)
- [4]褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响[D]. 胡慧茹. 扬州大学, 2021(09)
- [5]小鼠不同阶段卵泡同步分离方法的初步建立及评估[D]. 吴丹丹. 蚌埠医学院, 2021(01)
- [6]卵巢储备功能下降中医证素分析及乌萸汤对小鼠线粒体能量代谢影响[D]. 郑凌琦. 北京中医药大学, 2021(01)
- [7]转口蹄疫VP1基因奶山羊体外胚胎生产及冷冻保存[D]. 褚博. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [8]MAPK信号通路及转录因子TCF12在小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的功能研究[D]. 曹兰蕊. 浙江大学, 2021(01)
- [9]多种因素对小鼠卵母细胞体外受精效果影响的分析[J]. 张景锋,郝京京,徐秋良,朱宽佑,牛晖,张长兴. 家畜生态学报, 2021(03)
- [10]三（2-羧基乙基）膦盐酸盐处理对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育能力的影响研究[D]. 曾毅仁. 广西大学, 2020(07)