一、日粮及饲养方式调控鸡球虫病的研究进展（论文文献综述）
范雪梅,林瑞庆,翁亚彪,刘红[1]（2020）在《饲料禁抗背景下鸡球虫病和坏死性肠炎的综合防控》文中指出球虫病和坏死性肠炎是影响鸡肠道健康的两种常发疾病。目前集约化养鸡场的球虫病呈常年流行,并易继发坏死性肠炎,随着全球各国先后禁止在饲料中添加抗生素生长促进剂,坏死性肠炎尤其是亚临床型坏死性肠炎的发生呈上升趋势,这2种疾病给全球养鸡业造成了严重的经济损失。在我国,鸡球虫病与坏死性肠炎的防控以药物防治为主,耐药性和药物残留的问题日益棘手。本文综述了鸡这2种主要肠道疾病的现状,并介绍了国内外近年来在维持家禽肠道健康上的一些替代性措施,以期为家禽肠道健康的研究提供一定参考。
刘丹[2]（2020）在《多肽提取物对鸡抗氧化、调节免疫及抗球虫感染的研究》文中进行了进一步梳理鸡球虫病作为集约化养殖中最常见的禽类疾病,对禽类养殖业危害极大,造成严重的经济损失,目前人们主要采用西药抗生素、免疫疫苗等方法防治鸡球虫病,但鸡球虫对抗生素的耐药性大,且存在药物残留风险,而免疫疫苗的研发成本高、难度大。研究表明,无化学危害、无药物残留的中药提取物,有望作为药物预防和治疗球虫病。据报道,地鳖和蛴螬肽提取物均具有良好的抗氧化和免疫调节作用。当前将中药提取物作为饲料添加剂,通过增强机体抗氧化应激及提高调节机体免疫功能增强鸡对球虫感染的危害,从而防治和缓解鸡球病成为研究热点。本研究依据地鳖肽抗氧化和蛴螬肽免疫调节作用,将其联合应用探讨多肽提取物对艾美耳球虫感染的肉仔鸡生产性能、抗氧化、免疫调节和抗球虫感染的作用,从营养调控角度来提高在受到应激时家禽的免疫功能。试验一:探讨多肽提取物（地鳖肽和蛴螬肽联合）的体外抗氧化效果。测定多肽提取物的清除自由基能力,抗氧化剂还原能力和抑制脂质过氧化反应能力发现,结果1:1比例组合的多肽提取物对O2-、-DPPH自由基清除作用最强、抗氧化活性接近于阳性药对照组且MDA含量降低。结果表明多肽提取物能清除自由基,抑制脂质过氧化反应,降低自氧化反应,呈现良好体外抗氧化作用。试验二:探讨地鳖肽和蛴螬肽组合的多肽提取物的体外免疫调节作用的效果。采用MTT法测定鸡外周血淋巴细胞转化率和小鼠巨噬细胞（RAW264.7）活力,中性红法和流式细胞术对RAW264.7细胞的吞噬能力进行检测。结果1:1比例组合多肽提取物组鸡外周血淋巴细胞转化率和RAW264.7细胞相对活力最高（分别达到73%和98%）,RAW264.7细胞吞噬能力最强。结果表明多肽提取物能够提高鸡淋巴细胞转化和巨噬细胞吞噬能力,呈现一定免疫调节作用。实验三:探讨地鳖肽和蛴螬肽组合的多肽提取物对艾美耳球虫感染肉仔鸡的生产性能、抗球虫效果、免疫功能、抗氧化功能及肉品质的影响。取1日龄健康肉仔鸡随机分6组,空白组和红对照组鸡饲喂基础日粮,盐霉素组鸡饲喂基础日粮及添加盐霉素（60mg/kg）,地鳖肽组鸡饲喂基础日粮及添加地鳖肽（1OOmg/kg）、蛴螬肽组鸡饲喂基础日粮及添加蛴螬肽（100mg/kg）,联合肽组鸡饲喂基础日粮及添加地鳖肽（100mg/kg）和蛴螬肽（100mg/kg）;14日龄时除空白组外,所有肉仔鸡攻毒柔嫩艾美耳球虫卵囊5×103/只,分别测定肉仔鸡于21日龄和42日龄时鸡生长性能（日增重、采食量、料重比）、免疫器官指数（肝脏、胸腺和法氏囊）、血液生化和抗氧化及免疫功能指标。结果肉仔鸡生长性能差异不显着:鸡感染球虫第7日,联合肽组比红对照组肠道损伤显着降低;鸡感染球虫第4-7日,红对照组鸡排出卵囊数达到约11.95×104个,而联合肽组鸡排出卵囊数显着低于红对照组;红对照组抗球虫指数（ACl）仅为126.44左右,联合肽组ACI为159.79;联合肽组与红对照组相比鸡免疫器官指数均极显着升高;联合肽组与红对照组比42日龄肉仔鸡胸部和腿部肌肉滴水损失均显着下降,肉的颜色红度值（a*）明显升高而亮度值（L*）明显降低,黄度值（b*）差异不显着;联合肽组与红对照组比较21日龄肉仔鸡血清ALP活性均显着降低,TP浓度均显着升高,ALB差异不明显;42d肉仔鸡ALT活性显着降低,ALP和TP无显着差异,ALB浓度显着升高。联合肽组与红对照组比较肉仔鸡血清中抗氧化酶（CAT、SOD、GSH-Px）活力均极显着升高,MDA含量极显着降低;联合肽组与红对照组比较仔鸡肠道绒毛高度明显升高、隐窝深度显着变浅,绒毛高度与隐窝深度比值极显着增大;联合肽组肉仔鸡血液T和B淋巴细胞转化显着高于红对照组。结果表明多肽提取物可显着降低卵囊排出呈现一定抗球虫效果,提高感染柔嫩艾美耳球虫肉仔鸡的抗氧化功能和调节免疫功能,改善肉品质。综上所述,地鳖肽和蛴螬肽具有一定的体外抗氧化和免疫调节作用,将其联合应用添加到肉仔鸡日粮中通过营养调控,改善感染球虫肉仔鸡的肉品质,提高鸡抗氧化应激和增强机体调节免疫功能,改善仔鸡肠黏膜损伤,对球虫感染鸡起到一定的缓解作用。
华恩玉[3]（2020）在《堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究》文中进行了进一步梳理鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的寄生原虫病,据不完全统计每年球虫病给家禽养殖业造成的经济损失超过30亿美元。长期以来,鸡球虫病的防控主要依赖药物。但随着球虫耐药性的不断增强以及药物残留危害食品安全,鸡球虫病的防控措施由药物防治转向疫苗免疫预防。目前,用于临床的鸡球虫病疫苗主要是活虫苗,亚单位疫苗仅见有一种,即由分离于巨型艾美耳球虫（Eimeriamaxima）配子体的3种蛋白研制而成。堆型艾美耳球虫（E.acervulina）是养鸡场流行最广泛的鸡球虫之一,可引起鸡的亚临床球虫病,影响鸡的生长发育,降低饲料利用率。迄今,国内外对堆型艾美耳球虫配子体蛋白及其基因少有报道,其重组蛋白的免疫保护力也尚无见有报道。为此,本文对堆型艾美耳球虫配子体蛋白56基因（Eagam56）与82基因（Eagam82）进行了克隆和序列分析,分别构建了 2个基因的原核表达质粒,诱导表达后鉴定了重组蛋白的免疫原性,并经动物免疫保护试验评价了重组蛋白对堆型艾美耳球虫的免疫保护力,研究结果将为研制重组配子体抗原亚单位疫苗奠定基础。1.堆型艾美耳球虫Eagam56基因的克隆表达与免疫原性分析提取堆型艾美耳球虫（扬州株）卵囊的基因组DNA,PCR扩增Eagam56基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体;经测序、密码子优化后连接至pET-28a（+）质粒,构建pET-28a（+）-Eagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后进行诱导表达,表达产物分别进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定以及免疫原性分析。结果显示,克隆的Eagam56基因全长为1323 bp,具有一个大小为1323 bp的完整开放阅读框,编码440个氨基酸;与Genbank上的Eagam56基因序列对比,其同源性为99.9%;用在线软件对该基因编码区抗原性进行预测,发现Eagam56基因含有10个抗原决定簇,其中3个位于酪氨酸、脯氨酸富集区;重组蛋白大小约49 kDa,以可溶蛋白形式居多,可被HIS单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫（E.necatrix）、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）感染的鸡阳性血清特异性识别,显示重组蛋白EaGAM56具有良好的免疫原性和交叉抗原性。2.堆型艾美耳球虫Eagam82基因的克隆表达与免疫原性分析提取堆型艾美耳球虫（扬州株）卵囊的基因组DNA,PCR扩增Eagam82基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体;经测序、密码子优化后连接至pET-28a（+）质粒,构建pET-28a（+）-Eagam82表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后,对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定以及免疫原性分析。结果显示,克隆的Eagam82基因全长为1704bp,具有一个大小为1704bp的完整开放阅读框,编码568个氨基酸;与Genbank上的Eagam8基因序列对比,其同源性为99.4%;用在线软件对该基因编码区抗原性进行预测,发现Eagam82基因含有15个抗原决定簇,其中2个位于酪氨酸、脯氨酸富集区;重组蛋白大小约82 kDa,以可溶蛋白形式为多;可被HIS单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫感染的鸡阳性血清特异性识别,显示重组蛋白EaGAM82具有良好免疫原性和交叉抗原性。3.重组蛋白rEaGAM56和rEaGAM82及其联合免疫对堆型艾美耳球虫的免疫保护力以黄羽肉鸡为试验动物,以鸡的增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分、抗球虫指数（ACI）以及血清抗体水平等为评价指标,评价重组蛋白rEaGAM56、rEaGAM82以及2种重组蛋白联合应用的免疫保护效果。结果显示,rEaGAM56与rEaGAM82高（200 μg/鸡）、中（100 μg/鸡）剂量免疫组以及联合免疫组,鸡临床症状减轻。随着免疫剂量的增加,鸡的相对增重率与卵囊减少率增加,平均肠道病变记分减少。联合免疫高剂量组（各100 μg/鸡重组蛋白）的相对增重率与卵囊减少率达73.74%和74.27%。rEaGAM56、rEaGAM82、联合免疫高剂量组的 ACI 分别为 148.24、143.92 和 148.74。rEaGAM56的免疫保护力较rEaGAM82的强,rEaGAM56和rEaGAM82免疫鸡后均能产生血清抗体。结论:两种重组蛋白免疫均能产生一定的免疫保护力。
