一、三氧化二砷诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其部分机制探讨（论文文献综述）
楚毓博[1]（2021）在《巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素及其配伍对胃癌微环境中免疫细胞调控作用研究》文中研究指明目的:胃癌（Gastric Cancer,GC）是世界范围内发病率和致死率较高的癌症之一,多数患者发现时已是中晚期,预后差,且手术、放化疗等治疗手段存在肿瘤复发转移、毒副作用明显等问题,因此亟需寻找更好的治疗手段。近年来,肿瘤免疫疗法在临床上已取得极大的进展,通过调节免疫来抗肿瘤,为胃癌的治疗带来巨大的创新,而胃癌微环境中的免疫细胞是其中的研究热点之一。肿瘤相关巨噬细胞（Tumor Associated Macrophages,TAMs）和自然杀伤细胞（Natural killer,NK）是微环境中重要的免疫抑制细胞与免疫效应细胞,TAMs对NK细胞的增殖及功能有抑制作用,通过调控这两类细胞,解除免疫抑制状态,恢复免疫功能,对胃癌的治疗预后至关重要。基于此临床背景,本课题选择三物白散中的三种成分巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素及其配伍,探讨单体及配伍对TAMs是否具有调控作用,单体及配伍是否可通过调控TAMs,解除对NK细胞的免疫抑制,改善微环境免疫状态,促进胃癌的治疗,并进一步探讨其中涉及的机制。方法:（1）采用IL-4+IL-13+PMA+含5%血清的完全培养基方法,体外诱导THP-1细胞为TAMs细胞,并进行表型鉴定;（2）利用CCK8法筛选巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素对AGS细胞、TAMs细胞以及NK细胞的体外安全浓度范围;（3）利用流式细胞术及ELISA筛选巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素调控TAMs的效阈浓度范围以及最佳浓度与效阈下浓度;（4）设计正交试验,以巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素、空白作为四因素,以各单体效阈下浓度,1/2效阈下浓度,0作为三水平,进行正交配伍,并利用流式细胞术及ELISA筛选调控TAMs的最佳配伍组合;（5）在Transwell体系中,将TAMs接种于上室,AGS细胞与NK细胞混合培养于下室,模拟胃癌微环境,并进行药物干预;（6）乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测NK细胞的杀伤性;（7）ELISA检测培养上清中MMP9、sMICA、sMICB的含量;（8）流式细胞术定量检测细胞膜分子NKG2D、MICA/B的表达。结果:（1）THP-1诱导后,TAMs表型标志物CD206及分泌因子IL-10、TGFβ的表达较对照组显着上调（P<0.05）;（2）不同浓度单体作用于AGS细胞,并在TAMs与NK细胞验证后,细胞存活率在90%以上者的浓度范围为:巴豆苷:10-5,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L;桔梗皂苷 D:10-5,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L;贝母甲素:10-4,10-5,10-6,10-7,10-8mol/L;（3）在降低CD206的水平上,巴豆苷在10-5,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L,桔梗皂苷D在10-5,10-6,10-8mol/L,贝母甲素在10-4,10-5,10-6mol/L 时,具有显着差异（P<0.05）;在降低IL-10、TGFβ的水平上,巴豆苷在10-5,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L,桔梗皂苷D在10-5,10-6,10-7,10-8mol/L,贝母甲素在10-4,10-5,10-6,10-8mol/L 时,具有显着差异（P<0.05）;巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素调控TAMs的最佳浓度分别是10-5、10-5、10-4mol/L;效阈下浓度分别是10-10、10-9、10-7mol/L;（4）在降低CD206、IL-10、TGFβ水平方面,最佳配伍为10-10mol/L巴豆苷+10-9mol/L桔梗皂苷D+10-7mol/L贝母甲素,各因素对CD206、TGFβ的影响程度依次是巴豆苷>桔梗皂苷D>贝母甲素,对IL-10的影响程度依次是巴豆苷>贝母甲素>桔梗皂苷D;（5）在微环境中,配伍组可显着增强NK细胞杀伤性（P<0.05）,各单体组没有影响;（6）流式结果表明,与模型组相比,贝母甲素与配伍组在升高NKG2D水平上具有显着差异（P<0.05）,巴豆苷组与配伍组在降低MICA/B水平上具有显着差异（P<0.05）。（7）ELISA结果表明,配伍组的sMICA/B显着下降（P<0.05）,各组的MMP9指标虽没有显着性,但是均有下降趋势,而配伍组下降最明显。结论:（1）THP-1细胞在体外一定条件刺激下可成功诱导成为TAMs;（2）巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素及其配伍在一定浓度范围内可以调控TAMs的表型,降低CD206+TAMs细胞的比例,降低分泌因子IL-10、TGFβ的含量;（3）在微环境中,配伍组可以增强NK细胞杀伤活性,而各单体组对此没有影响;（4）配伍组可以调控微环境中的免疫状态与调控NKG2D/NKG2DL这条途径有关。
戴小军[2]（2020）在《运化毒邪方及其有效成分控制胃癌的研究》文中研究表明引言胃癌是严重危害人民健康及生命的消化道恶性肿瘤,胃癌发病率在全球范围恶性肿瘤中位居第4位,在我国发病率位居第2位,在江苏扬州恶性肿瘤死亡率中位居第1位。我国胃癌患者处于晚期居多,治疗效果较差,预后不佳,治疗手段以化疗为主。但是晚期胃癌患者身体一般情况差,加上化疗药物对消化道、骨髓功能、免疫系统、肝脏、肾脏等的毒副反应,患者化疗耐受性差,如何优化化疗的用药,是肿瘤临床医师重要工作。中药复方和化疗药物的联用,可以减毒增效,提高生活质量,延长生存期。依据胃癌患者运化功能差,对毒邪的转运、排泄、化灭等功能的不畅,运化毒邪方是多年来根据胃癌自身特点所自主创新研发的治疗胃癌的药方（由黄芪、人参、炒白术、炒苡仁、蛇舌草、莪术、龙葵、蒲公英、茯苓、炙甘草组成）。课题在构建中医肿瘤数据样本库、胃癌人源性癌组织移植瘤模型等关键技术的基础上,从临床、细胞、动物水平系统研究了运化毒邪方抗胃癌的作用,及从Claudin-4/VEGF-C/GSK3β信号网络调控初步研究运化毒邪方可能的抗胃癌作用机制。进一步分析了运化毒邪方化学成分,选取活性成分之一人参皂苷Rg3进行抗胃癌研究,并从剂型改造上（VEGFR-3抗体结合人参皂苷Rg3纳米乳剂）提高人参皂甙Rg3“运”的能力,提高“化”的作用,进一步完善运化思想治疗胃癌。本课题共分为六部分研究内容。第1章:从毒邪治疗胃癌理论架构1.1毒邪理论治疗肿瘤源流及辨治要法从毒邪论治是肿瘤治疗的核心问题之一,本文系统梳理了从毒邪理论治疗肿瘤的源流:秦汉时期是毒邪学说论治肿瘤的萌芽期,晋隋唐宋时期大致构建了毒邪学说的框架,即毒邪的分类、内涵、病因病机特点。明清时期进一步认识到外感疫毒这一因素,现代以来多位医家提出“癌毒”这一概念。恶性肿瘤的治疗应在扶正祛邪的总体治疗原则下,特别重视毒邪这一重要病理因素,根据毒邪在恶性肿瘤发生发展过程中的证素、证候特征,病机规律等,阐述了扶正祛毒、清热解毒、理气排毒、祛瘀化毒、化痰散毒、祛风摄毒、泄浊解毒、安邪休毒、灭虫化毒、以毒攻毒等十种抗肿瘤的辨治法则,同时结合现代科学研究成果,逐步完善从毒邪论治恶性肿瘤的理论体系的框架结构。1.2基于“脾主运化”理论论治胃癌基于经典中医理论及医学科学不断发展,胃癌与“脾主运化”理论存在密切的联系。从脾主运化的理论渊源,脾失运化、毒邪侵犯的胃癌病机,从脾主运化论治胃癌方略等角度进行探讨,以期提高诊治胃癌疗效、改善胃癌预后。第2章 运化毒邪方对进展期胃癌复发转移干预的临床研究目的:探讨运化毒邪方干预进展期胃癌患者的临床疗效,观察运化毒邪方干预治疗对胃癌患者血清代谢物及代谢通路的影响。方法:以中医肿瘤网页版信息数据库为依托,对中医肿瘤病人信息进行结构化设计,整合患者基本信息、中医临床信息等相关信息,实现在线查询统计功能。选取2016年2月-2019年3月扬州市中医院收治的98例晚期胃癌患者为研究对象。采用同期对照、非随机临床研究方法,将符合标准病例纳入中药组和化疗组,每组各49例。对照组采用奥沙利铂、替吉奥方案,中药组在对照组的基础上口服运化毒邪方。16例患者血清样本进行衍生化处理,在气相色谱-飞行时间质谱（GC-TOFMS）检测器分析。结果:经中医药、化疗治疗4个疗程后评价,治疗后化疗组PR为19例,SD为17例,临床有效率为38.77%,疾病控制率为73.47%;中药组PR为24例,SD为21例,临床有效率为48.98%,疾病控制率为91.84%,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后中药组KPS、ECOG评分显着升高,CEA、CA199、CA724水平均显着降低,两组治疗前后比较差异具有统计学意义（P<0.05）;中药组肝肾功能损伤、胃肠道反应、骨髓抑制的不良反应发生情况均低于对照组,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）;化疗组患者的一年生存率明显低于中药组,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）;中医药干预、年龄、体重、TNM分期、卡氏评分、手术方式等因素与进展期胃癌的无进展生存期相关,中药治疗、手术方式、体重为影响进展期胃癌的生存期的独立性相关因素。运化毒邪方干预胃癌治疗,主要涉及半乳糖代谢通路、支链氨基酸代谢通路,干预L-异亮氨酸、L-丝氨酸、L-亮氨酸、D-半乳糖、蔗糖、3-甲基-2-氧代戊酸的代谢结论:运化毒邪方治疗可以延长进展期胃癌患者生存期、提高生活质量、减轻“奥沙利铂、替吉奥”方案化疗毒副反应,是进展期胃癌预后的独立保护性因素,对胃癌患者血清代谢组学影响主要涉及半乳糖代谢通路、支链氨基酸代谢通路。