王晓慧[4]（2020）在《白介素8基因多态性及与京海黄鸡球虫病抗性指标的相关分析》文中研究指明本研究采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测白介素-8（Interleukin-8,IL-8）基因在京海黄鸡感染（感染Ⅰ组每只鸡灌饲7500个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,感染Ⅱ组每只鸡灌饲1.5万个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊）和未感染（对照组每只鸡灌饲生理盐水）情况下的表达情况,并对感染不同天数和不同剂量下的京海黄鸡血浆中抗性指标进行检测。利用DNA测序技术,检测京海黄鸡IL-8基因上游-2000 bp 至下游 1000 bp 的单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphisms,SNPs）,对5’端调控区的SNPs进行生物信息学分析,并将所有SNPs与球虫抗性指标进行关联分析。结果如下:1、IL-8基因在感染第7 d时,在各个组织中均有表达,且在大部分组织中感染组的表达量均高于对照组。其中感染Ⅱ组的IL-8基因在肝脏中表达量显着高于其他两组（P<0.05）,在脾脏和盲肠中表达量极显着高于其他两组（P<0.01）,在法氏囊和胸腺中表达量显着高于对照组（P<0.05）。2、比较感染不同天数和不同剂量对京海黄鸡血液生化指标和抗氧化指标的影响结果发现:在感染第3d时不同试验组的碱性磷酸酶（Alkalinephosphatase,ALP）和葡萄糖（Glucose,GLU）指标之间有显着性差异（P<0.05）,感染第7 d时不同试验组的ALP、总蛋白（Total protein,TP）、球蛋白（Globulin,GLOB）、肌酐（Creatinine,CRE）、甘油三酯（Triglyceride,TG）、钙（Calcium,Ca）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）、一氧化氮（Nitric oxide,NO）、IL-2、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）与 IL-8指标之间有显着（P<0.05）或极显着（P<0.01）差异。3、测序结果与GenBank上序列进行比较后,共发现了 42个SNPs,新发现的突变位点有4个。其中位于5’端调控区的SNPs有14个,包括1个新发现的SNP;位于第1内含子的SNPs有7个,包括1个新发现的SNP;位于第2、3内含子的SNPs共有12个;位于3’端非编码区（Untranslated region,UTR）的SNPs有9个,包括2个新发现的SNPs。4、将IL-8基因全序列检测到的SNPs与球虫抗性指标关联分析后发现共有15个SNPs与抗性指标有关联,这些位点有5个位于5’端调控区,有6个位于内含子区,有4个位于3’端非编码区,这些突变可能对球虫抗性指标有一定的调控作用。5、对这15个SNPs进行单倍型分析,并与抗性指标关联,结果表明:5’端的 H1H3 单倍型组合的 SOD、CAT、白介素-1β（Interleukin-1-β,IL-1β）、IL-6、IL-8和γ-干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）指标均高于其他三种单倍型组合,CAT和IL-6指标分别极显着（P<0.01）与显着（P<0.05）的高于H3H3单倍型组合,丙二醛（Malondialdehyde,MDA）指标显着低于H3H3单倍型组合（P<0.05）,IL-8指标极显着高于H1H1单倍型组合（P<0.01）,表明了 H1H3单倍型组合为优势单倍型组合。内含子的H6H7单倍型组合的SOD、谷胱甘肽过氧化物（Glutathione peroxidase,GSH-Px）、CAT、IL-8 和 IFN-γ 指标均高于其他三种单倍型组合,H5H7和H6H7单倍型组合的GSH-Px与IL-8指标均显着高于H5H5单倍型组合（P<0.05）;H6H7单倍型组合的CAT指标显着高于H5H5单倍型组合（P<0.05）,表明了 H6H7单倍型组合为优势单倍型组合。3’端的H9H11单倍型组合的SOD、GSH-Px、NO、IL-2、IL-6和IL-8指标均高于其他三种单倍型组合,H9H11单倍型组合的SOD与IL-2指标显着高于H9H9单倍型组合（P<0.05）,NO指标显着高于H9H10单倍型组合（P<0.05）,表明H9H11单倍型组合为优势单倍型组合。
黄杰[5]（2020）在《鸡柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株分离与耐药机制研究》文中提出鸡球虫病是由艾美耳属球虫感染肠道所引起的传染性原虫病,给世界各地的养鸡业带来巨大的经济损失。至今为止,我国公认艾美耳球虫有7种,其中以柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）的感染力和致病力最强。目前对球虫病的主要控制办法还是在饲料或饮水中的添加抗球虫药物,如地克珠利（Diclazuril,DIC）,饲料中仅添加1 mg/kg就可以达到很好的治疗效果,但药物的长期使用会导致球虫产生耐药性,所以本研究通过对田间分离的DIC耐药株进行一系列研究,并通过同工酶谱、随机扩增多态DNA（RAPD）以及DIC潜在作用靶点甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）和乳酸脱氢酶（LDH）的mRNA表达等角度来分析耐药性产生的可能机制,为更好地防治球虫病提供理论依据。具体研究内容如下:1、田间柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株的分离本试验为收集了来自江苏、山东、福建、安徽、河南等5个不同地区共13个发病鸡场的粪便样本,并从中分离纯化出其中的E.tenella。为评价13个分离株对DIC的耐药性设立DIC敏感株（SE）作为对照。试验时对每个虫株分别设置感染用药组、感染不用药组和空白对照组,以抗球虫指数、病变记分减少率、相对卵囊产量、最适抗球虫活性百分率四项指标进行综合评定。结果显示来自江苏南通地区虫株中有6株对DIC表现出不同程度的耐药性,有5株表现为重度耐药;河南开封分离株对DIC表现重度耐药;山东地区仅有1株对DIC轻度耐药,其余分离株均对DIC表现敏感。2、南通地区E.tenella分离株耐药性分析本试验选取南通地区5株重度耐药分离株（NT1、NT2、NT3、NT4、NT5）进行体外DIC抗球虫孢子化效果检测,同时运用同工酶技术以及随机多态性DNA分析法对其耐药性进行进一步分析。试验结果表明,与SE株相比,耐药株均可以显着抵抗DIC对球虫孢子生殖抑制;但除NT3的LDH、GPI以及G6PD同工酶与SE有明显差异外,其余耐药株与SE株之间无明显差异,推测耐药性与同工酶谱的变化关系不大。DNA多态性分析发现,有4株耐药株与SE株之间相似度在60%左右,存在较大的差异;NT5与SE之间相似度达到80%以上,差异较小,推测发生了某些关键变化,故选取NT5进行进一步研究。3、NT5分离株耐药性产生的分子机制初探本试验通过鸡体感染试验研究NT5和SE在DIC的刺激下在体内的发育情况,并检测DIC潜在作用靶点GAPDH和LDH的表达情况。试验共分为5组,分别是空白对照组（Con）、NT5攻毒模型组（NT5）,SE攻毒模型（SE）,NT5攻毒+DIC治疗组（NT5+DIC）,SE攻毒+DIC治疗组（SE+DIC）,在感染后的96 h、120 h、144 h、168 h分别采集各组盲肠样品制作组织病理切片观察,检测并比较感染后96h、120h、144h时盲肠组织内的球虫GAPDH、LDH基因mRNA表达变化。病理切片结果显示,DIC处理使SE球虫出现二代裂殖体异常发育以及合子发育异常等情况,并使二代裂殖子数量大量减少;但NT5球虫仅出现少量卵囊发育异常,在其余发育阶段均未发现明显异常。mRNA检测结果显示在球虫体内发育过程中,DIC处理引起SE株球虫内GAPDH的表达量显着上升,而LDH表达量下降;而NT5株球虫在96 h、120 h时,LDH和GAPGH的mRNA表达量均显着下降,说明此时NT5株球虫内的糖酵解代谢途径被DIC抑制,但仍可继续正常发育;在144h时,NT5株GAPDH mRNA表达量显着上升,可能与NT5株球虫在此阶段出现卵囊发育异常有关。经测序后发现,NT5株与SE株的GAPDH蛋白在氨基酸链C端的最后18个氨基酸完全不同,提示NT5株GAPDH基因可能发生突变。综上所述,敏感株虫体使用DIC治疗后,GAPDH mRNA的高表达可能是造成虫体在裂殖生殖阶段与配子生殖阶段发育异常的原因。耐药球虫使用DIC治疗后,GAPDH mRNA表达量降低。NT5株耐药性的产生可能与GAPDH mRNA表达差异有关,是否与GAPDH基因突变相关仍需进一步研究。