第3章:运化毒邪方对胃癌生长及介导Claudin-4调控上皮间质转化信号通路的作用目的:探讨运化毒邪方对胃癌细胞及胃癌人源肿瘤异种移植瘤生长及相关蛋白和mRNA表达的影响。方法:MTT比色法检测对运化毒邪方人胃癌细胞增殖能力的影响,划痕实验检测细胞迁移,建立胃癌人源肿瘤异种移植（Patient-Derived tumor Xenograft,PDTX）模型,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 GSK3β、VEGF-C、Claudin-4 蛋白表达,qPCR 检测 GSK3β、VEGF-C、Claudin-4 mRNA 的表达。结果:运化毒邪方1、2、4、8、16、32 mg/mL处理24、48 h,细胞呈不同程度的生长抑制作用,并且有一定的浓度依赖性。与空白组比较,运化毒邪方3、6 mg/mL 干预 AGS、BGC-803、SGC-7901 细胞 24h 后,运化毒邪方 3、6mg/mL组划痕距离明显降低（P<0.05）。运化毒邪方高剂量组的平均肿瘤体积与阴性对照组相比较,有明显差异,并且统计学分析上有明显差异;运化毒邪方低剂量组和运化毒邪方中剂量组的平均肿瘤体积与阴性对照组相比较,有降低趋势,但统计学分析上没有明显差异。运化毒邪方高剂量组的平均肿瘤重量与阴性对照组相比较,有明显差异,并且统计学分析上有明显差异。运化毒邪方干预后AGS、BGC803、SGC7901细胞及肿瘤组织中GSK3β蛋白及mRNA的表达水平增加,VEGF-C、Claudin-4蛋白及mRNA的表达水平降低。结论:运化毒邪方可通过抑制上皮间质转化相关蛋白的表达水平和促进抑癌基因相关蛋白的表达水平来共同发挥抑制胃癌生长、侵袭力和转移力的作用。第4章:基于高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）联用技术的运化毒邪方化学成分研究目的:分析运化毒邪方的化学成分,探讨其发挥药效的化学成分。方法:按照运化毒邪方处方中草药比例制备水煎液,采用HPLC-MS联用技术鉴定水煎液中的化学成分。结果:运化毒邪方水煎液在正负离子模式下共检测到1 12种化学活性成分,其中质谱响应强度大于50000的活性成分共有59种,按质谱响应强度排序依次为:甘草苷、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷、芒柄花苷、甘草酸、7-羟基-4’-甲氧基异黄酮、4’,7-二羟基黄酮、2’,4,4’-三羟基查耳酮、甘草素、异甘草素、甘草醇、毛蕊异黄酮、（3R）-2’,3’-二羟基-7,4’-二甲氧基异黄酮、汉黄芩素、樱黄素、芫花素、芒柄花素、人参黄酮忒、芸香苷、绿原酸、人参皂苷Ro、对-香豆酸、人参皂苷Rg7、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、珠子参甙F2、珠子参甙F4、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷、异槲皮苷、东茛菪素、东莨菪内酯、人参皂苷Rg3、人参皂苷F2、人参皂苷Rg2、穿心莲内酯、α-檀香醇、木犀草素、蒙花忒、姜黄素、甘草香豆素、咖啡酸、三叶豆甙、人参皂苷R2、人参皂苷F3、竹节皂苷L8、半甘草异黄酮B、柚皮苷、人参皂苷Rb1、白术内酯、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、绞股蓝皂苷ⅩⅦ、棕榈酸、十六酸、茯苓新酸G、24-羟基甘草次酸甲酯、人参皂苷Rh4、人参皂苷Rk3、甘草次酸。经液相测试,样品中人参皂苷Rg3的含量为 3.67ppm。结论:运化毒邪方含有人参皂苷Rg3等皂苷类31种,黄酮类也有三十多种。第5章:运化毒邪方主要活性成分之一人参皂苷Rg3对胃癌生长及Claudin-4/VEGF-C/GSK3β 通路调控作用目的:运化毒邪方主要组成药物之一即为人参,人参皂苷Rg3是中药材人参的主要活性成分之一,探讨人参皂苷Rg3抗胃肿瘤作用及可能机制。方法:MTT比色法检测对人胃癌细胞（AGS、BGC-803、SGC-7901）增殖能力的影响,划痕实验检测细胞迁移,建立胃癌人源肿瘤异种移植模型,Western blot、qPCR 检测 Claudin-4/VEGF-C/GSK3β通路蛋白及 mRNA 的表达。结果:人参皂苷Rg3 1、2、4、8、16、32mg/L处理胃癌细胞24、48h,细胞呈不同程度的生长抑制作用。人参皂苷Rg3给药24 h后,对SGC-7901、AGS、BGC-803细胞的生长呈明显抑制作用,24h IC50值依次分别为12.48、31.53、13.05mg/mL。4、8mg/L 的人参皂苷 Rg3 干预 BGC-803、AGS、SGC-7901 细胞 24 h后,划痕距离明显降低。应用人参皂苷Rg3高剂量组（20mg/kg）的平均肿瘤重量与阴性对照组相比较,有明显差异,并且统计学分析上有明显差异。与对照组比较,AGS、BGC-803、SGC-7901细胞经过人参皂苷Rg3 4、8mg/L作用24 h后,荷瘤裸鼠人参皂苷Rg3低、高剂量（10mg/kg、20mg/kg）,随着药物质量浓度的增加,AGS、BGC803、SGC7901细胞及肿瘤组织中GSK3β蛋白及mRNA的表达水平增加,VEGF-C、Claudin-4蛋白及mRNA的表达水平降低。结论:运化毒邪方中有效成分之一人参皂苷Rg3的有抗胃癌作用及对Claudin-4/VEGF-C/GSK3β信号通路有一定调节作用。特别是人参皂苷Rg3对胃癌人源动物模型有抗肿瘤作用,进一步证实人参皂苷Rg3对人体胃癌抑制作用的可靠性。第6章:VEGFR3靶向性纳米人参皂甙Rg3对原位胃癌小鼠移植瘤的影响目的:本研究的目的是研究VEGFR3靶向性纳米人参皂甙Rg3（VEGFR3-mediatedimmune-nanoemulsion of ginsenoside Rg3,VRIN）对原位胃癌小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用。方法:建立了裸鼠原位胃癌模型用红色荧光蛋白（RFP）表达人胃癌细胞系NUGC-4-RFP。用溶媒处理荷瘤小鼠（0.2ml生理盐水,每隔一天,静脉注射）,5-FU（20mg/kg,每周一次,静脉注射）和VRIN（每隔一天1 mg/kg,静脉注射）。实时荧光对各组进行影像学检查以评估肿瘤抑制情况。用开放式荧光成像技术评估转移情况。采用免疫组化和实时RCP法检测肿瘤组织中VEGF-C、VEDF-D和VEGFR-3的表达。结果:VRIN和5-FU显着抑制原发性肿瘤的生长（p<0.05）。然而,显着抑制淋巴结转移仅见于VRIN治疗组（p<0.05）。与生理盐水组对比,VRIN治疗可抑制肿瘤中 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3 的表达（p<0.05）;VEGF-D 和VEGFR-3在5-FU组表达无显着性差异（p>0.05）。VRIN组和5-FU组均无明显毒性。结论:VEGFR3靶向性纳米人参皂甙Rg3能抑制胃癌生长,通过抑制VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3的表达降低淋巴转移。研究显示了中医药可有效靶向治疗转移性胃癌。
原伟伟,黄晋熙,李高峰,陈小兵[3]（2020）在《As2O3对胃癌侵袭转移及血管形成的抑制作用及作用机制探讨》文中进行了进一步梳理目的探讨三氧化二砷（As2O3）对胃癌侵袭转移及血管形成的抑制作用及作用机制。方法购置人胃癌细胞系SGC-7901细胞作为研究对象,随机将细胞放置在2个试管中,标记为对照组和As2O3组。对照组不给予药物处理,观察组给予As2O3进行处理干预,两组均完成72 h培养。采用MTT比色法测定两种细胞增殖活力;采用Transwell小室实验测定两种细胞侵袭迁移能力;采用免疫细胞化学法测定两种细胞微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）表达,比较两种细胞侵袭转移及血管形成。结果两种细胞0 h细胞增殖能力比较差异未见统计学意义（P>0.05）;As2O3组人胃癌细胞系SGC-7901细胞1 、2、3、4 d细胞增殖能力均低于对照组（P均<0.05）;As2O3组人胃癌细胞系SGC-7901细胞迁移数量为（9.48±0.73）,少于对照组的（15.94±2.14）,差异有统计学意义（P<0.05）;As2O3组人胃癌细胞系SGC-7901细胞MVD阳性计数及VEGF蛋白平均光密度均低于对照组（P均<0.05）;免疫组化结果:对照组细胞MVD及VEGF阳性着色均为棕黄色,MVD表达阳性多位于细胞边缘部位且分布弥散;VEGF表达于胞浆/包膜;而As2O3组表达量降低。结论 As2O3用于胃癌细胞中能发挥良好作用,可抑制胃癌细胞侵袭转移,抑制肿瘤血管形成,能为胃癌治疗提供新的思路和方法。
赵丽凤[4]（2020）在《三氧化二砷联合双氢青蒿素抗急性单核细胞白血病的实验研究》文中认为目的以人急性单核细胞白血病细胞株THP-1细胞和SHI-1细胞为研究对象,考察三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病细胞株增殖抑制、周期分布、凋亡情况的影响,并探讨其作用机制。通过建立急性单核细胞白血病动物模型,考察三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病的治疗作用。方法1.MTT法检测三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞的增殖抑制作用采用MTT法检测不同浓度的三氧化二砷、双氢青蒿素、三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞增殖的影响,计算其增殖抑制率,并计算三氧化二砷、双氢青蒿素的半数抑制浓度。2.流式细胞仪检测三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞周期分布及凋亡的影响THP-1细胞给予三氧化二砷、双氢青蒿素、三氧化二砷联合双氢青蒿素作用48 h后,应用流式细胞仪检测细胞增殖周期分布及凋亡的情况。3.Western Boltting检测三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞相关凋亡蛋白表达的影响THP-1细胞给予三氧化二砷、双氢青蒿素、三氧化二砷联合双氢青蒿素作用48h后,采用 Western Boltting 检测 Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9六种凋亡相关蛋白的表达情况。4.MTT法检测三氧化二砷和双氢青蒿素对SHI-1细胞的增殖抑制作用采用MTT法检测不同浓度的三氧化二砷、双氢青蒿素、三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞增殖的影响,计算其增殖抑制率,并计算三氧化二砷、双氢青蒿素的半数抑制浓度。5.流式细胞仪检测三氧化二砷和双氢青蒿素对SHI-1细胞凋亡的影响SHI-1细胞给予三氧化二砷、双氢青蒿素、三氧化二砷联合双氢青蒿素作用48 h后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。6.急性单核细胞白血病模型的建立BALB/c裸鼠,雌性,SPF级,4-5周龄,19只,检疫适应三天,分为五组:对照组、皮下注射THP-1细胞组、腹腔注射THP-1细胞组、皮下注射SHI-1细胞组、腹腔注射THP-1细胞组。观察急性单核细胞白血病细胞在裸鼠体内的生长情况。取裸鼠体内的急性单核细胞白血病细胞皮下注射到裸鼠体内,观察其增殖情况。7.基于裸鼠肿瘤模型考察三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病的治疗作用建模:BALB/c裸鼠皮下注射SHI-1细胞建模。分组:将建模后裸鼠按肿瘤大小随机分为十组,分别是:对照组、模型组、ATO低组、ATO高组、DHA低组、DHA高组、ATO低+DHA低组、ATO低+DHA高组、ATO高+DHA低组、ATO高+DHA高组。给药14天。观察裸鼠状态、测量肿瘤大小、检测脏器病理变化。结果1.三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞的增殖抑制作用不同浓度的三氧化二砷、双氢青蒿素单用对THP-1细胞的增殖有明显的抑制作用（P<0.001）,且呈剂量-时间依赖性,三氧化二砷联合双氢青蒿素较三氧化二砷、双氢青蒿素单用后效果更加显着（P<0.001）。2.三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞周期分布及凋亡的影响与对照组相比,各给药组细胞G2和S期细胞明显减少,G1期细胞比例增加（P<0.001）,三氧化二砷联合双氢青蒿素组变化最大。与对照组相比,各给药组细胞凋亡比例均增加,三氧化二砷联合双氢青蒿素组凋亡比例较对照组提高了 71.4%,显着高于三氧化二砷组、双氢青蒿素组（P<0.001）。3.三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞相关凋亡蛋白表达的影响与对照组相比,同时将三氧化二砷联合双氢青蒿素组与三氧化二砷组、双氢青蒿素组比较,Bcl-2（P<0.05）、Caspase-3（P<0.001）、Caspase-8（P<0.001）表达量明显下调,Cleaved Caspase-3（P<0.05）表达量显着上调,Bax、Caspase-9表达量无明显变化。4.三氧化二砷和双氢青蒿素对SHI-1细胞的增殖抑制作用不同浓度的三氧化二砷、双氢青蒿素对SHI-1细胞增殖均有抑制作用,与对照组相比,随着药物浓度的增加,药物对SHI-1细胞的增殖抑制率升高（P<0.05）,且成浓度-时间依懒性。然而,分别用1、2、3μM的三氧化二砷联合不同浓度的双氢青蒿素,与同浓度的双氢青蒿素相比,抑制率并无明显变化（P<0.05）。5.三氧化二砷和双氢青蒿素对SHI-1细胞凋亡的影响与对照组相比,随着三氧化二砷浓度的增加,SHI-1细胞凋亡比例明显增加;随着双氢青蒿素浓度的增加,SHI-1细胞凋亡比例有增加趋势,但变化并不显着。与相同浓度的三氧化二砷或双氢青蒿素相比,三氧化二砷联合双氢青蒿素没有使SHI-1细胞凋亡比例增加。6.急性单核细胞白血病肿瘤模型的建立体外培养的SHI-1细胞和THP-1细胞腹腔注射到裸鼠体内均未有明显变化。体外培养的THP-1细胞皮下注射裸鼠右侧肩胛骨处可建立急性单核细胞白血病裸鼠肿瘤模型,成模率为25%。体外培养的SHI-1细胞皮下注射到裸鼠右侧肩胛骨处,可100%长出肿瘤,成功建立急性单核细胞白血病裸鼠肿瘤模型。7.基于裸鼠肿瘤模型考察三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病的治疗作用与模型组,给药后7天,给药各组肿瘤体积增加均明显减小,其中ATO低+DHA低组减小最为明显,平均增加6.06 mm3。给药7至13天期间,肿瘤体积较前7天均明显增加,但ATO低+DHA低组增加值（120.25 mm3）较模型组（292.65 mm3）最低。给药14天后,与模型组相比,ATO低+DHA低组、ATO高+DHA低组、ATO高+DHA高组平均瘤重均明显降低,其中,ATO低+DHA低组降低最为显着,抑瘤率为46.47%。结论1.三氧化二砷和双氢青蒿素单用均能抑制THP-1细胞的增殖并成浓度-时间依赖性,且联合应用较各自单用抑制效果更加明显。2.阻滞细胞增殖周期及诱导细胞凋亡是三氧化二砷联合双氢青蒿素抑制THP-1细胞增殖的可能作用机制之一。3.三氧化二砷联合双氢青蒿素可能通过激活Caspase-3、下调Bcl-2和Caspase-8表达量诱导THP-1细胞凋亡。4.三氧化二砷和双氢青蒿素能够抑制SHI-1细胞的增殖并成浓度-时间依赖性,二者联用无协同作用。5.三氧化二砷可能通过诱导细胞凋亡抑制SHI-1细胞增殖;双氢青蒿素抑制SHI-1细胞不通过诱导细胞凋亡。6.体外培养的SHI-1细胞皮下注射到裸鼠右侧肩胛骨处可100%建立急性单核细胞白血病裸鼠肿瘤模型。7.2 mg/kg ATO与50 mg/kg DHA联合应用能够显着抑制急性单核细胞白血病裸鼠肿瘤模型肿瘤的生长,抑瘤率为46.47%。
王海霞[5]（2019）在《γ-生育三烯酚通过调节人胃癌细胞能量代谢抑制细胞增殖作用研究》文中研究表明研究目的:探讨γ-生育三烯酚（γ-tocotrienol,γ-T3）通过调节人胃癌细胞能量代谢抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡作用机制研究。研究方法:1.用不同浓度（0、15、30、45、60和80μmol/L）的γ-T3及α-生育酚（α-TOC）作用SGC-7901和MGC-803细胞24h、48h后,采用CCK8法检测细胞增殖能力的变化。2.用30μmol/L的γ-T3作用SGC-7901和MGC-803细胞0、12、24h后,采用FCM法检测细胞凋亡情况。3.用30μmol/L的γ-T3作用SGC-7901和MGC-803细胞0、12、24h后,采用JC-1荧光探针法检测细胞的线粒体膜电位（Δψm）变化情况;用0、20、30μmol/L的γ-T3作用SGC-7901和MGC-803细胞0、4h后,采用线粒体压力检测试剂盒,检测细胞的氧耗率（oxygen consumption rate-OCR）水平;用30μmol/L的γ-T3作用SGC-7901和MGC-803细胞0、12、24h后,采用DCFH-DA荧光探针法,检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,同时采用CCK8法检测活性氧去除剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对γ-T3处理过的细胞的增殖能力的影响。4.用30μmol/L的γ-T3作用SGC-7901和MGC-803细胞0、4、24h后,采用免疫印迹技术分别检测NDUFB8（复合体I的亚基）、SDHB（复合体II的亚基）、UQCRC2（复合体III的亚基）、COX4I1（复合体IV的亚基）和ATP5F1A（复合体V的亚基）的蛋白表达水平。5.用0、20、30μmol/L的γ-T3作用SGC-7901和MGC-803细胞0、4h后,采用糖酵解速率检测试剂盒,检测细胞的细胞外酸化率（extracellular acidification rate-ECAR）。6.用30μmol/L的γ-T3作用SGC-7901和MGC-803细胞0、4h后,采用ATP速率检测试剂盒及ATP检测试剂盒,检测细胞内ATP速率的变化及总ATP水平的变化。研究结果:1.CCK-8结果显示,随γ-T3作用浓度的增加,SGC-7901和MGC-803两种细胞的增殖抑制率均增高（p<0.05,p<0.01,p<0.001）;随α-TOC作用浓度的增加,SGC-7901和MGC-803两种细胞的增殖抑制率没有明显改变（p?0.05）。2.凋亡实验结果发现,随γ-T3作用时间的延长,SGC-7901和MGC-803两种细胞的凋亡率均增高（p<0.01,p<0.001）。3.线粒体膜电位结果显示,随γ-T3作用时间的延长,SGC-7901和MGC-803两种细胞的线粒体膜电位水平均降低（p<0.05,p<0.01）。OCR结果显示,随γ-T3作用浓度的增加,人胃腺癌SGC-7901和MGC-803细胞的OCR水平均降低（p<0.05,p<0.01）。活性氧检测结果显示,随γ-T3作用时间的延长,人胃腺癌SGC-7901和MGC-803细胞中的活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平均升高。同时,CCK8结果显示NAC可以显着降低γ-T3对细胞的抑制率（p<0.05,p<0.01）。4.免疫印迹技术结果显示,γ-T3可以明显降低NDUFB8、SDHB的蛋白水平,而对UQCRC2、COX4I1、和ATP5F1A没有影响（p<0.05,p<0.01）。5.ECAR结果显示,随γ-T3作用浓度的增加,SGC-7901和MGC-803两种细胞的糖酵解速率均代偿性升高（p<0.01,p<0.001）。6.ATP检测结果显示,随γ-T3作用浓度的增加,SGC-7901和MGC-803两种细胞的ATP水平均降低（p<0.05）。研究结论:γ-T3具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与γ-T3抑制人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的NDUFB8与SDHB的蛋白水平,进而增加ROS的产生和降低ATP的水平有关。