余水兰[6]（2020）在《柔嫩艾美耳球虫免疫增强剂筛选与早熟株相关基因研究》文中指出鸡球虫病是由艾美耳属球虫感染引起的一种家禽传染性寄生虫病。由于使用药物防治球虫病会产生耐药性及药物残留的问题,因此迫切需要免疫预防替代药物成为球虫病控制的主导途径。由早熟株卵囊组成的减毒活疫苗是目前应用最广泛的球虫病疫苗,但球虫活疫苗对免疫鸡的生长具有潜在不良影响。研究发现免疫增强剂不仅可增强球虫活疫苗的免疫效果,同时也可降低接种疫苗带来的不良影响。与母株相比,球虫早熟株具有潜在期明显缩短、致病性减弱、繁殖能力降低等独特的生物学特性,但其早熟的分子机制不明。为此,本研究一方面通过笼养试验和平养试验研究盐酸左旋咪唑、黄芪多糖、壳寡糖、地衣芽孢杆菌、酵母多糖等对柔嫩艾美耳球虫的免疫增强效果和免疫鸡增重的影响,以筛选获得每种免疫增强剂的有效剂量,为筛选球虫活疫苗的免疫增强剂奠定基础;另一面通过RNA-seq技术筛选柔嫩艾美耳球虫早熟株与母株孢子化卵囊的转录组差异,并对其中两个差异表达基因——柔嫩艾美耳球虫颈部蛋白2和3（EtRON2和EtRON3）的功能和特性进行初步分析,为探讨早熟性状产生的分子机制奠定基础。1.五种免疫增强剂对柔嫩艾美耳球虫免疫增强效果的评价——笼养试验通过笼养试验评价盐酸左旋咪唑、黄芪多糖、壳寡糖、地衣芽孢杆菌、酵母多糖的不同剂量对柔嫩艾美耳球虫早熟株卵囊的免疫增强效果,以筛选每种免疫增强剂的有效剂量。3日龄雏鸡进行首次免疫并服用免疫增强剂,10日龄时仅用卵囊进行二免,17日龄时用柔嫩艾美耳球虫野毒株进行攻虫,以免疫期间体重、攻虫后的抗球虫指数（ACI）以及试验期间血清IgG和IgM抗体水平等作为评判指标。结果显示,0.05 mg～0.1 mg盐酸左旋咪唑、2.5 mg～5 mg黄芪多糖、2.5 mg～7.5 mg壳寡糖、1.25 mg酵母多糖以及10 mg地衣芽孢杆菌对柔嫩艾美耳球虫感染鸡具有免疫增强和促生长双重作用。2.五种免疫增强剂对柔嫩艾美耳球虫的免疫增强研究——平养试验通过平养试验对笼养试验中所获得的5种免疫增强剂的有效剂量进一步验证。3日龄雏鸡用柔嫩艾美耳球虫早熟株卵囊进行免疫并服用免疫增强剂,24日龄用柔嫩艾美耳球虫野毒株进行攻虫,以免疫期间体重、攻虫后的抗球虫指数（ACI）以及试验期间血清IgG和IgM抗体、CD4和CD8分子、细胞因子（TNF-α、TGF-β1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10）水平等作为评价指标。结果显示,0.1 mg盐酸左旋咪唑可明显促进鸡CD4、CD8因子的增殖和TNF-α、IL-2的分泌,明显提高柔嫩艾美耳球虫的免疫效果,且有促生长的作用。2 mg和6 mg地衣芽孢杆菌、5 mg和7.5 mg壳寡糖、2.5 mg酵母多糖均可明显促进鸡CD8分子的增殖和TNF-α的分泌,具有免疫增强和促生长的作用。5 mg黄芪多糖对柔嫩艾美耳球虫感染鸡具有促生长作用,但免疫增强效果不显着,黄芪多糖对球虫具有免疫增强作用的有效剂量仍需进一步研究。3.柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株孢子化卵囊的转录组分析继续对本实验室前期获得的柔嫩艾美耳球虫早熟株进行早熟选育,经过11次的早熟株选育,潜在期由126 h缩短到107 h,缩短了19 h,与同源母株的潜在期141 h相比,缩短了34 h。通过RNA-seq技术比较了该早熟株与母株之间孢子化卵囊的转录组差异,筛选两个虫株之间的差异表达基因。结果共鉴定出差异表达基因6602个,早熟株上调表达基因3888个,下调表达基因2714个。这些差异基因主要与阳离子结合、未折叠蛋白结合、磷酸酯水解酶活性等功能相关,参与细胞内吞作用、泛素介导的蛋白水解、谷胱甘肽代谢、内质网蛋白加工等通路。利用qPCR对转录组数据分析获得的22个差异表达基因和5个非差异表达基因进行验证,结果显示27个基因的mRNA转录水平均与RNA-seq结果一致。研究结果为探索球虫早熟性状产生的分子机制奠定基础。4.柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2和3特性与功能初步分析根据转录组学结果,选取两个早熟株下调基因——柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2和3（EtRON2和EtRON3）进行特性和功能的初步研究。结果显示,EtRON2的mRNA转录水平在孢子化卵囊中最高,未孢子化卵囊和第二代裂殖子次之,子孢子最低;蛋白主要分布在游离的子孢子、胞内子孢子和第二代裂殖子顶端棒状体的位置,以及未成熟裂殖体的细胞质中;其抗体对子孢子入侵DF-1细胞具有显着的抑制作用。EtRON3转录水平在孢子化卵囊阶段转录水平最高,未孢子化卵囊阶段次之,第二代裂殖子和子孢子最低;蛋白主要分布在游离的子孢子和胞内子孢子顶端棒状体的位置,第二代裂殖子的胞质以及未成熟裂殖体的表面;其抗体对子孢子入侵DF-1细胞具有显着的抑制作用。EtRON2和EtRON3在早熟株孢子化卵囊中转录水平均明显低于母株,与转录组学分析的结果一致,这提示EtRON2和EtRON3与早熟性状的产生有着一定的关系。但是EtRON2和EtRON3在球虫入侵以及发育调节中的作用仍需深入研究。
谢涛[7]（2019）在《复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡生产性能和免疫功能的影响》文中指出本文通过研究复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡生产性能和免疫功能的影响,筛选出饲粮中复合酸化剂的适宜添加水平;利用此适宜添加水平,研究其单独使用及与柴胡提取物联用对堆状艾美耳球虫攻毒后肉鸡生产性能、肠道健康和免疫功能的影响,探讨其是否复合酸化剂能缓解球虫攻毒引起的肉鸡生产性能下降及可能作用机制。试验一复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡生产性能和免疫功能的影响试验采用单因素完全随机试验设计,设5个处理组,分别为球虫疫苗未攻毒组（PC）、球虫疫苗攻毒组（NC）、球虫疫苗攻毒+0.1%复合酸化剂添加组（NCA0.1%）、球虫疫苗攻毒+0.2%复合酸化剂添加组（NCA0.2%）、球虫疫苗攻毒+地克珠利添加组（NCD）。将420只1日龄的罗斯（ROSS）肉公鸡按体重无差异原则随机分到以上5个处理组中,每个处理7个重复,每个重复12只鸡。复合酸化剂由乳酸、富马酸、柠檬酸组成。于15日龄时,所有球虫攻毒组肉鸡灌服球虫疫苗（卵囊数为2.2×104个,包含柔嫩、巨型、毒害、堆型四种艾美耳弱毒球虫）。于21日龄时,采集血清、脾脏和空肠组织用于指标分析。结果显示:（1）与PC组相比,NC组和NCA0.2%组21d肉鸡体重（BW）和15-21d肉鸡体增重（BWG）显着降低（P<0.01）,其他处理组与PC组无显着差异;（2）与PC组相比,NC、NCA0.1%和NCA0.2%组肉鸡血清尿酸含量显着提高（P<0.01）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL）含量显着降低（P<0.05）;（3）与PC组相比,NC组肉鸡血清中白细胞介素-2（IL-2）和一氧化氮（NO）含量显着升高（P<0.001）;与NC组相比,添加酸化剂与地克珠利组降低了肉鸡血清中IL-2（P<0.001）和NO（P<0.05）的含量;（4）与PC组相比,NC、NCA 0.2%和NCD组脾脏IL-2 mRNA表达量显着升高（P<0.001）,NCA 0.2%组白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达量显着升高（P<0.01）,NCA 0.1%组白细胞介素-10（IL-10）mRNA表达量显着降低（P<0.05）;其他处理组脾脏IL-2、IL-6或IL-10 mRNA表达量与PC组无显着差异。（5）与PC组相比,所有球虫攻毒组空肠紧密连接蛋白2（zonula occudens-2,ZO-2）和闭合小环蛋白2（mucin 2,MUC2）mRNA表达量显着降低（P<0.05）;与PC组相比,NC和NCA 0.2%组空肠闭锁蛋白（occludin,OCLN）mRNA表达量显着降低（P<0.05）,但NC0.1%与对照组无显着差异。以上结果表明,添加0.1%的复合酸化剂能缓解球虫疫苗攻毒引起的生长前期肉鸡（15-21d）生产性能下降。试验二复合酸化剂及其与柴胡提取物联用对堆型艾美耳球虫攻毒肉鸡生产性能和免疫功能的影响试验采用单因素试验设计,设5个处理组,分别为球虫未攻毒对照组（PC）、球虫攻毒组（NC）、球虫攻毒+0.1%复合酸化剂添加组（NCA）、球虫攻毒+0.1%柴胡提取物添加组（NCB）以及球虫攻毒+0.1%复合酸化剂和0.1%柴胡提取物联用组（NCAB）。将480只1日龄的ROSS 308肉鸡按体重无差异原则随机分到以上5个处理组中,每个处理6个重复,每个重复公鸡、母鸡各8只,共16只鸡。于15日龄时,所有的球虫攻毒组肉鸡灌喂堆型艾美耳球虫（卵囊数为7.8×104个）。于21日龄时,采集肉公鸡全血、血清、脾脏和十二指肠用于指标分析。试验结果显示:（1）未攻毒阶段,添加复合酸化剂显着提高14日龄肉鸡体重（BW）和1-14日龄体增重（BWG）（P=0.001）,降低料重比（P<0.05）。球虫攻毒后,与PC组相比,所有球虫攻毒组15-21d肉鸡BWG（P<0.001）和AFI均有降低（P<0.1）;但与NC组相比,NCA和NCAB组肉鸡的BWG显着增加（P<0.05）。（2）与NC组相比,NCB组降低了球虫攻毒后第5天粪便中的球虫卵囊数（P<0.05）,NCAB组降低了球虫攻毒后第5天和7天粪便中的球虫卵囊数（P<0.01）。（3）与PC组相比,NC、NCA和NCAB组肉鸡血液中CD3+CD4+细胞含量显着增加（P<0.01）;与NC相比,NCB组肉鸡血液中CD3+CD4+与CD3+CD8+细胞含量显着降低（P<0.05）。（4）与PC组相比,NC组肉鸡血清中IL-1β和IFN-γ含量和iNOS酶活显着升高;与NC组相比,NCA、NCB和NCAB组以上3个指标均显着降低（P<0.05）。（5）与PC组相比,NCB和NCAB组肉鸡脾脏IL-6 mRNA表达量显着升高（P<0.001）,NCAB组IL-2 mRNA表达量显着升高（P<0.001）;（6）与PC组相比,所有球虫攻毒组肉鸡十二指肠绒毛高度（P<0.001）和绒隐比均显着降低（P<0.001）,隐窝深度显着增加（P<0.001）。与NC组相比,NCA、NCB和NCAB组隐窝深度显着增加（P<0.001）。（7）与PC组相比,所有球虫攻毒组十二指肠OCLN mRNA表达量降低（P<0.05）,MUC-2 mRNA表达量增加（P<0.001）。与NC组相比,添加酸化剂降低了CLDN1和MUC-2 mRNA表达量（P<0.05）,添加柴胡提取物降低了MUC-2 mRNA表达量（P<0.001）。以上结果表明,添加0.1%的复合酸化剂和/或0.1%的柴胡提取物均能够缓解堆型球虫攻毒引起的生长前期肉鸡（15-21d）生产性能下降,可能与其改变炎症反应和肠道形态结构有关;但二者同时添加未见加和效应。综合以上两个试验的研究结果,0.1%复合酸化剂可以缓解球虫攻毒引起的生长前期肉鸡生产性能下降,这可能与酸化剂改善了肉鸡免疫功能和肠道健康有关。
汤新明,索勋,刘贤勇[8]（2018）在《集约化养殖模式下鸡球虫病的防控》文中认为重大动物疫病的有效防控保障和促进了养殖业的快速发展。科学的疫病防控措施不仅有利于保障动物福利,还有利于提升养殖业的经济效益。全面了解和掌握疫病发生、发展规律是制定科学防控措施的基础和前提。为满足日益增长的市场需求,我国的养鸡业正飞速地向规模化、集约化的养殖模式转变。本文以鸡球虫病为例,介绍规模化养殖模式下鸡球虫病的发生、流行和危害,并对其防控现状进行综述。
李韦[9]（2016）在《槟榔提取物对鸡球虫病的防治效果及机制初步研究》文中进行了进一步梳理目的:鸡球虫病是由艾美球虫属（EimeriaSchneider）单细胞寄生性原生动物引起的病害,它是禽类生产产业中最严重的寄生虫病。由于球虫对一般抗球虫药物耐药性增强和禽类产品中药物残留问题,需要去寻找新的安全的抗球虫药物。植物提取物作为防治球虫的应用具有广阔的前景,位于四大南药（槟榔、益智、砂仁、巴戟天）之首的槟榔具有多种活性成分,主要含有槟榔碱、黄酮类化合物、丹宁、多萜类和类固醇等化合物。本研究以槟榔提取物作为研究对象,旨在为其开发防治鸡球虫病的中草药饲料添加剂提供科学依据。方法:（1）建立文昌鸡球虫病模型;（2）分别使用超临界CO2萃取法、70%乙醇浸提法和水煮法从槟榔干粉中得到相应的提取物,研究这三种提取物对体外球虫卵囊孢子化的影响;（3）选择一种体外抑制孢子化率较好的槟榔提取物作为饲料添加剂进行动物体内饲养试验,探讨槟榔提取物对感染球虫文昌鸡的生长性能、抗球虫药效、机体免疫力等影响及相关作用机制。结果:（1）浓度为1×105个/只孢子化柔嫩艾美耳球虫[Eimeria tenella（Railliet et Lucet）]感染15日龄文昌鸡为最佳人工球虫模型。（2）与空白对照组相比,超临界CO2萃取法提取的2、4 mg/mL槟榔提取物在体外能显着地降低对柔嫩艾美耳球虫卵囊数目和卵囊孢子化率（P<0.05）。（3）日粮中添加100、200、300mg/kg槟榔提取物对感染球虫鸡具有较好的防治效果,属于抗球虫药效中等。在鸡感染后第8-11天,与其它各组相比,200mg/kg槟榔提取物可以明显降低粪便卵囊数（P<0.05）;（4）通过H.E.染色来观察盲肠病理组织学变化,表明在日粮中添加100、200、300mg/kg槟榔提取物能够缓解感染球虫后鸡盲肠组织结构损伤,但槟榔组内之间缓解程度差异不明显（P>0.05）;（5）日粮中添加100、200mg/kg槟榔提取物可提高IL-2、IFN-γ、TNF-β和MIF细胞因子浓度,增强机体免疫力。结论:在日粮中添加100-300 mg/kg槟榔提取物可以缓解球虫感染文昌鸡的症状,提高文昌鸡生长性能。
季辉[10]（2009）在《新型球虫消毒剂“球速灭”的初步研究》文中指出鸡球虫病是养鸡业中最常见的一种寄生性原虫病,发病率为30%-100%,死亡率为20%～80%,发过病的鸡生长发育迟缓,也是危害最严重的鸡寄生虫病.鸡球虫病经口感染,传染源是卵囊,因此杀灭卵囊便能完全防止本病的发生。但是卵囊对常用的消毒药和外界环境有强大的抵抗力。我们研究了球虫卵囊的结构特点后,根据球虫卵囊的自身特点,开发了针对球虫卵囊的消毒剂——球速灭。本课题通过对不同球速灭配方进行筛选,并从体外和体内两个不同方面对球速灭抑杀球虫孢子化卵囊和未孢子化卵囊的效果进行了试验,同时对外界环境对其效果的影响,在实际养殖环境中进行球速灭的临床药效等进行了探讨.具体研究内容如下：1球速灭（Oo-stat）的配方优化试验本研究旨在获得对鸡球虫卵囊有良好抑杀作用的球速灭最佳配方。将三种不同配方的球速灭分别配成1：20、1：30、1：40、1：50、1：60、1：80、1：100、1：150、1：200、1：300及1：400的溶液。将球速灭溶液分别与柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊体外相互作用6h、12h和24 h之后,培养观察其孢子化率。结果表明：球速灭Ⅰ、球速灭Ⅱ除1：300和1：400处理6h组及1：400处理12 h组与对照组差异不显着外,其余各组均显着低于生理盐水对照组（P<0.05）；1：20、1：30、1：40、1：50、1：60及1：80的球速灭溶液分别处理卵囊6h、12h和24 h后孢子化率均低于5%；球速灭Ⅲ1：20、1：30、1：40、1：50、1：60及1：80的球速灭溶液分别处理卵囊12h和24 h后孢子化率均低于5%,但是当处理时间为6h时,其孢子化率较高。结果提示,球速灭Ⅱ具有优良的抑杀鸡球虫卵囊的作用。2温度对球速灭抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响本试验旨在探讨温度对球速灭抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响。以7%氨水作为对照组,设置1：50,1：100,1：150的球速灭溶液组,同时设置不处理的生理盐水对照组。分别与柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊在体外相互作用6h、12h和24 h,然后用2.5%重铬酸钾溶液培养处理后的球虫卵囊,观察其孢子化率。结果表明：1：50、1：100、1：150球速灭在4℃分别处理6h、12h和24 h的卵囊孢子化率均极显着（P<0.01）高于20℃下的对应处理组。