张洪[6]（2018）在《芩黄合剂治疗非霍奇金淋巴瘤的临床评价及初步机制研究》文中提出背景恶性淋巴瘤的发病率呈快速增长趋势,已经成为最常见的十大恶性肿瘤之一。目前常规治疗方法存在免疫抑制等毒副作用及药物耐药的缺点。我们需要寻找不同于常规方法,更为安全、有效、经济的药物来预防和治疗恶性淋巴瘤并提高患者的预后和改善生活质量。前期研究发现中药小复方芩黄合剂联合常规治疗可以提高初发中高危DLBCL的近期疗效,更早取得完全缓解,减轻了化疗毒副反应。芩黄合剂的主要成分即为汉黄芩素等黄酮类化合物,当前大量研究表明多种黄酮类化合物可以通过诱导凋亡和自噬抑制肿瘤细胞。本研究主要从调节免疫和提高生活质量角度评价芩黄合剂对非霍奇金淋巴瘤的疗效;并从凋亡和自噬的角度探讨部分黄酮类化合物对淋巴瘤细胞的抑制作用与机制。目的1.观察芩黄合剂对非霍奇金淋巴瘤患者的生活质量及免疫功能的影响。2.探讨汉黄芩素、木犀草素、水飞蓟素对淋巴瘤细胞的抑制作用及机制。方法1.根据真实世界研究方法由患者自愿选择入组,收集本院2015年1月2016年12月治疗或随访的非霍奇金淋巴瘤患者,分为观察组和对照组,观察组患者在常规化疗或随访期间服用芩黄合剂。对照组患者在常规化疗和随访期间不服用芩黄合剂。观察期为6个月,全部患者到达研究终点后比较两组患者卡氏评分（Kanofsky score,KPS）、生活质量评分（EORTC-QLQ-C30）、外周血细胞免疫、体液免疫及免疫相关细胞因子水平。2.CCK-8检测汉黄芩素、木犀草素、水飞蓟素、山柰酚、槲皮素、染料木素、对淋巴瘤SUDHL-4细胞增殖的影响,测算IC50值。AnnexinV/PI双染法使用流式细胞术检测凋亡发生情况,荧光探针DCFH-DA结合流式细胞术进行活性氧检测,使用抗氧化剂NAC验证ROS的杀伤作用。Western blot检测cleaved caspase3、cleaved PARP、Cytochrome c、Bax、Bcl-2、LC3A、LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62等蛋白表达水平。结果1.共收集有效病例222例,观察组74例,其中20例处于化疗期,54例处于随访期;对照组148例,其中87例处于化疗期,61例处于随访期。治疗后观察组KPS评分好转率显着优于对照组（P<0.05）,生活质量（EORTC-QLQ-C30）评分中观察组治疗后疲乏、便秘、腹泻症状评分低于对照组（P<0.05）,躯体、情绪功能及总体健康状况评分高于对照组（P<0.05）。治疗后观察组外周血T淋巴细胞亚群CD3+水平、CD4+水平、CD4+/CD8+比值、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G,IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素2（Interleukin 2,IL-2）、补体C3水平高于对照组（P<0.05）,白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）、白细胞介素10（IL-10）水平低于对照组（P<0.05）。2.汉黄芩素、木犀草素、水飞蓟素均可以抑制SUDHL-4细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性。25、50、100μM的汉黄芩素、木犀草素可以诱导SUDHL-4细胞凋亡,汉黄芩素组凋亡率分别为（8.43±0.57%）、（17.90±1.40%）、（35.07±1.72%）,木犀草素组凋亡率分别为（15.93±0.82%）、（23.67±1.49%）、（24.20±1.82%）,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。25、50、100μM的水飞蓟素不能诱导SUDHL-4细胞凋亡,水飞蓟素组凋亡率分别为（3.89±0.62%）、（3.38±0.39%）、（3.49±0.64%）,与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。汉黄芩素可以诱导ROS（reactive oxygen species）累积,木犀草素没有诱导ROS累积的作用。汉黄芩素、木犀草素作用于SUDHL-4细胞均可上调cleaved PARP、cleaved caspase3、cleaved caspase8、cleaved caspase9、Cytochrome c、Bax的表达水平,下调Bcl-2的表达水平及Bcl-2/Bax的比值。水飞蓟素作用于SUDHL-4细胞可以上调Beclin-1的表达,下调SQSTM1/p62的表达及LC3A/LC3B的比值。结论1.芩黄合剂能有效地改善非霍奇金淋巴瘤患者的生活质量及免疫功能。2.汉黄芩素、木犀草素、水飞蓟素均可抑制SUDHL-4细胞增殖,汉黄芩素可以诱导SUDHL-4细胞内ROS积聚,汉黄芩素、木犀草素诱导SUDHL-4细胞凋亡,水飞蓟素诱导SUDHL-4细胞自噬。
唐鸿生[7]（2017）在《表没食子儿茶素没食子酸酯在逆转胃癌细胞耐药中的作用及机制研究》文中提出来源与背景:我国胃癌80%以上为进展期,化疗在进展期胃癌的综合诊治中具有重要地位,但进展期胃癌很容易对5-FU等化疗药物耐药,是肿瘤复发转移的重要原因。研究5-FU的耐药机制并寻找逆转耐药的方法很有必要。目的和意义:表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）具有明显的抗肿瘤和放化疗药物增敏作用,但其能否逆转胃癌耐药及分子机制仍不清楚。本研究旨在建立耐5-FU的胃癌细胞株SGC7901/5-FU,探讨EGCG在逆转SGC7901/5-FU耐药中的作用及可能分子机制,期待EGCG作为5-FU化疗增敏剂用于胃癌的临床辅助治疗。研究方法:大剂量冲击和浓度递增法建立5-FU耐药细胞株,MTT法和克隆形成实验检测药物处理后亲代细胞和耐药细胞的增殖活力,计算半数抑制浓度IC50值和耐药指数,Western blot检测SGC7901/5-FC(耐药相关蛋蛋;在此基础上,以EGCG为主要因素对SGC7901/5-FU分组进行处理,MTT和克隆形成实验检测处理后的细胞增殖活力,流式细胞仪检测凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白,ELISA、RT-PCR和Western blot检测耐药相关蛋白的表达,Western blot检测信号通路耐药相关蛋白的表达。另外,我们还建立了 SGC7901/5-FU的裸鼠移植瘤模型并以EGCG为主要因素分组处理,观察EGCG对SGC7901/5-FU裸鼠移植瘤的生长抑制情况,免疫组化检测各组移植瘤耐药相关蛋白MDR1和P-gp的表达,信号通路相关因子VEGF和p-TFAP2A的表达。所有实验均重复3次,数据以（?）±s表示,组间比较采用方差分析或t检验。研究内容和过程:耐药细胞株较亲代细胞株的IC50值明显升高,耐药指数RI为15.6,耐药相关蛋白ABCG2、P-GP、MDR-1和GST-π表达明显增加,不同5-FU浓度条件下,MTT法检测的耐药细胞株增殖活性均高于亲代细胞株（P<0.05）。5-FU+EGCG组较5-FU组耐药细胞株的IC50值显着降低,RI为0.12;5-FU+EGCG组耐药细胞株增值活性显着降低（P<0.05）;对照组、EGCG组、5-FU组和5-FU+EGCG组处理后的SGC7901/5-FU以流式细胞法检测细胞凋亡率分别为（3.0±1.0）%、（7.0±1.3）%、（6.0±1.2）%和（18.0±1.4）%,5-FU+EGCG组细胞凋亡率明显高于其他3组（F=129.5,P=0.0000）;Western blot显示EGCG处理后耐药细胞中耐药相关蛋白MDR-1、P-gp、VEGF和p-TFA2A表达明显下降,促凋亡蛋白Bax和凋亡标志蛋白PARP表达显着增高（P<0.05）,抗凋亡蛋白 Bc1-2 和 Survivin 表达显着降低（P<0.05）;RT-PCR 检测 MDR-1、P-gp 表达亦下降,ELISA检测EGCG处理后VEGF表达下降。动物实验证明EGCG能够显着抑制SGC7901/5-FU裸鼠移植瘤的生长,免疫组化显示5-FU+EGCG组MDR-1、P-gp、VEGF 和 p-TFAP2A 表达均下降（P<0.05）。主要结论:1、大剂量冲击和浓度递增法可建立耐药性能良好的5-FU耐药细胞株SGC7901/5-FU;2、可在裸鼠身上成功建立胃癌耐药细胞株SGC7901/5-FU移植瘤模型;3、EGCG能够逆转胃癌耐药细胞株SGC7901/5-FU的耐药性,其机制可能是通过以下途径来实现:1.抑制肿瘤耐药相关蛋白MDR-1和P-gp的表达;2.促进凋亡标志蛋白PARP和促凋亡蛋白Bax的表达,抑制抗凋亡蛋白Survivin和Bc1-2的表达,从而上调了 PARP/Survivin和Bax/Bc1-2蛋白表达比值；3.抑制VEGF的表达,下调TFAP2A/VEGF信号传导通路。
王志新,邹玺,胡守友[8]（2016）在《中药抗胃癌的现代药理机制》文中认为化疗作为肿瘤的主要治疗手段,虽然在近些年对于胃癌的治疗做出了巨大的贡献,但由于其毒副反应明显,且易形成耐药性,故而其在临床上的应用也受到了很大的限制,而中药的抗肿瘤优势却愈加明显。本文整理、总结近几年来中药抗胃癌的文献,从分子生物层面对中药抗胃癌的机制进行综述分析。
周立江[9]（2016）在《肺积宁方对Lewis肺癌抗肿瘤作用及自噬效应的实验研究》文中指出目的:通过体外实验,研究肺积宁方含药血清对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响,并检测与凋亡密切相关的自噬基因Beclin1、LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ、Atg5蛋白水平表达及RNA水平的影响,探讨肺积宁方的抗癌作用及其对自噬的关系;并通过体内实验,运用裸鼠lewis移植瘤模型,分析肺积宁方在体内代谢后抗癌效果,观察其对Lewis肺癌细胞形态学影响、对自噬相关基因Beclin1、LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ、Atg5蛋白表达的影响。最终通过体内体外实验,了解肺积宁方对Lewis肺癌细胞抗癌效果及其作用机制。材料与方法:体外实验:制备含药血清,作用于Lewis肺癌细胞。40只大鼠按随机数字表法分为肺积宁方高剂量组、肺积宁方大剂量组、肺积宁方中剂量组、肺积宁方低剂量组和对照组。各组动物分别给予高、大、中、低剂量组肺积宁方及等量生理盐水灌胃,每天1次,连续3天,第3天晚上禁食不禁水12h,次日断头取血;用铡刀断头取血,制备肺积宁方含药血清。MTT法检测肺积宁方含药血清对Lewis肺癌细胞的增殖抑制效应,分为肺积宁方含药血清高剂量组、含药血清大剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组和对照血清组。同时设置不加细胞的空白孔。分别加不同浓度肺积宁方含药血清及正常对照组含药血清,分别于培养24 h、48 h、72h收集细胞进行MTT检测,观察肺积宁方含药血清抑制Lewis肺癌细胞增殖的最佳药量和作用时间,筛选出最佳含药血清剂量组,进行后续实验;流式细胞术检测对照组,肺积宁方组,顺铂组,联合组作用48h,细胞凋亡率。GFP-LC3转染定位法检测各组细胞自噬情况:将Lewis细胞以6×105细胞/孔的密度接种于6孔板,分为4组,对照组每孔加入含20%对照组血清DMEM培养液、肺积宁方组为20%肺积宁方含药血清DMEM培养液、顺铂（1μg/ml）组、联合组（20%肺积宁方含药血清+顺铂1μg/ml）。将GFP-LC3转染后的Lewis肺癌细胞正常培养条件下培养24 h,对照组加对照血清、肺积宁方组加肺积宁方含药血清、顺铂组加顺铂、联合组加顺铂和肺积宁方含药血清。正常培养24h,荧光显微镜下观察,调整显微镜发射波长395nm,激发滤色镜的波长509nm,拍照,计数。免疫印迹法检测Beclin1蛋白、Atg5和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的比例来判断自噬是否被诱导,对照组每孔加入含20%对照组血清DMEM培养液、肺积宁方组为20%肺积宁方含药血清DMEM培养液、顺铂组为顺铂（1μg/ml）组、联合组（20%肺积宁方含药血清+顺铂1μg/ml）,培养48h,收集细胞。免疫印迹的定量,用Bio-Rad提供的分析软件进行灰度分析。计算Beclin1、LC3B-I、LC3BII、Ag5和内参照β-actin比值,评价自噬情况。real time PCR检测Beclin1、LC3B-Ⅱ、Atg5的m RNA表达。体内实验:建立裸鼠荷瘤模型,Lewis瘤株,液氮保存,于37℃,水浴中复苏,放入37℃、5%C02细胞培养箱中,台盼蓝染色观察记录活细胞数（>95%）,调整细胞浓度至1x107/m1的瘤细胞悬液,碘伏消毒,使用1ml注射器,在每只小鼠右腋窝皮下接种瘤细胞0.2ml,共接种50只。一般状态及自主活动次数观察:每日观察精神、饮食、活动、大小便等一般情况,每隔两日称小鼠体重,分别于用药前、d8、d17检测小鼠活动,于每天的同一时刻,小鼠自主活动测试仪测小鼠平行移动和站立次数,计算出每组裸鼠每分钟自主活动次数。实验结束,剥离瘤体,称瘤重及抑瘤率:抑瘤率=（对照组平均瘤重一实验组平均瘤重）/对照组平均瘤重x100%,肿瘤组织病理形态学观察,各组瘤组织,包埋,完成石蜡组织块制作,用显微镜观察染色结果:细胞核呈现鲜艳的蓝色,细胞质及细胞间质呈粉红至红色。透射电镜观察瘤组织细胞的自噬小体,将取下的瘤组织快速切成1mm3大小,固定,超薄（70nm）切片,铀、铅双重染色,电镜下观察瘤组织细胞中的自噬小体,照相、记录。Western blotting检测瘤组织中Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Atg5的蛋白表达。结果:1.肺积宁方含药血清对Lewis肺癌细胞增殖的影响肺积宁方含药血清对Lewis肺癌细胞的增殖有显着抑制作用,同一时间随着浓度的增加或者同一种浓度随着时间的延长其抑瘤作用增强（P<0.01）。分别在24h,48h,72h检测对lewis细胞的抑制作用,结果发现和对照组相比,肺积宁方含药血清抑制Lewis细胞的增殖,且抑制效果随着浓度、时间的增加而增强。中剂量组抑制率在24h、48h时相抑制率分别为19±1.84%,24±1.93%,与对照组的15±1.08%,20±2.06%比较,均有统计学显着差异（P<0.05）,并且其抑制效果有随着浓度增加和时间延长而增强的趋势。大剂量组的抑制率分别为28±2.03%、32±2.04%,与中计量组比较有明显增加（P<0.05）。高剂量组在各个时相的抑制率与大剂量组比较,均无统计学意义。其最佳含药血清剂量组为大剂量组,进行后续实验。2.肺积宁方含药血清与顺铂联合对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用,肺积宁方组在不同作用时间,第24h、48h、72h抑制率分别为28%、32%、33%;顺铂组42%、66%、75%;联合组为58%、86%、91%。3.流式细胞仪检测流式细胞术检测对照组,肺积宁方组,顺铂组,联合组作用48h,细胞凋亡率,对照组、肺积宁方组、顺铂组及联合组对Lewsi肺癌细胞作用48h后的凋亡率分别为3.20%、10.36%、18.31%、30.18%,凋亡率以联合组作用为最高。与对照组比较,肺积宁方组促进凋亡作用明显,P<0.01;与顺铂组比,联合组明显提高了凋亡比例,统计学差异显着,P<0.01。处于G0/G1期,肺积宁方组处于此周期细胞较多比例为38.69%,顺铂组为56.12%,联合组最高,68.35%。4.自噬GFP-LC3转染及计数结果显示,对照组细胞中GFP-LC3融合蛋白弥散在包浆中,但代表自噬体的荧光斑点很少观察到;肺积宁方组有较为明显的绿色荧光聚集,可以观察到自噬体形成,荧光的强度比对照组明显高亮。经肺积宁方含药血清处理的,大多数细胞发生自噬（37.5%）,而对照组自噬率较低（17.6%）,具有显着差异,P<0.05。与顺铂组的自噬率（56.4%）相比,联合组的荧光斑点也明显增多,自噬发生率77.9%,并进行统计分析,两组差异明显,P<0.05。5.Western blotting检测Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-I、Atg5的变化免疫印迹法检测结果显示:肺积宁组较对照组Beclin1、Atg5蛋白表达显着增强,灰度值分别为Beclin1（0.38 VS 0.24）,Atg5（0.31 VS 0.18）。LC3B-Ⅱ/LC3B-I灰度值比值（0.52 VS 0.2）,差异显着,P<0.05。联合组与顺铂组比较,Beclin1（0.62 VS0.44）、Atg5（0.63 VS 0.41）也表达增强,LC3B-Ⅱ/LC3B-I灰度值比值上升（0.98 VS0.81）,均有显着差异（P<0.05）。6.real time PCR检测Beclin1、LC3B-Ⅱ、Atg5的m RNA表达引物验证,各引物扩增曲线均正常,溶解曲线无杂峰,均单峰,平均溶解温度一致,具有特异性。real time PCR结果提示,肺积宁方组细胞中的Beclin1、LC3B-Ⅱ、Ag5的m RNA表达增强,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;联合组细胞的Beclin1、LC3B-Ⅱ、Ag5的m RNA表达也明显高于顺铂组,差异显着（<0.05）。7.裸鼠成瘤情况、一般状态;各组药物对肿瘤生长的影响各组裸鼠瘤体大小较为相似、均衡。在平均肿瘤体积长到100mm3时,给药。B组（肺积宁方低剂量组）和C组（高剂量组）体重增长较为稳定,高低剂量组相差不大,精神及活动保持较好;A组（对照组）早期体重变化不明显,d10开始略有下降;D组（顺铂组）在给药3天后体重下降明显,精神萎靡,活动差;E组体重下降,与D组相比较下降较缓,但比B组和C组明显,后期下降不明现,精神和活动状态较D组表现好。B组和C组（单用肺积宁方组）自主活动次数较A组活跃,B组和C组比较,差异不显着;E组与D组比较,自主活动次数明显有优势。8.肺积宁方对裸鼠Lewis移植肿瘤生长的影响:B组、C组、D组和E组的肿瘤重量均低于对照组,与对照组比较有显着差异（p=0.000﹤0.01）,B组瘤重较C组要轻,但差异不显着;其中E组的瘤重最轻,明显低于单独用药组（p﹤0.01）,D组的瘤重组低于B组和C组,有统计学差异（p=0.031﹤0.05）。B组、C组、D和E组的抑瘤率分别为33.7%、40.6%、56.6%、66.9%,说明肺积宁方对Lewis移植肿瘤的生长有抑制作用,并与顺铂有协同作用。9.各组裸鼠移植瘤HE染色结果:肉眼瘤组织,较为规整,剥离较容易。部分瘤体的外区域可见坏死。HE染色光镜下可见,A组肿瘤细胞大,排列较为杂乱,紧密,核大深染,核浆比例失衡,处于分裂象细胞较多;B组及C组,肿瘤细胞大小较稍规整,可见坏死细胞明显较多,异型性较少见;D组可见大量坏死,可见少量纤维组织;E组坏死细胞大量出现,肿瘤细胞较小,分裂象比较少见,且周围有大量的淋巴细胞,白细胞浸润。10.各组裸鼠移植瘤电镜透视观察自噬小体各组均可见双层膜包裹的自噬体,可见典型的凋亡小体,其由膜包绕,小体内可见核的残片及细胞器。其中B组和C组可见较多散在的自噬体,D组也可见胞质内大量空泡,E组最为多见。依次增多:A组、B组、C组、D组、E组。11.Westen blot检测瘤组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ、Atg5表达水平。采用Western blot蛋白免疫印迹法,检测各组裸鼠抑制瘤组织中自噬相关基因Beclin1、LC3B-Ⅱ、Atg5的蛋白表达水平。Beclin1、LC3B-Ⅱ、Atg5蛋白相对灰度值,B组分别为0.63、0.46、0.82,和C组的0.65、0.48、1.0比较无差异,P>0.05;B、C两组与A组0.42、0.38、0.43比较,显着增高,P<0.05;Beclin1、LC3B-Ⅱ、Atg5蛋白相对灰度值在E组的统计值0.80、0.78、1.3,显着高于D组0.78、0.62、1.0,P<0.05。结论:1.肺积宁方含药血清能抑制Lewis肺癌细胞增殖,并能促进其凋亡。2.肺积宁方含药血清诱导Lewis肺癌细胞自噬,增强Beclin1、LC3B-Ⅱ、Atg5蛋白和m RNA水平的表达,提高LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比例。3.肺积宁方能改善荷瘤裸鼠的一般状态、增加自主活动次数,抑制荷瘤裸鼠的肿瘤生长。4.肺积宁方上调荷瘤裸鼠瘤组织中Beclin1、LC3BB-Ⅱ、Atg5蛋白的表达,提高LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比例。5.肺积宁方具有抑制肿瘤作用,可能与诱导自噬有关。