球速灭在20℃下有更好的抑制球虫卵囊孢子化的作用。3球速灭抑杀鸡球虫孢子化卵囊作用研究本研究旨在观察球速灭对孢子化球虫卵囊的抑杀作用。以7%氨水作为对照组,设置1：50,1：100,1：150的球速灭溶液分别处理孢子化卵囊6h、12h和24 h。将处理后的球虫卵囊按照5x104个／只接种鸡,同时设置接种未经处理的卵囊的阳性对照组与不接种球虫卵囊的阴性对照组。观察接种后各组鸡只临床表现及病理变化,并计算抗球虫指数.结果表明：1：50球速灭各种时间处理组的抗球虫效果均达到高效；1：100球速灭处理12 h、24 h组抗球虫效果为中效；1：150球速灭溶液抗球虫效果较低或无抗球虫效果.1：50球速灭溶液具有强烈的杀灭球虫卵囊的作用.4有机物对球速灭抑杀鸡球虫卵囊的影响本研究旨在观察有机物对球速灭抑杀鸡球虫卵囊效果的影响。使用1：50球速灭溶液在20℃环境下,处理卵囊和粪便混合物（孢子化卵囊和未孢子化卵囊）,然后通过检查卵囊的孢子化率以及将处理后的孢子化卵囊接种给鸡,观察鸡只生长和病变情况,得出有机物对球速灭效果的影响。结果表明,当有鸡粪存在时,卵囊的孢子化率较高,并且随着鸡粪厚度的增加,球速灭对卵囊的作用迅速减弱；当有鸡粪便存在时,球速灭对孢子化卵囊几乎无作用,接种鸡死亡率较高。结果提示,有机物对球速灭抑杀鸡球虫卵囊的作用有一定的影响。5球速灭抑杀鸡球虫卵囊的模拟现场试验本研究旨在得到在模拟现场条件下球速灭抑杀鸡球虫卵囊的效果.在地面洒泼球虫卵囊后,用1：50球速灭溶液喷雾消毒地面,同时将门窗紧闭,待处理24 h后,将鸡只放入。同时设阳性对照组和阴性对照组,同一处理两个重复.结果表明：球速灭处理组平均增重极显着高于阳性对照组（P<0.01）,相对增重率高于阳性对照组,且饲料利用率高于阳性对照组。球速灭在模拟现场条件下对球虫卵囊有着良好的杀灭作用。6球速灭预防鸡球虫病的田间试验为获得临床使用的球速灭的最佳浓度,选择球虫发病较严重的鸡舍进行试验。分别用1：25,1：50和1：100浓度的球速灭消毒,密闭作用24 h,以不用球速灭处理的鸡舍作为对照。每种处理两个重复。结果表明：球速灭处理组的料肉比均低于对照组,且球速灭处理组的生产效率指数均高出对照组很多；球速灭各浓度处理组死亡率均小于对照组；1：25和1：50处理组只在出栏时垫料中检出少量卵囊,与对照组相比差异明显。各浓度球速灭处理组病变记分均小于平均值,而对照组为处于平均值和高于平均值。结果提示：1：50球速灭对球虫卵囊有着良好的杀灭作用。
二、日粮及饲养方式调控鸡球虫病的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、日粮及饲养方式调控鸡球虫病的研究进展（论文提纲范文）
（1）饲料禁抗背景下鸡球虫病和坏死性肠炎的综合防控（论文提纲范文）
| 前言 |
| 1 鸡球虫病 |
| 1.1 病原和生活史 |
| 1.2 流行病学 |
| 2 坏死性肠炎 |
| 2.1 病原及毒素 |
| 2.2 致病因素 |
| 3 防控 |
| 3.1 鸡球虫病疫苗 |
| 3.2 抗球虫药 |
| 3.3 NE免疫预防 |
| 3.4 抗NE药物 |
| 3.5“生物穿梭”联防球虫病和NE |
| 4 抗生素替代措施 |
| 4.1 噬菌体 |
| 4.2 益生菌 |
| 4.3 酸化剂 |
| 4.4 植物精油 |
| 4.5 植物提取物 |
| 5 其他防控措施 |
（2）多肽提取物对鸡抗氧化、调节免疫及抗球虫感染的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文略缩词对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 地鳖的研究进展 |
| 1 地鳖的主要成分 |
| 2 地鳖的药理作用 |
| 第二节 蛴螬的研究进展 |
| 1 蛴螬的主要化学成分 |
| 2 蛴螬的药理作用 |
| 第三节 生物活性肽的研究进展 |
| 1 生物活性肽的分类 |
| 2 生物活性肽的功能 |
| 第四节 鸡球虫病的研究进展 |
| 1 鸡球虫的发育和宿主特异性 |
| 2 鸡球虫病的致病机理 |
| 3 鸡球虫病的危害 |
| 4 鸡球虫病药物防治的应用 |
| 第五节 研究的目的和意义 |
| 第二章 试验研究 |
| 第一节 多肽提取物的体外抗氧化作用的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二节 多肽提取物免疫调节作用的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三节 多肽提取物对鸡抗氧化和调节免疫及抗球虫感染的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 文献综述 鸡球虫病防治研究进展 |
| 1 鸡球虫的生物学特征 |
| 2 鸡球虫病的诊断与防治 |
| 3 鸡球虫病的免疫预防 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 第一章 堆型艾美耳球虫配子体蛋白gam56基因的克隆与表达及其免疫原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 堆型艾美耳球虫配子体蛋白gam82基因的克隆与表达及其免疫原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三章 重组蛋白rEaGAM56和rEaGAM82及其联合免疫对堆型艾美耳球虫的免疫保护力 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（4）白介素8基因多态性及与京海黄鸡球虫病抗性指标的相关分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 鸡球虫病 |
| 1.1.1 鸡球虫病的致病机理 |
| 1.1.2 鸡球虫病的防治措施及局限性 |
| 1.1.2.1 管理控制 |
| 1.1.2.2 药物防治 |
| 1.1.2.3 疫苗预防 |
| 1.1.3 鸡球虫病抗病育种的必要性和可行性 |
| 1.2 白介素8研究进展 |
| 1.2.1 IL-8的生物学功能研究 |
| 1.2.2 IL-8与鸡球虫病抗性的研究 |
| 1.2.3 IL-2和15生物学功能研究 |
| 1.3 球虫病抗性相关的评价指标 |
| 1.3.1 抗氧化指标 |
| 1.3.1.1 抗氧化系统酶 |
| 1.3.1.2 白细胞介素 |
| 1.3.1.3 NO与IFN-γ指标 |
| 1.3.2 生化指标 |
| 1.3.2.1 血清酶指标 |
| 1.3.2.2 蛋白质指标 |
| 1.3.2.3 血糖及血清离子等其他指标 |
| 1.4 本研究的目的意义 |
| 第2章 柔嫩艾美耳球虫感染对京海黄鸡不同组织中IL-8,IL-2和IL-15基因表达量的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 组织样本采集 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 总RNA的提取和检测(Trizol法) |
| 2.1.5.1 总RNA的提取 |
| 2.1.5.2 总RNA的检测 |
| 2.1.6 cDNA的合成 |
| 2.1.7 荧光定量引物设计 |
| 2.1.8 荧光定量PCR |
| 2.1.9 统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 RNA提取结果 |
| 2.2.2 目的基因溶解曲线 |
| 2.2.3 基因在各个组织中的表达 |
| 2.2.3.1 IL-8基因在各个组织中的表达情况 |
| 2.2.3.2 IL-2基因在各个组织中的表达情况 |
| 2.2.3.3 IL-15基因在各个组织中的表达情况 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 不同柔嫩艾美耳球虫感染剂量对京海黄鸡抗性指标的影响 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 样本采集 |
| 3.1.3 抗性指标的测定 |
| 3.1.4 统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 E.tenella不同感染剂量对京海黄鸡抗性指标的影响 |
| 3.2.1.1 E.tenella不同感染剂量对京海黄鸡生化指标的影响 |
| 3.2.1.2 E.tenella不同感染剂量对京海黄鸡抗氧化指标的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 E.tenella感染对京海黄鸡生化指标的影响 |