刘伟华,李丹,谢坤霞,王晶晶,肖延风[10]（2015）在《三氧化二砷对肿瘤血管新生作用的研究进展》文中研究说明三氧化二砷（As2O3）是一种致癌剂,其适当剂量对肿瘤疗效明显。近年来的研究表明As2O3抗肿瘤的作用机制之一是抑制新生血管形成,使肿瘤细胞生长受到抑制。与此同时,环境污染中砷化物的致癌机制也受到关注。本文就近年来As2O3在抗肿瘤血管形成的作用机制,以及砷致癌性与血管生成相关性的研究加以阐述。
二、三氧化二砷诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其部分机制探讨（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、三氧化二砷诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其部分机制探讨（论文提纲范文）
（1）巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素及其配伍对胃癌微环境中免疫细胞调控作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 第一节 现代医学对胃癌微环境及相关免疫细胞的研究概述 |
| 1、现代医学对肿瘤微环境的认识 |
| 2、肿瘤相关巨噬细胞与胃癌发生发展密切相关 |
| 3、自然杀伤细胞在胃癌治疗中潜力巨大 |
| 4、肿瘤相关巨噬细胞与自然杀伤细胞在胃癌治疗中的关系 |
| 第二节 中医学对胃癌微环境及相关免疫细胞的研究概述 |
| 1、中医学对肿瘤微环境的认识 |
| 2、中医药调控肿瘤相关巨噬细胞的研究进展 |
| 3、中医药调控自然杀伤细胞的研究进展 |
| 第三节 三物白散抗肿瘤研究进展 |
| 1、三物白散复方抗肿瘤研究进展 |
| 2、三物白散单味药抗肿瘤研究进展 |
| 3、三物白散主要成分研究进展 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一节 肿瘤相关巨噬细胞的诱导与鉴定 |
| 1、实验材料 |
| 2、实验方法 |
| 3、实验结果 |
| 4、讨论 |
| 第二节 巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素对实验细胞的安全浓度与效阈浓度 |
| 1、实验材料 |
| 2、实验方法 |
| 3、实验结果 |
| 4、讨论 |
| 第三节 巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素配伍对实验细胞的安全浓度与效阈浓度 |
| 1、实验材料 |
| 2、实验方法 |
| 3、实验结果 |
| 4、讨论 |
| 第四节 胃癌微环境的体外模型构建 |
| 1、实验材料 |
| 2、实验方法 |
| 3、实验结果 |
| 4、讨论 |
| 第五节 巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素及配伍调控胃癌微环境免疫细胞的作用机制 |
| 1、实验材料 |
| 2、实验方法 |
| 3、实验结果 |
| 4、讨论 |
| 小结 |
| 一、论文研究结果 |
| 二、论文创新性 |
| 三、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（2）运化毒邪方及其有效成分控制胃癌的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第1章 从毒邪治疗胃癌理论架构 |
| 1.1 毒邪理论治疗肿瘤源流及辨治要法 |
| 1.1.1 毒邪理论治疗肿瘤源流 |
| 1.1.2 毒邪理论辨治肿瘤要法 |
| 1.1.2.1 扶正祛毒 |
| 1.1.2.2 清热解毒 |
| 1.1.2.3 理气排毒 |
| 1.1.2.4 祛瘀化毒 |
| 1.1.2.5 化痰散毒 |
| 1.1.2.6 祛风摄毒 |
| 1.1.2.7 泄浊解毒 |
| 1.1.2.8 安邪休毒 |
| 1.1.2.9 灭虫化毒 |
| 1.1.2.10 以毒攻毒 |
| 1.1.3 小结 |
| 参考文献 |
| 1.2 从“脾主运化”理论探讨胃癌论治 |
| 1.2.1 “脾主运化”藏象理论的渊源 |
| 1.2.2 胃癌重要病机——脾失运化,正虚毒犯 |
| 1.2.3 从“脾主运化”论治胃癌方略 |
| 1.2.3.1 固本祛毒 |
| 1.2.3.2 运化食毒 |
| 1.2.3.3 运化痰毒 |
| 1.2.3.4 运气化毒 |
| 1.2.3.5 其他 |
| 1.2.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第2章 运化毒邪方对进展期胃癌复发转移干预的临床研究 |
| 2.1 资料与方法 |
| 2.1.1 一般资料 |
| 2.1.2 中医肿瘤样本库构建 |
| 2.1.3 研究方法及分组 |
| 2.1.4 临床疗效评定标准 |
| 2.1.5 观察指标 |
| 2.1.6 不良反应观察 |
| 2.1.7 随访方式 |
| 2.1.8 试验监管 |
| 2.1.9 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 数据库构建情况 |
| 2.2.2 病例资料分析描述 |
| 2.2.3 两组临床疗效比较 |
| 2.2.4 两组KPS、ECOG评分和血清肿瘤标记物比较 |
| 2.2.5 两组不良反应比较 |
| 2.2.6 两组一年生存率比较 |
| 2.2.7 单因素分析 |
| 2.2.8 多因素COX比例风险模型分析 |
| 2.2.9 两组无疾病进展生存期比较 |
| 2.2.10 两组血清代谢组学比较 |
| 2.3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第3章 运化毒邪方对胃癌生长及介导CLAUDIN-4调控上皮间质转化信号通路的作用 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 药物 |
| 3.1.2 细胞株 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 临床标本 |
| 3.1.5 实验动物 |
| 3.1.6 仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 人胃癌细胞培养 |
| 3.2.2 MTT比色法检测对人胃癌细胞增殖能力的影响 |
| 3.2.3 划痕实验检测细胞迁移 |
| 3.2.4 建立PDTX模型 |
| 3.2.5 动物分组及给药 |
| 3.2.6 肿瘤体积及质量测定 |
| 3.2.7 Western blot检测GSK3β,VEGF-C,Claudin-4蛋白表达 |
| 3.2.8 qPCR检测GSK3β,VEGF-C,Claudin-4 mRNA的表达 |
| 3.2.9 统计学处理 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 对AGS、BGC-803、SGC-7901细胞增殖的影响 |
| 3.3.2 对AGS、BGC803、SGC7901细胞迁移能力的影响 |
| 3.3.3 PDTX模型成瘤情况 |
| 3.3.4 对移植瘤生长的影响 |
| 3.3.5 对Claudin-4,VEGF-C,GSK3β蛋白表达的影响 |
| 3.3.6 对Claudin-4、VEGF-C、GSK3βmRNA表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第4章 基于高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术的运化毒邪方化学成分研究 |
| 4.1 仪器与材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 色谱条件 |
| 4.2.2 质谱条件 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 运化毒邪方化学活性成分检测 |
| 4.3.2 运化毒邪方化学活性成分之一人参皂苷Rg3质谱图信息 |
| 4.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第5章 运化毒邪方主要活性成分之一人参皂苷RG3对胃癌生长及CLAUDIN-4/VEGF-C/GSK3B通路调控作用 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 药物 |
| 5.1.2 细胞株 |
| 5.1.3 主要试剂 |
| 5.1.4 临床标本 |
| 5.1.5 实验动物 |
| 5.1.6 仪器 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 人胃癌细胞培养 |
| 5.2.2 MTT比色法检测对人胃癌细胞增殖能力的影响 |
| 5.2.3 划痕实验检测细胞迁移 |
| 5.2.4 建立PDTX模型 |
| 5.2.5 动物分组及绘药 |
| 5.2.6 肿瘤体积及质量测定 |
| 5.2.7 Western blot检测GSK3β、VEGF-C、Claudin-4蛋白表达 |
| 5.2.8 qPCR检测GSK3β、VEGF-C、Claudin-4 mRNA的表达 |
| 5.2.9 统计学处理 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 对AGS、BGC-803、SGC-7901细胞增殖的影响 |
| 5.3.2 对BGC803、AGS、SGC7901细胞迁移力的影响 |
| 5.3.3 对移植瘤生长的影响 |
| 5.3.4 对Claudin-4/VEGF-C/GSK3β通路蛋白表达的影响 |
| 5.3.5 对Claudin-4/VEGF-C/GSK3β通路mRNA表达的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第6章 VEGFR3靶向性纳米人参皂甙RG3对原位胃癌小鼠移植瘤的影响 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 药物 |
| 6.1.2 细胞株 |
| 6.1.3 主要试剂 |
| 6.1.4 实验动物 |
| 6.1.5 仪器 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 人胃癌细胞培养 |
| 6.2.2 胃癌裸鼠原位荧光移植模型的建立 |
| 6.2.3 动物给药及动态观察 |
| 6.2.4 免疫组化检测 |
| 6.2.5 RT-PCR检测基因表达 |
| 6.2.6 统计学处理 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 对移植瘤生长的影响 |
| 6.3.2 对淋巴结转移的影响 |
| 6.3.3 对VEGF-C/VEDF-D/VEGFR-3通路蛋白表达的影响 |
| 6.3.4 对VEGF-C/VEDF-D/VEGFR-3通路mRNA表达的影响 |
| 6.3.5 对体重和毒性观察 |
| 6.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 综述 肿瘤毒邪论治研宄现状 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间公开发表的论着及取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）三氧化二砷联合双氢青蒿素抗急性单核细胞白血病的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语名词对照表 |
| 文献综述 |
| 1. 急性单核细胞白血病概述 |
| 2. 三氧化二砷抗白血病的机制研究 |
| 3. 双氢青蒿素抗白血病的机制研究 |
| 前言 |
| 第一部分 三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病的体外研究 |
| 1. 三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病细胞THP-1细胞的研究 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞 |
| 1.1.2 药物与试剂 |
| 1.1.3 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.2 药物的配制 |
| 1.2.3 MTT法检测三氧化二砷对THP-1细胞生长的影响 |
| 1.2.4 MTT法检测双氢青蒿素对THP-1细胞生长的影响 |
| 1.2.5 MTT法检测三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞生长的影响 |
| 1.2.6 PI单染法分析三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞周期分布的影响 |
| 1.2.7 Annexin V-FITC/ PI双染法分析三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞凋亡的影响 |
| 1.2.8 Western blotting测定三氧化二砷联合双氢青蒿素对相关凋亡蛋白表达的影响 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 三氧化二砷对THP-1细胞生长的影响 |
| 1.3.2 双氢青蒿素对THP-1细胞生长的影响 |
| 1.3.3 三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞生长的影响 |
| 1.3.4 三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞周期分布的影响 |
| 1.3.5 三氧化二砷联合双氢青蒿素对THP-1细胞凋亡的影响 |
| 1.3.6 三氧化二砷联合双氢青蒿素对相关凋亡蛋白表达的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 2. 三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病细胞SHI-1细胞的研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞 |
| 2.1.2 药品与试剂 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 MTT法检测三氧化二砷对SHI-1细胞生长的影响 |
| 2.2.3 MTT法检测双氢青蒿素对SHI-1细胞生长的影响 |
| 2.2.4 MTT法检测三氧化二砷联合双氢青蒿素对SHI-1细胞生长的影响 |
| 2.2.5 Annexin V-FITC/ PI双染法分析三氧化二砷对SHI-1细胞凋亡的影响 |
| 2.2.6 Annexin V-FITC/ PI双染法分析双氢青蒿素对SHI-1细胞凋亡的影响 |
| 2.2.7 Annexin V-FITC/ PI双染法分析三氧化二砷联合双氢青蒿素对SHI-1细胞凋亡的影响 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 三氧化二砷对SHI-1细胞生长的影响 |
| 2.3.2 双氢青蒿素对SHI-1细胞生长的影响 |
| 2.3.3 三氧化二砷联合双氢青蒿素对SHI-1细胞生长的影响 |
| 2.2.4 三氧化二砷对SHI-1细胞凋亡的影响 |
| 2.2.5 双氢青蒿素对SHI-1细胞凋亡的影响 |
| 2.2.6 三氧化二砷联合双氢青蒿素对SHI-1细胞凋亡的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第二部分 三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病的体内研究 |
| 1. 急性单核细胞白血病模型的建立 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 动物 |
| 1.1.2 细胞 |
| 1.1.3 试剂 |
| 1.1.4 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.2 动物分组 |
| 1.2.3 接种 |
| 1.2.4 移植接种 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 接种结果 |
| 1.3.2 移植接种结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 2. 三氧化二砷联合双氢青蒿素对急性单核细胞白血病SHI-1细胞模型的治疗作用研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 动物 |
| 2.1.2 细胞 |
| 2.1.3 试剂 |
| 2.1.4 仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 药物配制 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 建立模型 |
| 2.2.4 动物分组 |
| 2.2.5 给药及肿瘤测量 |
| 2.2.6 病理检查 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 肿瘤体积变化 |
| 2.3.2 肿瘤重量比较 |
| 2.3.3 病理检查结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 结论 |
| 硕士期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（5）γ-生育三烯酚通过调节人胃癌细胞能量代谢抑制细胞增殖作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 生育三烯酚对胃癌细胞增殖、凋亡的作用的研究 |
| 1 引言 |
| 2 研究对象和方法 |
| 2.1 细胞来源 |
| 2.2 主要材料与试剂 |
| 2.3 主要仪器和设备 |
| 2.4 细胞培养 |
| 2.4.1 细胞传代(酶消化法) |
| 2.4.2 细胞冻存 |
| 2.4.3 细胞复苏 |
| 2.4.4 细胞换液 |
| 2.5细胞功能实验 |
| 2.5.1 CCK-8 实验 |
| 2.5.2 FCM法分析细胞凋亡情况 |
| 2.6 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 γ-T3及α-TOC对肿瘤细胞增殖能力的影响 |
| 3.2 γ-T3 诱导SGC-7901 细胞凋亡 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 生育三烯酚抑制胃癌细胞增殖及诱导胃癌细胞凋亡作用机制探讨 |
| 1 引言 |
| 2 研究对象和方法 |
| 2.1 细胞来源 |
| 2.2 主要材料与试剂 |
| 2.3 主要仪器和设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 细胞培养 |
| 2.4.2 JC-1 荧光探针法检测线粒体膜电位 |
| 2.4.3 氧耗率(OCR)的测量 |
| 2.4.4 DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS水平 |