| 3.3.1.1 对酶的影响 |
| 3.3.1.2 对蛋白质的影响 |
| 3.3.1.3 对CRE、UA、GLU与TG含量的影响 |
| 3.3.1.4 对离子的影响 |
| 3.3.2 E.tenella感染对京海黄鸡生化指标的影响 |
| 3.3.2.1 对抗氧化系统酶的影响 |
| 3.3.2.2 对白细胞介素的影响 |
| 3.3.2.3 对NO、IFN-γ的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 IL-8基因单核苷酸突变及启动子区多态性的生物信息学分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物及病原 |
| 4.1.2 血样采集 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 |
| 4.1.4 DNA提取主要试剂及步骤 |
| 4.1.5 引物设计 |
| 4.1.6 PCR扩增 |
| 4.1.7 基因测序 |
| 4.1.8 序列比对 |
| 4.1.9 群体遗传多样性分析 |
| 4.1.10 转录因子预测 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 基因组DNA的提取效果检测 |
| 4.2.2 IL-8基因测序结果 |
| 4.2.3 IL-8基因SNPs多态性数据分析 |
| 4.2.4 IL-8基因5'端调控区SNPs突变引起的转录因子改变预测结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 IL-8基因的多态性与群体遗传多样性分析 |
| 4.3.2 IL-8基因5端调控区多态性 |
| 4.3.3 IL-8基因外显子与内含子多态性 |
| 4.3.4 IL-8基因3'端非编码区多态性 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 京海黄鸡IL-8基因多态性与球虫抗性指标的关联分析 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验动物及病原 |
| 5.1.2 主要仪器设备与型号 |
| 5.1.3 鸡球虫抗性指标的测定 |
| 5.1.4 连锁不平衡和单倍型分析 |
| 5.2 数据统计与分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 IL-8基因全序列单核苷酸突变与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.1 突变位点6各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.2 突变位点7各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.3 突变位点9各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.4 突变位点11各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.5 突变位点13各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.6 突变位点15各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.7 突变位点17各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.8 突变位点18各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.9 突变位点26各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.10 突变位点28各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.11 突变位点29各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.12 突变位点36各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.13 突变位点38各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.14 突变位点39各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.1.15 突变位点40各基因型与球虫抗性指标关联分析 |
| 5.3.2 IL-8基因各突变位点的连锁不平衡分析 |
| 5.3.2.1 5'端各突变位点连锁不平衡分析 |
| 5.3.2.2 内含子区各突变位点连锁不平衡分析 |
| 5.3.2.3 3'端非编码区各突变位点连锁不平衡分析 |
| 5.3.3 单倍型分析 |
| 5.3.3.1 5'端调控区各突变位点的单倍型分析 |
| 5.3.3.2 5'端单倍型组合与抗性指标的关联分析 |
| 5.3.3.3 内含子区各突变位点的单倍型分析 |
| 5.3.3.4 内含子区单倍型组合与抗性指标的关联分析 |
| 5.3.3.5 3'端非编码区各突变位点的单倍型分析 |
| 5.3.3.6 3'端非编码区单倍型组合与抗性指标的关联分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 IL-8基因全序列的SNPs与鸡球虫抗性指标的关系 |
| 5.4.2 连锁不平衡与单倍型分析 |
| 5.5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）鸡柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株分离与耐药机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一篇 文献综述 |
| 1 鸡球虫病简介 |
| 1.1 鸡球虫分类 |
| 1.2 鸡球虫生活史 |
| 2 鸡球虫病的防治 |
| 2.1 聚醚类离子载体抗生素 |
| 2.2 化学合成类药物 |
| 2.3 中草药及中药提取物 |
| 3 地克珠利简介 |
| 3.1 抗球虫效果 |
| 3.2 抗球虫机理 |
| 4 鸡球虫耐药性研究 |
| 4.1 鸡球虫耐药性产生的潜在机理 |
| 4.2 耐药性研究方法 |
| 5 研究意义及目的 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第一章 田间柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株分离 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 耐药性综合判定方法及标准 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 单卵囊纯化结果 |
| 2.2 动物试验各项指标检测结果 |
| 2.3 综合耐药性判定 |
| 3 讨论 |
| 第二章 南通地区E.tenella地克珠利耐药分离株耐药性分析 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 DIC对球虫体外孢子化的影响结果 |
| 2.2 同工酶电泳结果 |
| 2.3 随机引物扩增多态性分析 |
| 3 讨论 |
| 第三章 NT5耐药分离株耐药性产生的分子机制初探 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 各组盲肠组织病理切片 |
| 2.2 各组二代裂殖子数量比较 |
| 2.3 不同发育时期GAPDH与LDH基因mRNA表达 |
| 2.4 GAPDH基因测序对比 |
| 3 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（6）柔嫩艾美耳球虫免疫增强剂筛选与早熟株相关基因研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鸡球虫病 |
| 1.1.1 鸡球虫病原 |
| 1.1.2 鸡球虫病的防治 |
| 1.2 鸡球虫疫苗研究进展 |
| 1.2.1 活疫苗 |
| 1.2.2 DNA疫苗 |
| 1.2.3 亚单位疫苗 |
| 1.2.4 活载体疫苗 |
| 1.3 禽用免疫增强剂研究进展 |
| 1.3.1 微生态制剂类免疫增强剂 |
| 1.3.2 生物制剂类免疫增强剂 |