| 2.4.5 CCK-8 实验 |
| 2.4.6 细胞总蛋白的提取 |
| 2.4.7 BCA法测定蛋白浓度 |
| 2.4.8 Western Blot技术 |
| 2.4.9 细胞外酸化率的测量(ECAR) |
| 2.4.10 萤火虫荧光素酶法检测ATP含量 |
| 2.4.11 ATP速率检测实验 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 γ-T3 抑制Δψm,线粒体OXPHOS,并诱导胃癌细胞中的ROS产生 |
| 3.2 γ-T3 对细胞凋亡及增殖能力的影响 |
| 3.3 γ-T3作用的SGC-7901和MGC-803细胞中NDUFB8、SDHB、UQCRC2、COX4I1和ATP5F1A的表达情况 |
| 3.4 γ-T3 对胃癌细胞糖酵解速率的影响 |
| 3.5 γ-T3 抑制细胞ATP水平和ATP产生速率 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（6）芩黄合剂治疗非霍奇金淋巴瘤的临床评价及初步机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 绪论 |
| 1 淋巴瘤治疗概况 |
| 1.1 淋巴瘤西医诊治概况 |
| 1.2 淋巴瘤中医诊治概况 |
| 2 淋巴瘤的中医临床研究方法 |
| 3 本课题可以借鉴的中药方剂现代研究方法 |
| 4 淋巴瘤的中医药相关细胞层面实验研究 |
| 5 芩黄合剂相关黄酮类化合物诱导肿瘤细胞凋亡或自噬的研究 |
| 6 本课题的研究思路 |
| 第二部分 基于真实世界研究方法的芩黄合剂对非霍奇金淋巴瘤患者的生活质量及免疫功能的作用评价研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 诊断标准 |
| 1.1.1 西医诊断标准 |
| 1.1.2 中医诊断标准 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 病例资料 |
| 1.5 治疗方法 |
| 1.5.1 常规综合方案 |
| 1.5.2 中医治疗方案 |
| 1.6 观察方法 |
| 1.6.1 卡氏评分 |
| 1.6.2 生活质量评分 |
| 1.6.3 细胞、体液免疫及免疫相关细胞因子检测 |
| 1.6.4 不良反应及安全性检测 |
| 1.7 随访方案 |
| 1.8 统计方法 |
| 2 治疗结果 |
| 2.1 观察组与对照组患者KPS评分比较 |
| 2.2 观察组与对照组患者生活质量(EORTC-QLQ-C30)评分比较 |
| 2.3 观察组与对照组患者治疗前后细胞免疫指标变化比较 |
| 2.4 观察组与对照组患者治疗前后免疫球蛋白指标变化比较 |
| 2.5 观察组与对照组患者治疗前后免疫相关细胞因子指标变化比较 |
| 2.6 不良反应及安全性评价 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 部分黄酮类化合物对淋巴瘤SUDHL-4 细胞的抑制作用及机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验仪器、设备与耗材 |
| 1.2 实验试剂与药物 |
| 1.3 试验细胞株 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 主要试剂的配制 |
| 2.2 细胞复苏、传代、冻存 |
| 2.3 CCK-8 细胞增殖检测 |
| 2.4 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡 |
| 2.5 DCFH-DA荧光探针检测活性氧水平 |
| 2.6 蛋白质免疫印迹 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 山柰素、槲皮素、汉黄芩苷、汉黄芩素、木犀草素、水飞蓟素、芹菜素、染料木素对淋巴瘤SUDHL-4 细胞增殖的影响及溶解度观察。 |
| 3.2 汉黄芩素、木犀草素、水飞蓟素对淋巴瘤SUDHL-4 细胞增殖的影响及IC50 值的测算。 |
| 3.3 汉黄芩素对SUDHL-4 细胞凋亡的影响 |
| 3.4 木犀草素对SUDHL-4 细胞凋亡的影响 |
| 3.5 水飞蓟素对SUDHL-4 细胞凋亡的影响 |
| 3.6 汉黄芩素对SUDHL-4 细胞内ROS的影响 |
| 3.7 木犀草素对SUDHL-4 细胞内ROS的影响 |
| 3.8 汉黄芩素和NAC对 SUDHL-4 细胞内ROS的影响 |
| 3.9 汉黄芩素对SUDHL-4 细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.10 木犀草素对SUDHL-4 细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.11 水飞蓟素对SUDHL-4 细胞自噬相关蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 结论与课题总结 |
| 参考文献 |
| 附录一 中医问卷表 |
| 附录二 中文版欧洲癌症研究与治疗协会生活质量调查问卷(EORTC-QLQ-C30) |
| 附录三 不良事件报告表 |
| 附录四 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
（7）表没食子儿茶素没食子酸酯在逆转胃癌细胞耐药中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 胃癌耐药细胞株的建立及鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 胃癌耐药细胞株与亲代细胞株形态学特征无差异 |
| 2 MTT和克隆形成实验检测耐药细胞株增殖活力 |
| 3 Western blot检测胃癌耐药细胞株耐药相关蛋白 |
| 3 结论 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 EGCG逆转胃癌耐药的细胞实验 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 MTT和克隆形成实验检测EGCG对耐药细胞株增殖活力的影响 |
| 2.2 流式细胞仪检测胃癌耐药细胞株凋亡率 |
| 2.3 Western blot检测胃癌耐药细胞株凋亡相关蛋白 |
| 2.4 RT-PCR和Western blot检测耐药相关蛋白 |
| 2.5 ELISA和Western blot检测信号通路相关蛋白 |
| 3 结论 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 EGCG逆转胃癌耐药的动物实验 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 胃癌耐药细胞株SGC7901/5-FU裸鼠移植瘤模型的建立 |
| 2.2 EGCG对裸鼠移植瘤的生长抑制作用 |
| 2.3 免疫组化检测耐药相关和信号通路相关蛋白的表达 |
| 3 结论 |
| 4 讨论 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的成果 |
| 缩略词索引 |
| 致谢 |
（8）中药抗胃癌的现代药理机制（论文提纲范文）
| 1 抑制胃癌细胞的生长与增殖 |
| 2 影响细胞周期与诱导细胞凋亡 |
| 3 影响细胞的侵袭转移 |
| 4 逆转肿瘤多药耐药性 |
| 5 调节机体免疫机能 |
| 6 抑制端粒酶活性 |
| 7 展望 |
（9）肺积宁方对Lewis肺癌抗肿瘤作用及自噬效应的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 肺积宁方含药血清对Lewsi肺癌细胞增殖和凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 肺积宁方含药血清影响Lewis肺癌细胞自噬及其作用机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 肺积宁方对裸鼠移植瘤模型抑瘤作用及自噬相关蛋白的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（10）三氧化二砷对肿瘤血管新生作用的研究进展（论文提纲范文）
| 1As2O3对肿瘤血管生成的影响 |
| 2As2O3对血管内皮细胞的影响 |
| 3As2O3对肿瘤血管生成的调控因子的影响 |
| 4砷的致癌性与血管生成 |
四、三氧化二砷诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其部分机制探讨（论文参考文献）
- [1]巴豆苷、桔梗皂苷D、贝母甲素及其配伍对胃癌微环境中免疫细胞调控作用研究[D]. 楚毓博. 南京中医药大学, 2021(01)
- [2]运化毒邪方及其有效成分控制胃癌的研究[D]. 戴小军. 扬州大学, 2020
- [3]As2O3对胃癌侵袭转移及血管形成的抑制作用及作用机制探讨[J]. 原伟伟,黄晋熙,李高峰,陈小兵. 中国实用医刊, 2020(18)
- [4]三氧化二砷联合双氢青蒿素抗急性单核细胞白血病的实验研究[D]. 赵丽凤. 中国中医科学院, 2020(01)
- [5]γ-生育三烯酚通过调节人胃癌细胞能量代谢抑制细胞增殖作用研究[D]. 王海霞. 上海交通大学, 2019(06)
- [6]芩黄合剂治疗非霍奇金淋巴瘤的临床评价及初步机制研究[D]. 张洪. 上海交通大学, 2018(01)
- [7]表没食子儿茶素没食子酸酯在逆转胃癌细胞耐药中的作用及机制研究[D]. 唐鸿生. 南方医科大学, 2017(01)
- [8]中药抗胃癌的现代药理机制[J]. 王志新,邹玺,胡守友. 西部中医药, 2016(04)
- [9]肺积宁方对Lewis肺癌抗肿瘤作用及自噬效应的实验研究[D]. 周立江. 辽宁中医药大学, 2016(01)
- [10]三氧化二砷对肿瘤血管新生作用的研究进展[J]. 刘伟华,李丹,谢坤霞,王晶晶,肖延风. 国外医学(医学地理分册), 2015(03)