| 1.3.3 中草药及多糖类免疫增强剂 |
| 1.3.4 化学合成小分子类免疫增强剂 |
| 1.4 展望 |
| 第二章 五种免疫增强剂对柔嫩艾美耳球虫免疫增强效果的评价——笼养试验 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验虫株 |
| 2.2.3 实验试剂和仪器 |
| 2.2.4 柔嫩艾美耳球虫免疫用和攻毒用卵囊制备 |
| 2.2.5 免疫增强剂的配制 |
| 2.2.6 实验动物分组 |
| 2.2.7 免疫攻虫程序 |
| 2.2.8 主要观察指标 |
| 2.2.9 数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 免疫期间动物体重变化 |
| 2.3.2 免疫增强剂对攻虫后免疫效果的影响 |
| 2.3.3 血清抗体水平检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 五种免疫增强剂对柔嫩艾美耳球虫的免疫增强研究——平养试验 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验虫株 |
| 3.2.3 实验试剂和仪器 |
| 3.2.4 柔嫩艾美耳球虫免疫用和攻毒用卵囊制备 |
| 3.2.5 免疫增强剂的制备 |
| 3.2.6 实验动物分组 |
| 3.2.7 免疫攻虫程序 |
| 3.2.8 主要观测指标 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 免疫增强剂对免疫期间动物体重变化 |
| 3.3.2 免疫增强剂对攻虫后免疫效果的影响 |
| 3.3.3 免疫增强剂对鸡群抗体和细胞因子水平的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株孢子化卵囊的转录组分析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验虫株 |
| 4.2.3 实验试剂和仪器 |
| 4.2.4 继续对柔嫩艾美耳球虫早熟株进行早熟选育 |
| 4.2.5 柔嫩艾美耳球虫母株卵囊的收集和纯化 |
| 4.2.6 柔嫩艾美耳球虫早熟株卵囊的繁殖和纯化 |
| 4.2.7 柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株孢子化卵囊的转录组测序 |
| 4.2.8 荧光定量PCR验证转录组差异表达基因 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 继续对柔嫩艾美耳球虫早熟株的早熟选育结果 |
| 4.3.2 早熟株与母株转录组测序结果 |
| 4.3.3 差异基因的筛选 |
| 4.3.4 差异基因功能分类 |
| 4.3.5 转录组差异表达基因的荧光定量验证结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2和3特性与功能初步分析 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 实验虫株和细胞 |
| 5.2.2 实验试剂和仪器 |
| 5.2.3 柔嫩艾美耳球虫四个阶段虫体的纯化以及cDNA制备 |
| 5.2.4 EtRON2和EtRON3 转录水平分析 |
| 5.2.5 DF-1细胞的传代培养 |
| 5.2.6 EtRON2和EtRON3 在不同发育阶段虫体中的分布 |
| 5.2.7 EtRON2和EtRON3 多抗对子孢子入侵DF-1 细胞的影响 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 EtRON2和EtRON3 在早熟株和母株孢子化卵囊的转录水平差异 |
| 5.3.2 EtRON2和EtRON3 在不同发育阶段中转录水平的差异 |
| 5.3.3 EtRON2和EtRON3 在虫体不同发育阶段的分布情况 |
| 5.3.4 EtRON2和EtRON3 多抗对子孢子入侵DF-1 细胞的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（7）复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡生产性能和免疫功能的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词(Abbreviation) |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 鸡球虫病概述 |
| 1.1 鸡球虫病的分类 |
| 1.2 临床症状 |
| 1.3 病理变化 |
| 1.4 药物防治 |
| 2 酸化剂 |
| 2.1 酸化剂的概述 |
| 2.2 酸化剂的分类 |
| 2.3 酸化剂的作用机理 |
| 3 柴胡 |
| 3.1 柴胡及其提取物的研究进展 |
| 3.2 柴胡的作用 |
| 4 酸化剂和柴胡提取物在抗球虫上的应用 |
| 第二章 本研究存在的问题、目的、意义和技术路线 |
| 1 存在的问题、试验目的及意义 |
| 1.1 存在的问题 |
| 1.2 研究目的和意义 |
| 2 技术路线 |
| 第三章 试验一复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡生产性能和免疫功能的影响 |
| 1 试验目的 |
| 2 试验材料和方法 |
| 2.1 试验处理与安排 |
| 2.2 动物和饲粮 |
| 2.3 饲养管理 |
| 2.4 样品采集 |
| 2.5 指标测定 |
| 2.6 数据统计与分析 |
| 3 试验结果与分析 |
| 3.1 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡生产性能的影响 |
| 3.2 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡屠宰性能的影响 |
| 3.3 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡胃肠道pH的影响 |
| 3.4 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡免疫器官指数的影响 |
| 3.5 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡血清生化指标的影响 |
| 3.6 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡血清免疫指标的影响 |
| 3.7 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡空肠紧密连接基因相对表达量的影响 |
| 3.8 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡脾脏炎性因子基因相对表达量的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡生产性能的影响 |
| 4.2 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡血清生化指标的影响 |
| 4.3 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡屠体性能和肠道pH的影响 |
| 4.4 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡免疫功能的影响 |
| 4.5 复合酸化剂对球虫疫苗攻毒肉鸡肠道健康的影响 |
| 5 小结 |
| 第四章 试验二复合酸化剂及其与柴胡提取物联用对堆型艾美耳球虫攻毒肉鸡生产性能和肠道健康的影响 |
| 1 试验目的 |
| 2 试验材料和方法 |
| 2.1 试验处理与安排 |
| 2.2 试验动物与饲粮 |
| 2.3 饲养管理 |
| 2.4 球虫攻毒处理 |
| 2.5 样品采集与制备 |
| 2.6 指标测定 |
| 2.7 数据统计与分析 |
| 3 试验结果与分析 |
| 3.1 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡生产性能的影响 |
| 3.2 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡抗球虫效果的影响 |
| 3.3 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡血清生化指标的影响 |
| 3.4 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡全血血常规的影响 |
| 3.5 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡血清淋巴细胞的影响 |
| 3.6 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡血清免疫指标的影响 |
| 3.7 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡免疫器官指数的影响 |
| 3.8 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡十二指肠形态的影响 |
| 3.9 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡十二指肠粘膜紧密连接基因相对表达量的影响 |
| 3.10 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡脾脏炎性因子基因相对表达量的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡生产性能的影响 |
| 4.2 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡血清生化指标的影响 |
| 4.3 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡免疫功能的影响 |
| 4.4 复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡十二指肠肠道健康的影响 |
| 5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（8）集约化养殖模式下鸡球虫病的防控（论文提纲范文）
| 1 鸡球虫 |
| 2 鸡球虫病 |
| 2.1 流行病学 |
| 2.2 致病性 |
| 2.3 诊断 |
| 3 鸡球虫病的药物防控 |
| 3.1 抗球虫药物种类 |
| 3.2 药物使用注意事项 |
| 4 鸡球虫病的疫苗防控 |
| 4.1 疫苗种类 |
| 4.2 疫苗免疫注意事项 |
| 5 鸡球虫病的综合防控措施 |
| 5.1 药物和疫苗联用或交替使用 |
| 5.2 科学的饲养管理模式 |
| 6 展望 |
（9）槟榔提取物对鸡球虫病的防治效果及机制初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 槟榔分布现状 |
| 1.3 槟榔的成分 |
| 1.3.1 生物碱 |
| 1.3.2 黄酮类化合物 |
| 1.3.3 丹宁 |
| 1.3.4 多萜类和类固醇 |
| 1.3.5 脂肪酸 |
| 1.3.6 其它化合物 |
| 1.4 驱虫作用 |
| 1.4.1 槟榔对绦虫作用 |
| 1.4.2 槟榔对血吸虫和钉螺的作用 |
| 1.4.3 槟榔对蛔虫作用 |
| 1.4.4 槟榔对钩虫的作用 |
| 1.4.5 槟榔对其它寄生虫类的作用 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 1.6 技术路线 |
| 第二章 建立文昌鸡球虫病模型 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试验动物 |
| 2.2.2 球虫卵囊 |
| 2.2.3 动物分组及处理 |
| 2.2.4 试验日粮与饲养管理 |
| 2.2.5 检测指标 |
| 2.2.6 检测指标 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 生长性能 |
| 2.3.2 血便记分 |
| 2.3.3 抗球虫指数 |
| 2.3.4 粪便卵囊值 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 槟榔提取物对球虫卵囊孢子化的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要仪器 |
| 3.2.2 槟榔采集与活性物质的提取 |
| 3.2.3 提取物中槟榔碱的检测 |
| 3.2.4 溶液配制 |
| 3.2.5 试验动物、日粮与饲料管理 |
| 3.2.6 球虫卵囊扩繁 |
| 3.2.7 体外试验设计 |
| 3.2.8 数据处理 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 槟榔提取物对球虫感染鸡的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验主要仪器 |
| 4.1.3 试验设计 |
| 4.1.4 样品采集与处理 |
| 4.1.5 指标检测 |
| 4.1.6 数据处理 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 槟榔提取物对鸡球虫的效果 |
| 4.2.2 槟榔提取物对球虫感染鸡盲肠组织结构的影响 |
| 4.2.3 槟榔提取物对球虫感染鸡血液的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 槟榔提取物对鸡球虫的效果 |
| 4.3.2 槟榔提取物对球虫感染鸡盲肠组织结构的影响 |
| 4.3.3 槟榔提取物对球虫感染鸡血液的影响 |
| 4.4 结论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读硕士期间的发表论文 |
| 致谢 |
（10）新型球虫消毒剂“球速灭”的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略符号 |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 鸡球虫病概述 |
| 2 鸡球虫病的防治 |
| 3 球虫消毒剂在鸡球虫病防治中的应用 |
| 参考文献 |
| 第二章 球速灭(Oo-stat)的配方优化试验 |
| 中文摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 第三章 温度对球速灭抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响 |
| 中文摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 第四章 球速灭抑杀鸡球虫孢子化卵囊作用研究 |
| 中文摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 第五章 有机物对球速灭抑杀鸡球虫卵囊的影响 |
| 中文摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 第六章 球速灭抑杀鸡球虫卵囊的模拟现场试验 |
| 中文摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 第七章 球速灭预防鸡球虫病的田间试验 |
| 中文摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
四、日粮及饲养方式调控鸡球虫病的研究进展（论文参考文献）
- [1]饲料禁抗背景下鸡球虫病和坏死性肠炎的综合防控[J]. 范雪梅,林瑞庆,翁亚彪,刘红. 养禽与禽病防治, 2020(10)
- [2]多肽提取物对鸡抗氧化、调节免疫及抗球虫感染的研究[D]. 刘丹. 北京农学院, 2020(02)
- [3]堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究[D]. 华恩玉. 扬州大学, 2020
- [4]白介素8基因多态性及与京海黄鸡球虫病抗性指标的相关分析[D]. 王晓慧. 扬州大学, 2020
- [5]鸡柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株分离与耐药机制研究[D]. 黄杰. 扬州大学, 2020(04)
- [6]柔嫩艾美耳球虫免疫增强剂筛选与早熟株相关基因研究[D]. 余水兰. 中国农业科学院, 2020
- [7]复合酸化剂和柴胡提取物对球虫攻毒肉鸡生产性能和免疫功能的影响[D]. 谢涛. 四川农业大学, 2019
- [8]集约化养殖模式下鸡球虫病的防控[J]. 汤新明,索勋,刘贤勇. 寄生虫与医学昆虫学报, 2018(04)
- [9]槟榔提取物对鸡球虫病的防治效果及机制初步研究[D]. 李韦. 海南大学, 2016(04)
- [10]新型球虫消毒剂“球速灭”的初步研究[D]. 季辉. 南京农业大学, 2009(04)